国家自然科学基金(81360067)
- 作品数：10 被引量：30H指数：3
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- HuD蛋白对肛门直肠畸形子鼠直肠末端肠神经系统的影响被引量：3
- 2016年
- 目的检测HuD蛋白在肛门直肠畸形（ARM）子鼠直肠末端组织中的表达，探讨其可能对肠壁神经系统（ENS）发育的影响。方法选用20只成年sD孕鼠，随机分为正常组和乙烯硫脲（ETU）实验组各10只，两组孕鼠在孕20d取出宫内所有子鼠，观察其大体形态及计算畸形率，并取出子鼠直肠末端采用苏木素-伊红（HE）染色观察直肠末端组织结构变化，免疫组织化学和Westernblot检测HuD蛋白在直肠末端的表达。结果正常组共产子鼠108只，存活率为100．0％，未见任何畸形发生；实验组共产子鼠94只，存活率为93．6％，存活子鼠中ARM发生率为96．8％。HE结果显示：正常组子鼠直肠末端组织结构分界清楚，胞质丰富，轴突清晰；ETU组中患ARM的子鼠各层组织结构分层不清，可见较多空腔，直肠末端黏膜下和肌间神经元数目较正常组明显减少[（143．60±14．93）个比（335．90±10．46）个，P〈0．01]。免疫组织化学和Westernblot结果显示ARM组子鼠直肠末端蛋白含量明显低于正常组（312．90±53．40比456．40±57．13；0．24±0．05比0．45±0．06，P〈0．01）。结论HuD蛋白在ARM子鼠直肠末端表达差异有统计学意义，可能参与并影响ENS的发育与成熟。
- 孔萌刘远梅金祝高明娟曲颜郑泽兵
- 关键词：肛门直肠畸形肠神经系统
- HuD蛋白和嘌呤受体亚型受体在中高位肛门直肠畸形患儿直肠末端的表达
- 2018年
- 目的观察HuD蛋白、嘌呤受体亚型（P2Y2）受体在中高位先天性肛门直肠畸形（ARM）患儿直肠末端以及正常结肠的表达，探讨两者对肠神经系统发育的影响。方法收集我院手术治疗中高位ARM患儿直肠末端标本25例（畸形组）；对照组15例。运用苏木素．伊红（HE）染色，免疫组织化学（IHC）、免疫荧光、Western blot检测2种蛋白的表达。结果免疫组织化学及免疫荧光显示HuD蛋白、P2Y2受体主要表达在肠肌问神经丛和黏膜下神经丛，正常对照组与畸形组HuD蛋白、P2Y2受体的积分吸光度（IA）值结果：43．48±7．11、3．70±1．21和18．83±3．65、8．49±2．68；两组HuD蛋白、P2Y2受体的M值结果：96．56±17．38、22．32±4．36和78．13±7．86、26．56±5．32；两组HuD蛋白、P2Y2受体相对定量结果：1．13±0．32、0．49±0．12和0．92±0．18、0．36±0．09，ARM组患儿直肠末端的表达明显低于正常结肠。Western blot定量结果表明畸形组中HuD、P2Y2蛋白表达低于正常组（P=0．030、0．030）。结论中高位ARM患儿直肠末端HuD蛋白、P2Y2受体的表达明显低于正常结肠，两者可能对ARM患儿肠神经系统发育有一定影响。
- 高明娟刘远梅姜琳耀毛羽晨郑泽兵曲颜
- 关键词：肛门直肠畸形肠神经系统嘌呤受体
- HuD蛋白在神经系统中的研究进展
- 2016年
- HuD蛋白是一种与果蝇属ELAV蛋白同源的高度保守的神经元特异性RNA结合蛋白Hu家族中的一员,是一种新近发现的神经元标志物和特异性抗原。Hu家族包括HuA、HuB、HuC和HuD。HuD蛋白与神经发育中的许多过程相关,在转录水平中调节神经元特异性基因表达,是神经元胚胎发育中生长锥突起形成延伸及成熟神经元存活必需的蛋白[1];同时,
- 姜琳耀刘远梅
- 关键词：蛋白质类神经元基因
- 胶质细胞源性神经营养因子及其酪氨酸激酶受体RET在不同胎龄先天性肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达被引量：3
- 2016年
- 目的观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及其酪氨酸激酶受体RET在不同胎龄先天性肛门直肠畸形（ARM）胎鼠直肠末端的表达和分布情况，探讨其对ARM胎鼠直肠末端肠神经系统发育的影响。方法SD孕鼠35只按简单随机法分为9 g/L盐水对照组（10只）和乙烯硫脲实验组（25只），2组孕鼠在孕16 d、孕18 d、孕20 d取出胎鼠，肉眼及解剖显微镜下将胎鼠分为9 g/L盐水对照组、乙烯硫脲对照组（未产生ARM胎鼠）、乙烯硫脲畸形组（ARM胎鼠）。应用HE染色观察各组胎鼠直肠末端肠神经节细胞形态并计数。应用免疫组织化学染色、Western blot法观察3组胎鼠在孕16 d、孕18 d、孕20 d直肠末端GDNF及受体RET分布情况。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组胎鼠在孕16 d、孕18 d、孕20 d直肠末端GDNF mRNA的表达情况。结果HE染色：3组胎鼠在孕16 d时肛门直肠末端各层发育不清晰，肌层见少量散在神经丛，细胞核小，分布稀疏，轴突及胞质少；在孕18 d和孕20 d时9 g/L盐水对照组、乙烯硫脲对照组胎鼠直肠末端浆膜层、肌层、黏膜下层、黏膜层及其腺体逐渐清晰可见，肌间及黏膜下神经丛逐渐增多（孕18 d：11.400±3.134、11.200±3.425；孕20 d：66.100±4.954、67.600±5.481），而乙烯硫脲畸形组层次不清，神经丛少（孕18 d：7.800±1.989；孕20 d：25.200±3.048），与2个对照组比较差异均有统计学意义（F＝7.591、271.833，P均〈0.05）。免疫组织化学染色结果：孕16 d时3组胎鼠GDNF及RET在肠壁各层表达尚不清晰，仅观察到极少量弱阳性细胞；在孕18 d和孕20 d时9 g/L盐水对照组和乙烯硫脲对照组直肠末端黏膜层、黏膜下及肌间神经丛中均有表达，随胚胎不断发育，表达强度逐渐增强，与2个对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。qRT-PCR：在孕16 d 3组GDNF mRNA比较，差异无统计学意义（P〉
- 曲颜刘远梅毛羽晨金祝高明娟郑泽兵
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子RET肠神经系统先天性肛门直肠畸形
- NGF及其受体TrkA、P75NTR在先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端的表达及意义被引量：2
- 2014年
- 先天性肛门直肠畸形（anorectal malformations，ARM）由于发病的多因素性和病理改变的复杂性，术后排便障碍发生率较高，确切机制不详。有研究表明与肛门闭锁末端肠神经系统（enteric nervous system，ENS）发育异常有关哪，
- 高明娟刘远梅毛羽晨孔萌郑泽兵曲颜
- 关键词：先天性肛门直肠畸形P75NTRTRKA畸形患儿NGF肠神经系统
- 胶质细胞源性神经营养因子在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达及意义
- 2014年
- 目的检测胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端组织中的表达，探讨其可能与肠壁神经系统发育的关系。方法SD大鼠数字随机分对照组和乙烯硫脲致畸ARM组，两组孕鼠在孕20d手术取出宫内胎鼠，对胎鼠盆腔会阴部矢状面HE染色，免疫组化、Western blot方法检测对照组和ARM胎鼠直肠末端GDNF蛋白定位及定量表达情况，qRT-PCR方法检测两组GDNFmRNA的表达差异。结果HE染色显示：ARM胎鼠肛门为一闭合盲端，无正常肛门结构，直肠盲端为增生鳞状上皮组织及增厚的肌层，各层组织结构分层不清，直肠末端黏膜下和肌间神经丛数目较对照组明显减少（43．10±8．60比88．90±10．65，P〈0．01）。免疫组化结果显示GDNF在对照组及ARM组直肠末端黏膜层，黏膜下及肌间神经丛中均有表达，ARM组平均积分光密度（IOD值）明显低于正常组（238．32±41．67比500．93±90．10，P〈0．01）。Westernblot及qRT-PCR结果显示在ARM组胎鼠直肠末端组织中GDNF总蛋白及mRNA明显低于对照组（0．43±0．09比0．61±0．06；72．00±33．47比125．17±66．28，P〈0．05）。结论GDNF在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端表达下调，可能与其肠壁神经系统发育不良有关。
- 孔萌刘远梅毛羽晨金祝高明娟郑泽兵曲颜
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子肠神经系统直肠
- 嘌呤受体亚型(P2Y2)在肛门直肠畸形动物模型直肠末端的表达被引量：2
- 2014年
- 目的检测嘌呤受体亚型(P2Y2)在肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠末端的表达情况,探讨其可能对肠壁神经系统发育的影响。方法 SD孕鼠随机分正常组和乙烯硫脲(ETU)实验组,两组孕鼠在孕20d取出宫内胎鼠直肠末端,应用HE染色观察直肠末端组织结构变化,Western blot和qRT-PCR方法检测P2Y2在直肠末端的表达情况。结果正常组胎鼠直肠末端组织结构分界清楚,黏膜下和肌间神经元细胞数目多,胞浆丰富,轴突清晰;ETU组中患ARM的胎鼠各层组织结构分层不清,可见较多空腔,神经元细胞数目较少。Western blot和qRT-PCR结果显示ARM组胎鼠直肠末端蛋白含量及mRNA量明显低于正常组(0.23±0.06比0.42±0.05;49.40±26.49比98.53±52.25,P<0.05)。结论 P2Y2可能参与ARM胎鼠直肠末端肠神经系统的发育。
- 孔萌刘远梅金祝曲颜郑泽兵
- 关键词：肛门直肠畸形胎鼠肠神经系统
- 神经生长因子及其受体在先天性肛门直肠畸形患儿直肠末端表达的下调被引量：2
- 2014年
- 目的观察神经生长因子（nerve growth factor，NGF）及其受体（TrkA、P75NTR）在先天性肛门直肠畸形（anorectal malformation，ARM）患儿直肠末端的表达，探讨对其肠神经系统发育的影响。方法收集2011年1月至2013年1月遵义医学院附属医院诊治的ARM患儿直肠末端标本30例。其中，男24例，女6例；高位ARM15例，中位ARM6例，低位ARM9例；手术年龄2d～13个月，平均1.4个月。一期腹会阴肛门成形8例；分期肛门成形13例，包括：腹腔镜辅助肛门成形7例，腹会阴肛门成形2例，后矢状入路肛门成形术4例，会阴肛门成形9例。肛门成形术中取直肠末端标本，运用苏木素／伊红（HE）染色计数直肠末端黏膜下及肌间神经丛数量，免疫组织化学（IHC）及实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测NGF及其受体（TrkA、P75NTR）在低位ARM和中高位ARM患儿直肠末端的表达情况。结果HE染色：低位ARM患儿直肠末端黏膜下及肌间神经丛分布密集，神经丛面积大，节细胞数量多；中高位ARM患儿神经丛分布明显稀疏，神经丛数量较低位ARM患儿明显减少（1.30±0.82 vs 5.60±1.36）个，两相比较，差异有统计学意义（P〈0.01）。IHC：NGF、TrkA、P75NTR主要在直肠末端黏膜下及肌间神经丛表达，NGF主要定位于胞核，TrkA主要定位于胞核及胞质，P75NTR主要定位于胞核、胞膜。NGF、TrkA、P75NTR在低位ARM患儿直肠黏膜下、肌间神经丛大量表达，其积分光密度（I0D值）分别为43.48±7.11、18.83±3.65和23.39±3.64；NGF、TrkA、P75NTR在中高位ARM患儿直肠末端表达明显减少，其积分光密度（IOD值）分别为3.70±1.21、8.49±2.68和7.17±2.28，两相比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。qRT-PCR：NGF、TrkA、P75NTRmRNA在低位ARM患儿直肠末端的相对表达量分别为（172.22±104.38、148.78±72.45和122.83±35.45）；明显高于中高位ARM患儿（80.38±43.10、73.95±47.43�
- 高明娟刘远梅毛羽晨金祝郑泽兵曲颜孔萌
- 关键词：消化系统畸形直肠肛门神经生长因子肠神经系统
- 腹腔镜辅助下经肛门逐层梯度切除直肠肌鞘改良Soave术治疗小婴儿先天性巨结肠的疗效分析被引量：19
- 2019年
- 目的探讨腹腔镜辅助经肛门逐层梯度切除直肠肌鞘改良Soave术治疗小婴儿(3个月以内)先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)的疗效。 方法回顾性分析2013年10月至2018年8月遵义医科大学附属医院收治并通过手术确诊56例小婴儿巨结肠患儿的临床资料,其中常见型(病变肠段在直肠乙状结肠交界处以下,为HD最常见的一种类型)42例,长段型(病变累及降结肠甚至横结肠)14例(56例中5例术前因小肠结肠炎反复发作行回肠末端造瘘术,未纳入本研究,故实际研究样本量为51例);接受手术时患儿平均日龄(42±17)d,术前根据临床表现、钡灌肠、肛门直肠测压及直肠黏膜及肌层活检等结果确诊。51例均采用腹腔镜辅助经肛门逐层梯度切除直肠肌鞘改良Soave术进行治疗,术后随访采用Wingspread评分系统评估肛门功能。 结果51例患儿均一期完成巨结肠根治术,无一例中转开腹,42例常见型切除肠管平均长度为(10±2)cm,长段型切除肠管平均长度为(27± 7)cm ,术中失血量(15±5)mL,手术时间(96±12)min,术中、术后均无一例发生死亡或麻醉意外,其中9例拔除肛管后出现肛周皮肤糜烂,住院期间无吻合口瘘及肠梗阻发生。51例均获随访,随访时间(16±9)个月,术后发生小肠结肠炎4例,污粪7例,拖出“新直肠”隧道狭窄2例,无一例便秘复发,肛门功能Wingspread评分优良率为92.15%(47/51)。 结论小婴儿巨结肠诊断明确后一期行腹腔镜辅助经肛门逐层梯度切除直肠肌鞘改良Soave术具有手术时间短、切除病变肠管的长度短、所需切除肠管的长度相对较短以及麻醉过程安全等优势,同时患儿术后可获得较好的排便功能。
- 高明娟刘远梅祝代威
- 关键词：腹腔镜检查先天性巨结肠婴儿
- 胶质细胞源性神经营养因子在肠神经系统中的作用被引量：2
- 2014年
- 胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）是一类调节肠神经系统存活、分化、定植及损伤修复的蛋白因子，在小儿先天性巨结肠、肛门直肠畸形等肠神经系统发育异常疾病中的研究已得到证实，但其具体调控机制不详；有研究发现GDNF／GFRa1／RET和GDNF／GFRa1／NCAM通路可能参与肠神经系统发育与成熟，它们的异常将影响肠神经干细胞的分化、增殖及移行，引起肠神经元解剖结构和功能的异常，导致疾病发生。
- 曲颜刘远梅
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子肠神经系统信号通路
