广东省自然科学基金(10151012001000002)
- 作品数：3 被引量：18H指数：3
- 相关作者：邝璐朱冰胡小云肖密丝王长兵更多>>
- 相关机构：广州市妇女儿童医疗中心广州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 2008年和2010年肠道病毒71型广州分离株全基因组序列分析被引量：10
- 2011年
- 目的研究2008年和2010年广州地区手足口病患者中肠道病毒7l型（EV71）病毒全基因组序列的基因型与变异特点。方法参照GenBank上EV71深圳株SHZH03（AY465356）基因组设计分段扩增引物，进行RT-PCR分段扩增EV71病毒基因组，PCR产物直接进行序列测定，用Clustal W／X、DNASTAR、MEGA4．1等软件分析基因组序列。结果克隆9株广州株EV71，病毒全基因组全长序列均为7405bp，提交到GenBank上的序列号为HQ456305、HQ456306、HQ456307、HQ456308、HQ456309、HQ456310、HQ456311、HQ456312、HQ4563i3。将9株广州株EV71与EV71的A、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4型及阜阳株全基因组核苷酸序列进行ClustalW比较，发现与C4a型阜阳株等同源性为98％～99％，与C4b同源性为91％～93％，与c1～c3同源性为82％～83％，与B3。B5同源性为81％～83％，与A型同源性为80％。将9株广州分离株EV71的VP1基因与EV71病毒A、B、C型进行ClustalW比较，同样是与C4a为98％-99％，与C4b同源性为92％～94％，与C1-C3的同源性为88％～89％，与B1～B5型同源性为83％～84％，与A型同源性为81％～82％。将9株广州株与EV71的A、B、C型VP1基因氨基酸序列进行Clustal W比对，发现VPI基因22位点的谷氨酰胺转变为组氨酸（0-H），聚合蛋白中213位点（S—T）和1764位点（V—I）也发生了氨基酸的点突变，P的213位点属于VP2基因，1764位点属于3D基因。结论2008年和2010年分离的9株广州株EV71属于C4a型，与阜阳株同源性为98％～99％，VP1基因22位点发生了点突变，聚合蛋白中213位点和1764位点也发生了氨基酸的点突变。
- 钟家禹朱冰华亮王长兵邝璐谢嘉慧陈翊
- 关键词：肠道病毒71基因组点突变
- 清道夫受体B2的原核表达及其产物的活性鉴定
- 目的:克隆并表达清道夫受体B2蛋白基因,鉴定表达产物及其免疫原性。方法:培养RD细胞,提取其m RNA经RT-PCR方法扩增出SCARB2蛋白基因片段,经克隆后,在PET28a表达系统中表达,表达产物经纯化后(用8mol...
- 许甜甜王长兵朱冰
- 关键词：肠道病毒71型清道夫受体原核表达免疫原性
- 文献传递
- 2010年广州地区儿童肠道病毒71型感染的分子流行病学研究被引量：5
- 2011年
- 目的了解广州地区2010年肠道病毒(EV)71病毒流行状况。方法设计肠道病毒71型实时荧光RT-PCR引物和TaqMan探针,运用TaqMan实时荧光RT-PCR技术,对2010年全年来医院就诊的疑似手口足病患儿送检标本20150份,进行肠道病毒71型荧光RT-PCR检测,同时,设计了扩增EV71病毒全基因组的引物,随机选取了5株病毒进行全基因组进行测定。结果在20150份临床标本中,EV71病毒的阳性为4780份,全年总的检出率为23.72%,每个月均有阳性检出;其中,EV71病毒阳性率较高的为4～7月份,最高检出率为6月份,达32.19%,最低检出率为10月份,为7.91%;扩增了5株广州株EV71病毒全基因组全长序列,提交到GenBank上,将5株广州株EV71病毒与EV71的A、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4型及阜阳株全基因组核苷酸序列进行ClustalW比较,发现与C4a型阜阳株等同源性为98.00%～99.00%,与C4b同源性为91.00%～93.00%,与C1-C3同源性为82.00%～83.00%,与B3、B4、B5同源性为81.00%～83.00%,与A型同源性为80.00%。结论 2010年广州地区手足口病的主要病原是肠道病毒71型,EV71病毒在2010年全年还是较普遍流行,全基因组序列分析表明,2010年分离的5株广州株EV71病毒属于C4a型。
- 朱冰钟家禹邝璐华亮肖密丝陈翊谢嘉慧张莹莹
- 关键词：肠道病毒71型流行病学
- 肠道病毒71型的快速纯化及其鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种简单、快速有效的从细胞培养物中纯化肠道病毒71(EV71)的方法。方法 EV71病毒在恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中增殖后,将获得的细胞培养物经反复冻融、聚乙二醇6000沉淀、超速离心、氯化铯垫层超速离心的方法纯化病毒。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和透射电镜(TEM)的方法对纯化病毒进行鉴定,并测定其感染性的滴度及回收率。结果 SDS-PAGE显示出3个条带,相对分子质量分别为3.6×103、3×103和2.6×103与EV71的VP1、VP2和VP3相符合。Westernblot证实为EV71特异性条带。经磷钨酸负染后电镜观察,能看到典型病毒颗粒。采用终浓度为10%的聚乙二醇6000沉淀后的病毒的感染性回收率为82.0%,再经氯化铯垫层超速离心后浓缩病毒的感染性回性率为29.0%。结论聚乙二醇6000沉淀结合氯化铯垫层超速离心的方法比氯化铯密度梯度区带离心方法更简便,易于操作,并且比单独聚乙二醇6000沉淀有更高的纯度,是一种简便、有效的病毒纯化方法。
- 胡小云朱冰王长兵邝璐肖密丝
- 关键词：肠道病毒71型病毒纯化超速离心
