高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金(FANEDD200358)
- 作品数：8 被引量：41H指数：3
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- 重组减毒大肠杆菌对真核表达的CD8^＋T细胞表位的运送研究
- 2008年
- 目的:分析体外、体内重组减毒大肠杆菌运送真核表达的CD8+ T细胞表位的效应。方法:将携带融合表达绿色荧光蛋白(GFP)与OVA CD8+ T细胞表位基因真核表达质粒的重组大肠杆菌13A(pG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+ T细胞表位的提呈效应。同时,重组菌13A(pG2F)以静脉注射方式免疫C57BL/6小鼠,应用ELISPOT法检测特异性IFN-γ分泌细胞。结果:感染试验表明,大肠杆菌13A能向APC中运送真核表达质粒,并且外源GFP基因获得了表达。体外抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2小时),LKb和BMDC均可提呈重组菌13A(pG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48小时),LKb细胞对CD8+ T细胞表位的提呈效应增强。在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb细胞。体内结果显示,大肠杆菌可以有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位并诱导小鼠产生特异性细胞免疫应答。结论:重组减毒大肠杆菌在体外和体内均能有效运送真核表达的CD8+ T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。
- 潘志明张晓明焦新安Richard Lo-ManClaude Leclerc刘秀梵
- 关键词：真核表达ELISPOT
- 鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建
- 用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA,再用Oligo-dT纤维素富集mRNA后,用RT-PCR分别扩增出了鸡CD4和CD8 α基因eDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体,测序正确后再连入peDNA3.1(...
- 胡青海焦新安徐耀辉潘志明黄金林
- 关键词：CD4CD8克隆真核表达质粒
- 文献传递
- 稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性
- 采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F中扩增出新城疫病毒JS5株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入真核表达质粒pmcDNA3.1+中,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-F。通过电穿孔转化法将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌...
- 潘志明程宁宁游猛崔一晨黄金林焦新安刘秀梵
- 关键词：新城疫DNA疫苗减毒鼠伤寒沙门氏菌质粒稳定性免疫效力
- 文献传递
- 鸡CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建被引量：2
- 2006年
- 用Trizol提取4～6周龄白莱航鸡、伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺组织的总RNA,再用Oligo-dT纤维素富集mRNA后,用RT-PCR扩增出鸡CD3γδ基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体,序列分析发现伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡的CD3γδcDNA比白莱航鸡多一个氨基酸,且在胞外区的一个区域有4个氨基酸的差异。将白莱航鸡的CD3γδ从T载体上切下连入pcDNA3.1(+),再将重组质粒pcDNA3.1-CD3转染COS-7细胞,用已知的抗鸡CD3的单克隆抗体测得转染细胞中CD3γδ分子的表达,这说明构建的真核表达质粒正确,为下一步用DNA免疫的手段研制抗鸡CD3的单克隆抗体以及研究鸡CD3分子的结构和功能打下了基础。
- 胡青海焦新安徐耀辉张小燕潘志明黄金林殷月兰
- 关键词：CD3CDNA真核表达
- 携带禽流感病毒DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门菌的免疫效力被引量：2
- 2007年
- 将从重组质粒pVAX1-HA中扩增的HA基因和从pVAX1-HA-CpG中切出的HA-CpG基因分别克隆入pcDNA3.1(+)载体中,获得重组质粒pcDNA3.1-HA和pcDNA3.1-HA-CpG。将上述重组质粒分别转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验检测发现HA基因可在COS-7细胞中表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,构建成携带DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pcDNA3.1-HA)和SL7207(pcDNA3.1-HA-CpG)。将重组菌分别以5×109CFU口服免疫1日龄鸡2次,重组菌免疫组产生的小肠黏膜抗体效价与空载体组及油乳剂灭活疫苗组间存在显著差异。攻毒免疫保护结果表明,SL7207(pcDNA3.1-HA-CpG)免疫组与空载体组之间存在显著差异,而SL7207(pcDNA3.1-HA)免疫组则与空载体组间无显著差异,说明CpG可增强DNA疫苗的免疫效果。
- 潘志明唐丽华程宁宁黄金林胡青海焦新安刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒减毒鼠伤寒沙门菌DNA疫苗CPG免疫效力
- 中国部分地方品种鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆与序列分析被引量：3
- 2006年
- 用Trizol分别提取4～6周龄白莱航鸡、狼山鸡、大骨鸡、北京油鸡、仙居鸡、茶花鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺细胞的总RNA，再用Oligo-dT纤维索富集mRNA后，用RT-PCR分别扩增出鸡CD4和cD8α基因cDNA。将PCR产物克隆进T载体后测序。序列分析显示不同品种鸡的CD4 cDNA序列完全一致；中国地方品种鸡与国外品种的白莱航鸡、RPL7系鸡在CD8α胞外区有6～13个氨基酸的差异，仙居鸡与其他5个中国地方品种鸡在CD8α胞外区有4～5个氨基酸的差异，狼山鸡、北京油鸡和隐性白羽鸡CD8α cDNA的核苷酸序列及推导的氨基酸序列完全一致。这些结果表明，中国地方品种鸡CD4基因序列高度保守；中国地方品种鸡与国外品种鸡的CD8α cDNA序列之间具有遗传多态性，而中国地方品种鸡之间CDSα cDNA序列遗传多态性低，为进一步研究CD4分子和CD8α链的结构和功能提供了条件。
- 胡青海焦新安潘志明黄金林殷月兰
- 关键词：CD4CD8ΑCDNA克隆
- 鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建被引量：9
- 2004年
- 用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA,再用Oligo-dT纤维素富集mRNA后,用RT-PCR分别扩增出鸡CD4和CD8α基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体,测序正确后再连入pcDNA3.1(+)。将重组质粒pcDNA3.1-CD4和pcDNA3.1-CD8分别转染COS-7细胞,用已知的抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体检测到转染细胞中CD4和CD8α分子的表达,这说明构建的真核表达质粒正确,为下一步用DNA免疫方法研制抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体以及研究鸡CD4和CD8分子的结构和功能打下基础。
- 胡青海焦新安徐耀辉潘志明黄金林
- 关键词：CD4CD8克隆真核表达质粒
- 鸡CD4和CD8分子研究进展被引量：26
- 2005年
- 鸡CD4和CD8分子是T细胞表面重要的表面标志,绝大部分胸腺细胞表面都表达CD4和CD8分子,但大多数脾脏和外周血的T细胞表面只表达CD4或CD8分子,或两者都不表达。少数脾脏和外周血中存在的CD4+CD8+T 细胞具有重要的生物学功能。不同品种鸡的CD4 基因具有高度的保守性,而CD8αcDNA 在胞外区表现为多型性。鸡的CD4和CD8分子在组织分布、结构和功能等方面有着很大的相似性。针对鸡CD4 和CD8分子的单克隆抗体为研究这些免疫细胞的生理功能及细胞表面标志的生物学作用等创造了有利条件。
- 胡青海焦新安
- 关键词：CD4CD8多型性单克隆抗体
- 禽流感病毒A/Chicken/Yangzhou/N/2005(H9N2)HA基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2007年
- 根据GenBank公开发表的H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计1对引物,用RT-PCR方法成功扩增出H9N2型禽流感病毒分离株A/Chicken/Yangzhou/N/2005(H9N2)HA基因,凝胶电泳结果显示,扩增产物为1.7kb的单一条带,与预期结果相符。将PCR扩增片段连接到pCR2.1-T载体上,重组质粒酶切鉴定正确。序列测定分析结果显示,所获序列与GenBank中收录的H9N2亚型分离株核苷酸同源性最高达99%,与原型毒株A/Turkey/Wisconsin/1/1966(H9N2)氨基酸同源性为89%。对HA裂解位点附近的氨基酸序列分析表明,此毒株为低致病力毒株。
- 程宁宁潘志明耿士忠孙林焦新安
- 关键词：血凝素基因
- 破伤风毒素C片段基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 2007年
- 本研究对破伤风毒素C片段进行了基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析。应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株基因组中扩增出大小为1356 bp的破伤风毒素C片段(TetC)基因,经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank上登录的序列AF154828的同源性达到99.2%。将此基因克隆至大肠杆菌融合表达载体pGEX-6P-1,构建成重组表达质粒pGEX-6P-1-TetC,并在大肠杆菌BL21中表达,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的21%。经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物为76 Ku左右的重组蛋白,经免疫印迹试验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。
- 程宁宁单艳菊潘志明刘婷耿士忠黄金林焦新安
- 关键词：破伤风毒素大肠杆菌基因克隆蛋白纯化
