国家自然科学基金(81071330) 作品数:12 被引量:59 H指数:4 相关作者: 杨国玲 张芙蓉 祝逸平 郭春梅 刘芳 更多>> 相关机构: 大连医科大学附属第一医院 大连医科大学 大连市友谊医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
皮肤癣菌和白念珠菌抗原在慢性荨麻疹患者中的致敏性及交叉反应研究 被引量:7 2013年 目的:制备红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、白念珠菌抗原,并检测其在慢性荨麻疹、甲真菌病患者及正常受试者中的致敏性,从而评价皮肤癣菌感染在慢性荨麻疹中的病因学作用,并观察4种真菌抗原之间是否存在交叉反应。方法:174例慢性荨麻疹、甲真菌病患者和健康受试者,分为4组:①试验组:慢性荨麻疹并发甲真菌病患者(n=53);②对照组1:甲真菌病无变态反应性疾病患者(n=45);③对照组2:慢性荨麻疹无真菌感染患者(n=42);④对照组3:健康受试者(n=34)。所有受试者均进行4种真菌抗原点刺试验,试验组及对照组1进行真菌培养确定菌种。结果:试验组红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、须发癣菌抗原点刺阳性率明显高于对照组1、2、3(P<0.05),对照组1高于对照组2和3(P均<0.05),差异有统计学意义,对照组2与对照组3比较(P>0.05),差异无统计学意义。4组白念珠菌抗原阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组须癣毛癣菌、红色毛癣菌、絮状表皮癣菌抗原阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),3种皮肤癣菌抗原与白念株菌抗原之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:皮肤癣菌感染是皮肤癣菌抗原阳性的重要决定因素,在部分慢性荨麻疹并发甲真菌病患者的病因中起重要作用,须癣毛癣菌、红色毛癣菌、絮状表皮癣菌抗原之间有明显的交叉反应,与白念珠菌抗原无交叉反应。 刘芳 王雪连 沈永年 王乐 孔庆涛 王高峰 桑红关键词:慢性荨麻疹 甲真菌病 点刺试验 RNA干扰技术对犬小孢子菌PQ-LRP基因沉默的研究 被引量:6 2014年 目的 构建犬小孢子菌PQ-LRP基因RNA干扰载体,探讨RNA干扰载体对犬小孢子菌PQ-LRP基因表达的影响.方法 用根癌农杆菌介导的T-DNA插入突变技术,加入多克隆位点,引入潮霉素抗性基因,先后构建PUC-PLULT、PCB309-PLULT载体.应用实时PCR方法检测PCB309-PLULT载体对犬小孢子菌PQ-LRP基因表达的干扰作用.结果 构建了中间载体PUC-PLUT、PUC-PLULT,并通过PCR、基因测序进行鉴定.成功构建了长为8 825 bp的干扰载体PCB309-PLULT,并通过酶切测定为该目的载体;筛选出犬小孢子菌转化子的潮霉素最佳浓度为300 mg/L;用实时定量PCR方法对犬小孢子菌PQ-LRP基因干扰前后表达量进行鉴定:以干扰前PQ-LRP相对表达量1.0为标准,干扰后PQ-LRP相对表达量为0.39,干扰后下调61%.结论 干扰载体PCB309-PLULT可以明显抑制犬小孢子菌PQ-LRP基因的表达. 陈昕宜 杨国玲 刘建雯 刘金鹏 张芳芳 赵晓宣关键词:犬小孢子菌 RNA干扰 基因沉默 儿童头皮与包皮组织诱导前后犬小孢子菌FSH1的表达 被引量:3 2011年 目的探讨丝氨酸水解酶(FSH1)在犬小孢子菌致病中的意义。方法半定量RT—PCR检测30株犬小孢子菌头癣株和30株犬小孢子菌体癣株经沙氏液体培养基传代及儿童头皮、包皮诱导前后FSH1的表达。结果头癣株犬小孢子菌FSH1mRNA表达水平明显高于体癣株(P〈0.01),经沙氏液体培养基传至第5代的菌株FSH1mRNA表达水平较第一代差异无统计学意义(P〉0.05)。经儿童头皮或包皮诱导后,FSH1mRNA表达水平较诱导前明显升高(F=2025.713、1833.139,P值均〈0.01),且不同皮肤组织(儿童头皮、儿童包皮)诱导后的菌株其表达水平差异有统计学意义(P〈0.01)。结论不同感染部位的犬小孢子菌FSH1mRNA表达水平不同;局部组织对该菌的FSH1mRNA表达存在诱导作用,且儿童头皮的诱导作用明显。 祝逸平 张振颖 庞娟 杨国玲关键词:犬小孢子菌 儿童 头皮 包皮 MRNA表达 液体培养基 复方青黛胶囊治疗寻常型银屑病的疗效及对血清炎性反应因子的影响 被引量:33 2017年 目的:探讨复方青黛胶囊治疗寻常型银屑病的疗效及对患者生命质量、血清炎性反应因子、血流变学指标的影响。方法:选取2015年6月至2016年2月绵阳市中医医院收治的寻常型银屑病患者90例并随机分为观察组与对照组,每组45例。对照组给予迪银片治疗,观察组在对照组的基础上加用复方青黛胶囊治疗,4周为1个疗程,2组均连续治疗2个疗程。评价2组患者的临床疗效,采用PASI指数评价2组患者皮损面积和病情严重程度,采用皮肤病生命质量量表(DLQI)评价2组患者生命质量,检测并比较治疗前后2组患者炎性反应因子、血流变学指标水平。结果:观察组总有效率为97.78%(44/45),显著高于对照组的82.22%(37/45)(P<0.05);治疗后2组PASI指数和DLQI评分均较治疗前显著下降(P<0.01),且观察组显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);治疗后2组IL-2、IL-8和IFN-γ水平均较治疗前显著降低,IL-4水平较治疗前显著升高,且组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);治疗后2组全血(低、中、高切)黏度、血浆黏度、红细胞比容均较治疗前显著降低(P<0.05或P<0.01),且观察组显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:复方青黛胶囊治疗寻常型银屑病的疗效确切,可显著降低机体炎性反应因子水平,同时可改善患者血流变学指标水平,进而降低患者皮损面积,促进患者早日恢复。 庞娟 叶婷婷 舒朝霞关键词:银屑病 复方青黛胶囊 炎性反应因子 血流变学 疗效 犬小孢子菌丝氨酸水解酶家族1蛋白的亚细胞定位分析 2020年 目的对丝氨酸水解酶家族1(FSH1)蛋白在犬小孢子菌中进行亚细胞定位分析。方法以前期构建的犬小孢子菌FSH1质粒及载体pCAMBIA-LRP-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为模板,PCR扩增FSH1基因及EGFP基因;同时利用SnaBI/KpnI对pCAMBIA-LRP-EGFP质粒双酶切获得载体DNA,将扩增的EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得EGFP表达载体;将扩增的FSH1基因及EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得融合载体Ptrcp-FSH1-EGFP-Ttrcp。通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,用重组质粒转化犬小孢子菌,使融合基因FSH1-EGFP在真菌通用启动子(Ptrpc)和终止子(Ttrpc)调控下在犬小孢子菌中整合型表达,利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位。结果成功构建根癌农杆菌转化系统及犬小孢子菌EGFP表达载体;融合基因FSH1-EGFP在犬小孢子菌中获得整合型表达。激光共聚焦显微镜显示FSH1-EGFP融合蛋白的荧光信号呈颗粒状或团块状集中于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中。结论FSH1-EGFP融合蛋白成功定位于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中,为进一步明确犬小孢子菌FSH1基因的功能及致病机制奠定了基础。 张芙蓉 郭春梅 谭灿 刘洋 徐宇 杨国玲关键词:小孢子菌属 绿色荧光蛋白质类 犬小孢子菌 亚细胞定位 基于16SrDNA及ITS高通量测序分析甲真菌病病甲微生物群落的变化 2023年 目的比较甲真菌病患者病甲与健康甲细菌和真菌微生物菌群差异。方法收集2020年8月至2021年6月于大连市皮肤病医院门诊就诊的31例甲真菌病患者的病甲及健康甲的甲屑样本,提取甲屑菌群总DNA,以细菌16S rDNA的V3-V4区序列及真菌内转录间隔区(ITS)作为目标序列进行基因扩增及Illumina测序,对所测序列采用USEARCH和mothur软件进行OTU聚类分析,采用Wilcoxon rank sum test方法进行α多样性分析,采用相似性分析(Anosim)进行β多样性分析,采用LEFSe方法进行物种差异分析。结果入组甲真菌病患者31例,男16例,女15例,按年龄分青年组(18~35岁)10例,中年组(36~60岁)11例,老年组(大于60岁)10例。α多样性分析显示,病甲组标本Shannon指数明显低于健康甲组(W=290,P=0.007),而Simpson指数明显高于健康甲组(W=663,P=0.010),病甲组细菌菌群的多样性及均匀度低于健康甲组,病甲在真菌菌群的多样性与健康甲无明显区别。β多样性分析显示,基于unweighted-unifrac距离矩阵分析结果,病甲组与健康甲组细菌和真菌微生物的组成差异无统计学意义(细菌菌群:R=0.0052,P=0.331;真菌菌群:R=0.0036,P=0.337);基于weighted-unifrac距离矩阵分析结果,病甲组与健康甲组在细菌菌群及真菌菌群的丰度方面差异均有统计学意义(均P=0.001)。在物种组成上,病甲组较健康甲组丰度显著降低的细菌菌群有拟杆菌门及变形菌门、β-变形菌纲、伯克氏菌目、罗尔斯顿菌属、鞘氨醇单胞菌属、链球菌属,而芽孢杆菌纲、芽孢杆菌目、葡萄球菌属明显高于健康甲组。病甲组显著升高的真菌菌群有散囊菌纲、爪甲团囊菌目、未分类锤舌菌目、关节皮肤真菌科、黑团孢属、白粉菌属、铁艾酵母属、毛癣菌属、十字花科白粉菌、红色毛癣菌、合轴马拉色菌,而酵母菌纲-酵母菌目-酵母菌科、隐囊菌科、念珠菌、链格孢菌较健康甲组显著降低。结论甲真菌病 张芙蓉 郭春梅 刘新勇 王华 杨国玲关键词:甲癣 微生物群落 内转录间隔区 儿童头皮及光滑皮肤组织对体外培养犬小孢子菌PQ-LRP表达水平的影响 被引量:2 2011年 目的探讨儿童头皮与光滑皮肤组织对体外培养犬小孢子菌膜绑定蛋白编码基因(PQ-LRP)表达水平的影响。方法以18SrRNA基因为内参,应用RT-PCR方法检测SDA培养基中自患儿皮损处分离的头癣株、体癣株第1代及第5代PQ-LRP的mRNA水平;检测体外经儿童头皮及光滑皮肤组织诱导培养后头癣株及体癣株PQ-LRP的mRNA水平。结果 IODPQ-LRP/IOD18S rRNA(SDA第1代头癣株)为1.0352±0.11279,IODPQ-LRP/IOD18S rRNA(SDA第5代头癣株)为1.1157±0.11530,二者差异无统计学意义(P>0.05);IODPQ-LRP/IOD18S rRNA(头皮组织诱导后头癣株)为2.1375±0.11093,与未经诱导者相比差异有统计学意义(P<0.01);IODPQ-LRP/IOD18S rRNA(SDA第1代体癣株)为0.5921±0.12025,IODPQ-LRP/IOD18S rRNA(SDA第5代体癣株)为0.6712±0.12177,二者差异无统计学意义(P>0.05);IODPQ-LRP/IOD18S rRNA(光滑皮肤诱导后体癣株)为1.4734±0.13125,与未经诱导者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PQ-LRP在犬小孢子菌中有活性表达,且在头癣株中表达活性明显高于体癣株。SDA培养基中犬小孢子菌PQ-LRP呈稳定表达状态,而儿童头皮组织与光滑皮肤组织对PQ-LRP表达水平存在诱导作用,以头皮组织尤为显著。 张振颖 祝逸平 杨国玲关键词:犬小孢子菌 脓癣 甲真菌病临床特点及致病菌谱的研究 被引量:9 2012年 目的探讨甲真菌病流行病学特点如发病年龄、临床形态学分型、易感因素,以及致病菌谱状况。方法对2010年12月—2011年12月我院328例甲真菌病的病甲进行拍照和真菌检查(包括直接镜检、真菌培养),并对所有真菌检查阳性患者进行临床形态学分型,其中113例填写调查问卷调查易感因素。结果 328例甲真菌病统计结果显示,男性发病率高于女性,男女比例为1.45∶1,最主要的发病年龄为20~29岁(35.7%)。370例指甲及趾甲的临床形态学分型中最常见的是远端侧缘甲下型(51.4%),其次为全甲毁损型(24.3%),白色浅表型(18.6%),近端甲下型(5.7%)。196例甲标本培养阳性结果中皮肤癣菌最常见(82.7%),其次为念珠菌属(11.2%)和非皮肤癣菌的霉菌(6.1%)如曲霉属、青霉属、镰刀菌属等。皮肤癣菌中最常见的是红色毛癣菌,其次须癣毛癣菌。念珠菌属中最常见的是白念珠菌。113例经调查显示易感因素为家族性感染(11.5%),慢性肾病(4.4%)及肾移植(0.9%),糖尿病(1.8%),甲外伤(1.8%),白血病(0.9%)和特发性血小板较少性紫癜(0.9%)。结论临床通过对甲真菌病患者的流行病学特点及菌种分布等情况进行了解,可指导临床治疗及采取相应的预防措施。 刘芳 孔庆涛 王雪连 王高峰 冯姣 桑红关键词:指(趾)甲 真菌病 犬小孢子菌膜蛋白PQ—LRP基因全长cDNA的克隆 被引量:4 2012年 目的 克隆犬小孢子菌膜蛋白PQ-LRP(PQ-loop repeat protein)基因全长cDNA,探讨在头癣发病机制中的作用.方法 选用犬小孢子菌头癣株(A518)为实验株,采用cDNA快速末端扩增法(RACE),克隆PQ-LRP基因的全长序列.结合生物信息学方法对获得的序列进行初步功能分析.结果 获得犬小孢子菌PQ-LRP全长序列为1522 bp,拥有一个1080 bp的开放阅读框,编码359个氨基酸,5 '非编码区为49 bp,3 '非编码区为393 bp;同源性比对与断发毛癣菌的PQ-LRP同源性达到81%,与红色毛癣菌PQ-LRP同源性达到79%.结论 克隆出犬小孢子菌膜蛋白PQ-LRP cDNA全长序列,为研究膜蛋白PQ-LRP基因在犬小孢子菌病中的功能奠定基础. 庞娟 祝逸平 杨国玲关键词:全长CDNA LRP基因 膜蛋白 克隆 红色毛癣菌 犬小孢子菌FSH1基因干扰载体的构建及验证 被引量:1 2020年 目的为了构建犬小孢子菌FSH1基因的RNA干扰重组质粒,并验证其干扰效率。方法以犬小孢子菌FSH1基因全长cDNA为模板,利用PCR技术扩增FSH1基因,将质粒pUC-PUT进行双酶切使其线性化,插入FSH1正向及反向干扰序列,获得中间载体pUC-PFUFT,将其及质粒pCB-309双酶切后连接,构建干扰载体pCB309-PFULFT。将其转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105,获得犬小孢子菌FSH1基因RNA干扰的转化体系。用实时定量PCR方法对犬小孢子菌FSH1基因干扰前后表达量进行鉴定。结果成功构建了FSH1基因的干扰载体pCB309-PFULFT,获得FSH1基因的干扰转化子;犬小孢子菌野生株干扰后FSH1基因mRNA相对表达量较干扰前下降约70%,标准株下降约60%。结论本试验成功构建了犬小孢子菌FSH1基因的干扰载体,为后续研究FSH1基因的功能及在头癣中的发病机制奠定了基础。 张芙蓉 郭春梅 吴英 谭灿 杨国玲关键词:犬小孢子菌 RNA干扰 根癌农杆菌 头癣