广州市白云区科技计划项目(2009-SZ-40)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：李金龙高基民胡志明石小军法萍萍更多>>
- 相关机构：南方医科大学温州医学院更多>>
- 发文基金：广州市白云区科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SA/TNFα双功能融合蛋白的克隆、表达及活性研究
- 2010年
- 目的:制备链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白,并对其活性进行研究。方法:构建原核表达质粒pET24a-SA-TNFα和pET21a-TNFα-SA;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲合层析纯化后进行透析复性;流式细胞仪检测融合蛋白对生物素化MB49细胞的锚定活性,L929细胞杀伤实验检测融合蛋白的TNFα活性。结果:成功制备了两种链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白SA-TNFα和TNFα-SA;其表达量分别约占总蛋白的30%和23%,纯化效率均达90%以上;两种融合蛋白均能有效地锚定于生物素化的MB49细胞表面,其锚定效率分别为95%和92%;L929细胞杀伤实验显示SA-TNFα具备TNFα活性,但TNFα-SA不具备TNFα活性。结论:成功制备了具备双功能活性的链亲合素标记的TNFα融合蛋白,TNFα在该融合蛋白中的位置与其活性有重要的关系。
- 李金龙徐翠香胡志明高基民
- 关键词：人肿瘤坏死因子Α链亲和素融合蛋白
- mIL21-SA双功能融合蛋白锚定治疗膀胱癌实验研究
- 2012年
- 目的:制备链亲合素标记的鼠白细胞介素21融合蛋白(mIL21-SA),治疗小鼠表浅膀胱癌。方法:构建mIL21-SA-pET21质粒,BL21表达,Ni-NTA纯化,透析复性,Western blot鉴定,MTT法检测其对小鼠胸腺细胞的增殖作用,流式检测其对生物素化的MB49锚定修饰率。建立小鼠MB49表浅膀胱癌模型,将mIL21-SA锚定在小鼠膀胱表面进行治疗并观察小鼠存活时间。60d后对mIL21-SA治疗后存活小鼠进行二次攻击。结果:mIL21-SA可以促进T细胞增殖,且具有SA介导的高效结合已生物素化的MB49表面的功能(修饰率98.74%)。膀胱灌注60d后,mIL21-SA组有10只(10/25)存活,二次攻击后,仍有6只(6/10)存活。与对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:该实验研制了具有双重活性的mIL21-SA,mIL21-SA锚定修饰治疗表浅膀胱癌是一种有效的免疫治疗方法。
- 王菲胡志明法萍萍白莉石小军罗满生李金龙高基民
- 关键词：白细胞介素21表浅膀胱癌
