国家教育部博士点基金(20090171110052)
- 作品数：10 被引量：12H指数：3
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- 环境-致癌过程相关基因启动子区多态性及其单体型的功能分析
- 背景:目的基因非编码区存在的遗传变异(genovariants)可通过影响转录因子或与靶向序列的结合,对目的基因的转录和表达起调控作用,特别是调控区基因多态性(regulatory polymorphisms)的功能学作...
- 林忠宁
- 关键词：基因多态性单体型功能分析致癌作用
- 文献传递
- 锌影响镉对人未成熟树突状细胞毒性作用被引量：1
- 2011年
- 目的探讨锌对镉诱导的人未成熟树突状细胞(iDC)毒性的影响。方法分离人周围血单核细胞(PBMC)并诱导为iDC后,分组给予生理氯化钠溶液(对照组)、氯化镉(CdCl2组)、硫酸锌(ZnSO4组)、锌预处理后加氯化镉(Zn+Cd组)、锌离子特异性螯合剂(TPEN)预处理后加氯化镉(TPEN+Cd组)处理。噻唑蓝(MTT)颜色反应法检测细胞活力;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA链断裂损伤;吖啶橙(AO)与碘化丙啶(PI)核双染观察细胞凋亡并通过流式细胞仪检测凋亡细胞中染色体断裂的亚二倍体(SubG1)。结果 CdCl2组iDC活力抑制率随CdCl2呈剂量依赖性显著增高(P<0.05);与ZnSO4组或CdCl2组相比,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞活力抑制率明显升高(P<0.05);相同CdCl2剂量(20μmol/L)时,Zn+Cd组和TPEN+Cd组细胞的彗星尾长和尾矩明显增大(P<0.05);各处理组出现凋亡细胞核染色和SubG1阳性细胞比例明显增加。结论镉化合物暴露导致iDC活力降低,其诱导的细胞毒性明显高于锌;细胞内锌稳态干预可增加镉介导的iDC内DNA损伤相关的毒作用敏感性。
- 李文林育纯陈慧峰罗洁李晓杰林丽娜胡耀明张树江陈雯林忠宁
- 关键词：未成熟树突状细胞镉锌免疫毒性DNA损伤
- 核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究
- 2013年
- 目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P<0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G>A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P<0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P<0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。
- 麦剑荣林育纯陈慧峰陈宇曦夏斌廖昆张玉静高艳芳林忠宁
- 关键词：蛋白磷酸酶2A
- 广东人群PP2A-B亚基基因5′-侧翼区多态性连锁不平衡和单体型分析被引量：2
- 2011年
- 目的探讨蛋白磷酸酶2A（PP2A）的调节B／PR558亚基基因5’-侧翼区多态性的连锁不平衡和人群单体型分布特征。方法选取经体检排除急慢性疾病的50例广东汉族健康人群为调查对象，以人胱舵D基因5’-侧翼区中-1684A〉G（rslll46169）、-1196C〉T（rs9419202）、-462G〉A（rs7074421）和-1610A〉T为4个纳入的多态性位点，采用HaploView软件分析遗传特征、连锁不平衡（LD）和单体型分布，进行人群分布的x2检验。结果50例广东汉族人群中各多态性位点基因型频率均符合Hardy—Weinberg平衡（P〉0．05）；杂合度（π）分别为-1684A〉G（0．020）、-1610A〉T（0．132）、-1196C〉T（0．059）和-462G〉A（0．059），且均不存在变异纯合型，其中在-1196C〉T和-462G〉A位点明显低于HapMap人群（P〈0．05）；-1196C〉T和-462G〉A位点之间呈完全LD，但其他位点间未见LD关系；构建了该人群的3种单体型（HI～H3），频率分布主要是野生单体型（H1，89．0％），其余2种变异单体型分别为H2（7．0％）和H3（3．0％）；筛选出的3个标签SNP为-1684A〉G、-1610A〉T和-462G〉A。结论确定并报道中国南方广东汉族人群PPP2R2D基因5’-侧翼区中相对保守的标签SNP和单体型分布，为进行该基因启动子区的功能分析提供依据。
- 张树江林育纯陈慧峰万建新林丽娜罗洁李文陈雯林忠宁
- 关键词：蛋白磷酸酶2A单体型
- 75例广东籍汉族人蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基基因5’-侧翼区多态性分析被引量：1
- 2011年
- 目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)-B56γ亚基基因(PPP2R5C)启动子区的多态性和人群分布。方法随机选取广东汉族健康人群的全基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)获得PPP2R5C基因5’-侧翼区的目的片段产物直接再测序,序列比对并确证遗传变异位点,采用HaploV iew软件进行等位基因型人群分布的分析、并与国际单体型图谱计划(Hap-Map)数据进行比较。结果成功测序75例健康人(150条染色体)PPP2R5C基因-1933nt^+241nt的目的片段,发现该人群中存在5个遗传变异位点且各等位基因型在年龄组和性别之间分布差异无统计学意义(P>0.05),最小等位基因频率(MAF)分别为-1447C>T(0.67%)、-1430G>A(19.33%)、-1274T>C(19.33%)、-563G>C(19.33%)和-526T>C(0.67%);与HapMap的中国北京人群和其他国外人群MAF和分布数据略为不同,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论筛查出和首次报道PPP2R5C基因5’-侧翼区在中国南方广东汉族健康人群中的多态性位点及其等位基因型的分布。
- 林育纯陈慧峰陈宇曦林丽娜罗洁李文张树江赖关朝吴邦华唐小江陈雯林忠宁
- 关键词：多态性
- 小白菊内酯对不同环氧合酶-2表达的鼻咽癌细胞株中干性侧群细胞转归的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨倍半萜烯内酯(sesquiterpene Iactones,SLs)类化合物对不同环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达水平的人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞中癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)转归的影响。方法:分别采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测人鼻咽癌高分化CNE1L和低分化CNE2L细胞株中COX-2 mRNA和蛋白本底表达水平。给予不同剂量SLs活性成分小白菊内酯(parthenolide,PN)处理2种细胞株后,再分别采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性;qRT-PCR检测细胞中干性相关基因COX-2、ABCG2、BMI1、OCT4 mRNA水平;流式细胞术分析干性侧群(side population,SP)细胞的相对含量;平板克隆集落形成实验检测干性细胞的自我更新和分化增殖能力。结果:CNE1L和CNE2L细胞中COX-2 mRNA和蛋白本底水平显著不同,在CNE1L细胞中明显高于CNE2L细胞(P<0.05);与对照组比较,PN处理后,细胞增殖抑制率随PN浓度(10～100μmol/L)增加呈剂量依赖性增高(P<0.05),细胞中COX-2 mRNA在CNE1L中升高、在CNE2L中降低,干性相关基因ABCG2、BMI1 mRNA在CNE1L细胞中升高、而OCT4 mRNA在两株细胞中均降低(P均<0.05);SP细胞抑制率亦随PN浓度(2.5～40μmol/L作用24 h)增加呈剂量依赖性增高(P<0.05);而细胞的集落形成能力随PN浓度(0.25～1.5μmol/L作用72 h)增加显著降低(P<0.05);上述结果在CNE1L和CNE2L细胞株间差异均有统计学意义(P<0.05),在CNE1L细胞中变化作用更强。结论:PN对不同NPC细胞株中的干性细胞功能具有抑制作用且存在明显差别,可能与不同细胞间COX-2表达的差异性有关。
- 李晓杰林丽娜麦剑荣陈慧峰胡耀明廖昆黄奕俊林忠宁林育纯
- 关键词：环氧合酶-2鼻咽肿瘤小白菊内酯
- PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的人肝L02细胞DNA损伤被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制。方法:构建PP2A-B56γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型;两种细胞分别给予CdCl_2(Cd)、TNFα单独处理及联合处理后,实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测不同处理组PPP2R5C和金属硫蛋白1B(MTIB)mRNA转录水平;彗星试验(SCGE)检测细胞DNA断裂损伤情况;并按照3×2的析因设计分析不同处理之间是否存在联合作用及作用类型。结果:与L02-pBabe细胞相比较,L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C、外源性PPP2R5C-FLAG mRNA显著高表达(P<0.05),细胞株构建成功。3种因素单独处理时,与阴性对照组相比,Cd降低PPP2R5C、升高MT1B mRNA表达,PPP2R5C基因高表达诱导的效应与Cd处理相反,TNFα降低PPP2R5C和MT1B mRNA表达(均P<0.05);析因分析表明,在PPP2R5C和PPP2R5C-FLAG mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd、与TNFα之间均存在协同性交互效应(P<0.05);在MT1B mRNA检测中,PPP2R5C高表达与cd和TNFα之间均表现为拮抗作用,PPP2R5C高表达与TNFα为协同抑制作用(均P<0.05)。SCGE检测表明,与阴性对照相比.Cd诱导彗星尾长、尾矩、尾部DNA含量和拖尾细胞阳性率显著增高(P<0.05),TNFα、PPP2R5C高表达单独作用均不引起DNA损伤(P>0.05),但两两联合作用的析因分析结果表明,TNFα预处理与Cd处理对DNA损伤具有协同作用,PPP2R5C高表达与Cd处理存在拮抗作用,交互作用均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Cd抑制肝细胞PPP2A-B56γ编码基因的转录并显著诱导DNA损伤,PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的DNA损伤,而炎症因子可增强镉对细胞DNA的损伤。
- 林丽娜林育纯陈慧峰罗洁李晓杰胡耀明李文张树江陈雯林忠宁
- 关键词：镉肝细胞毒性基因转录调控
- DEHP对人肝L02细胞毒性作用及其核因子-κB机制研究
- 1.引言邻苯二甲酸酯类(PAEs)化合物是一类包含有多种成分的持久性环境污染物;其中邻苯二甲酸二-(2-乙基)乙酯(DEHP)是使用最广泛的PAEs增塑剂。研究表明DEHP可导致多种有害效应,包括肝、肾毒性,睾丸毒性,但...
- 胡耀明陈宇曦李晓杰陈慧峰麦剑荣夏斌张玉静廖昆林育纯林忠宁
- 广东汉族人群PP2A-Aα亚基基因5’-侧翼区多态性的单体型分析
- 目的探讨中国广东汉族人群蛋白磷酸酶2A(PP2A)-Aα亚基PPP21A基因5’-侧翼区多态性的连锁不平衡(LD)和人群单体型分布特征。材料与方法采用Haploview软件分析筛查到的PPP2R1A基因5’-侧翼区中7个...
- 陈慧峰林育纯林丽娜李文罗洁张树江万建新陈雯林忠宁
- 文献传递
- DEHP对人肝L02细胞毒性作用及其核因子-κB机制研究
- ＜正＞1.引言邻苯二甲酸酯类（PAEs）化合物是一类包含有多种成分的持久性环境污染物;其中邻苯二甲酸二-（2-乙基）乙酯（DEHP）是使用最广泛的PAEs增塑剂。研究表明DEHP可导致多种有害效应,包括肝、肾毒性,睾丸毒...
- 胡耀明陈宇曦李晓杰陈慧峰麦剑荣夏斌张玉静廖昆林育纯林忠宁
