国家高技术研究发展计划(2002AA216081)
- 作品数：27 被引量：113H指数：6
- 相关作者：艾辉胜郭梅孙琪云乔建辉余长林更多>>
- 相关机构：解放军第307医院军事医学科学院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 猕猴单倍体相合非清髓造血干细胞联合间充质干细胞移植的实验研究被引量：2
- 2005年
- 目的用非清髓预处理建立猕猴单倍体相合造血干细胞移植(HSCT)模型,研究间充质干细胞(MSC)在单倍体相合移植中的作用。方法采用健康、单倍体相合的猕猴亲子配对,受者非清髓性预处理用氟达拉滨+环磷酰胺+60Co(200cGy)全身照射+兔抗人胸腺细胞球蛋白,移植物抗宿主病(GVHD)预防用环孢菌素A、霉酚酸酯、抗CD25单抗。实验分为单纯造血干细胞(HSC)移植组和HSC联合MSC移植组;检测供受体嵌合水平,观察造血恢复、GVHD等情况。结果单倍体相合的子代猕猴采用非清髓预处理方案,可获稳定植入。比较了单纯非清髓HSC移植组和HSC联合MSC移植组的造血恢复,发现造血恢复时间主要与嵌合状态有关;MSC可促进植入;相同条件下,HSC联合MSC移植组更容易形成供受者混合嵌合;GVHD的发生率低。结论成功建立了猕猴非清髓性单倍体相合HSCT的模型,非清髓HSCT联合MSC可能在单倍体相合移植中有较好效果。
- 刘丽辉孙琪云胡锴勋黄雅静范传波孙昭姚波郭梅赵春华艾辉胜
- 关键词：猕猴造血干细胞移植间充质干细胞单倍体相合
- 骨髓间充质干细胞防治多脏器衰竭被引量：2
- 2009年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）防治半相合骨髓移植治疗致死剂量照射小鼠的多脏器衰竭（MOF）的作用及机制：方法BALB／C小鼠8Gy60Coy射线照射后，分为MSCs组，尾静脉输注经cm—DiI膜染剂标记的CB6FI小鼠的MSCs和骨髓细胞；对照组，只输注CB6F1骨髓细胞。正常组，不照射，输注标记的MSCs细胞。观察移植后不同时间，供者MSCs在受者体内分布，MSCs组和对照组小鼠外周血中IL-2，TNF-α和IL10血清浓度变化情况。SAS9．0软件对数据做成组t检验。结果移植后15d，正常组，MSCs主要集中在骨髓和小肠。MSC组，移植后不同时间，标记的细胞分别在胸腺、骨髓、小肠中富集：MSCs上调rIIM0的血清质量浓度，下调了IL-2和TNF-α的质量浓度，两组数据有统计学差异。结论证实MSCs可以通过下调体内的促炎因子IL-2和TNF-α，及上调抑炎凶子IL-10，抑制全身炎症反应综合征的发生，及MSCs体内多组织器官分布，发挥防治MOF的作用。
- 胡锴勋赵士富郭梅艾辉胜
- 关键词：急性放射病骨髓间充质干细胞细胞因子多脏器衰竭
- 体外皮肤移植和TUNEL实验评价猕猴间充质干细胞输注对细胞免疫的影响
- 2006年
- 目的:通过给猕猴单次无预处理输注猕猴白细胞抗原(RhLA)不相合供者的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs),观察能否抑制供受者之间的免疫反应。方法:无菌抽取MSCs供者猕猴骨髓,分离单个核细胞,用2%FCS的DMEM/F12培养液培养骨髓MSCs,用流式细胞术检测其表型,不同培养条件诱导MSCs多向分化以鉴定;单次无预处理输注MSCs给RhLA不相合受者,分别于MSCs输注前及输注后20、40、60 d取受者外周血淋巴细胞分别与供者及非供者皮肤体外共培养72 h,观察培养皮肤病理损伤情况,同时TUNEL法检测培养皮肤石蜡切片中凋亡细胞的比率。结果:输注MSCs后20 d,受者淋巴细胞与供者皮肤呈现减低的免疫反应,皮肤病理损伤程度较输注前减轻,凋亡细胞比例由(23.0±4.9)%下降到(12.2±1.9)%;MSCs受者与非供者之间体外皮肤病理片中凋亡细胞比例也由输注前的(22.0±2.0)%下降至(11.8±1.4)%,具有显著差异(P<0.05);输注后40 d和60 d,受者淋巴细胞无论对供者还是非供者的皮肤均产生较强的免疫反应,凋亡细胞比例增至(22.0±3.2)%(、22.0±2.5)%(供者)及(23.2±2.4)%(、24.0±2.6)%(非供者)。结论:猕猴输注同种异基因MSCs后,通过体外实验可以检测到供受者之间降低的免疫反应,但是这种免疫抑制作用是短期的、可逆的。
- 黄雅静孙琪云刘丽辉范传波胡恺勋边莉郭梅艾辉胜
- 关键词：皮肤移植TUNEL法
- 非亲缘非清髓造血干细胞移植成功治疗急性淋巴细胞白血病首例报告
- 2002年
- 为探讨非亲缘非清髓异基因造血干细胞移植 (URD NAPBSCT)在治疗急性白血病中 (AL)的作用 ,1例HLA完全相合的急性淋巴细胞白血病病人接受了URD NAPBSCT治疗。结果病人顺利度过造血抑制期并获得完全性植入 ,移植后发生了皮肤Ⅱ度GVHD和间质性肺炎 ,经治疗后痊愈。结果初步表明 ,URD NAPBSCT较简便安全 ,可为急性白血病提供新的有效治疗手段。
- 郭梅田秀英王丹红余长林李新张石艾辉胜
- 关键词：急性淋巴细胞白血病异基因外周造血干细胞移植
- 恒河猴群微卫星DNA多态性的分析被引量：11
- 2005年
- 目的 确立一种对恒河猴群个体的遗传物质进行准确可靠、快速简便的遗传检测方法。方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术对 2 0只恒河猴群个体间进行了DNA多态性的分析。结果 筛选出 9个微卫星DNA位点具有显著多态性 ,4个微卫星DNA位点没有多态性 ,还有 2个位点等位基因数目较少。结论 利用这些多态性微卫星位点建立一种对恒河猴群个体进行有效、准备可靠、快捷简便的遗传背景监测方法。
- 李瑞生孙琪云孙岩松江其辉洪宝庆艾辉胜
- 关键词：恒河猴微卫星DNA多态性PCR基因位点
- 猕猴间充质干细胞的培养及生物学特性研究被引量：3
- 2005年
- 本研究的目的是分离、培养猕猴的骨髓间充质干细胞(MSC),分析其表型及生物学特性。从猕猴股骨抽取骨髓,分离单个核细胞,24小时后去除非贴壁细胞,当贴壁细胞生长到80%融合时进行传代,传至5代后用流式细胞术检测细胞表型,在不同条件下诱导其多向分化,用特异性染色鉴定,用RTPCR法检测MSC表达的细胞因子mRNA。结果表明:贴壁生长的猕猴MSC主要为典型的成纤维细胞样形态,在对数生长期细胞的倍增时间约31-40小时,可以连续传代、成功扩增。第5代猕猴MSC细胞高表达Flk1、CD29、CD105和CD166,低表达造血细胞标记CD34、CD45和CD33。在不同诱导分化条件下,猕猴的MSC可以分化为成骨细胞及脂肪细胞。用RTPCR法检测,猕猴的MSC高表达IL-6、TGF-β,弱表达TNF-α,而I-L2、FasL和IFN-γ未被检出。结论:猕猴的MSC可以成功分离、培养,其生物学特性与人的MSC相似。
- 刘丽辉孙昭孙琪云黄雅静满秋红郭梅赵春华艾辉胜
- 关键词：猕猴间充质干细胞细胞培养干细胞生物学
- 小鼠H-2单倍相合非清髓骨髓移植后细胞因子表达的动态研究被引量：3
- 2005年
- 为了探讨H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植后细胞因子表达变化在急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生发展中的意义,建立了H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植模型,环孢菌素A(CsA)联合霉酚酸酯(MMF)预防aGVHD,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测移植后不同时间点上小鼠脾脏中IL-2、INF-γ、IL-4及IL-10的mRNA的表达。结果显示:仅接受非清髓性预处理小鼠的脾脏中各因子的mRNA表达较预处理前略有升高。未做aGVHD预防给药的小鼠(第2组)IL-2、IFN-γ的mRNA表达水平在移植后急剧升高,分别在21天、14天达峰值,之后显著下降,35天时基本恢复至移植前水平。接受GVHD预防给药的小鼠(第3组)IL-2、IFN-γ的mR-NA表达的变化趋势与第2组相似,但峰值明显低于第2组。第2组和第3组小鼠IL-4的mRNA表达水平均在移植后14天达峰值,但第3组的峰值较第2组为高,且在此后的下降中较第2组缓和。IL-10的mRNA表达水平在移植后逐渐升高,在14天达到一个高峰,21天时下降,之后再次升高直至35天。结论:H-2单倍相合小鼠非清髓骨髓移植后脾脏内IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10均呈上调表达,应用CsA和MMF则可下调IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平,从而降低了aGVHD的发生率和严重程度。
- 李新孙万军原野毛宁艾辉胜
- 关键词：移植物抗宿主病细胞因子
- 间充质干细胞对H-2半相合骨髓移植小鼠免疫功能的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对半相合骨髓移植小鼠免疫功能的影响及机制。方法经8 Gy ^(60)Coγ射线照射后,BALB/c(H-2~d)雌性小鼠分为两组:MSC 组,尾静脉输注经 cm-Dil 膜染剂标记的 CB6F1(H-2^(bd))雌性小鼠的 MSC 和 CB6F1雄性小鼠的骨髓及脾的单个核细胞;对照组,单独输注 CB6F1骨髓及脾的单个核细胞。观察两组移植后不同时间外周血中的淋巴细胞亚群,ConA 和LPS 刺激的 T、B 淋巴细胞增殖,供受者及第三者混合淋巴细胞反应(MLR),供者骨髓及脾细胞在受者胸腺、骨髓和脾脏的植入率,供者 MSC 在受者体内分布,急、慢性 GVHD 的发生率和生存分析。结果移植后90天(+90天)内,MSC 组 CD3阳性细胞高于对照组(P<0.05),+30天 MSC 组 CD3CD4双阳性细胞百分比和 CDg/CD8值高于对照组(P<0.05)。两组 T 细胞增殖活性差异无统计学意义。MSC组+14天后 B 细胞增殖功能开始恢复,+30天达到正常值,而对照组+60天才恢复到正常值。供受者的 MLR 中 MSC 组的 RR 值始终低于对照组;第三者 MLR 中 MSC 组与对照组差异无统计学意义。+30天 MSC 组受者骨髓和脾中的 sry 基因多于对照组。移植后 MSC 主要集中在胸腺、骨髓、肝、小肠,并且大量扩增。对照组急性 GVHD 发生率高于 MSC 组(P<0.05),+90天对照组出现不同程度的慢性 GVHD,MSC 组+120天后出现慢性 GVHD,程度轻于对照组。MSC 组存活率高于对照组(P<0.05)。结论 MSC 促进骨髓干细胞植入,加快 CD4淋巴细胞恢复,促进体液免疫恢复,减少GVHD 发生率,并且在受者胸腺、骨髓、肝、肠和心内膜下大量扩增,起到修复损伤作用,提高半相合骨髓移植动物生存率。
- 胡锴勋赵士富孙琪云郭梅艾辉胜
- 关键词：移植物抗宿主病免疫调节造血干细胞移植
- 极重度骨髓型与肠型急性放射病的救治进展被引量：9
- 2006年
- 极重度骨髓型与肠型急性放射病(ARS)一直是医学难以攻克的热点问题。本文从4个方面概括ARS治疗的新进展:①WR-2721作为细胞防护剂的机制和早期应用,可能阻断组织器官的不可逆性放射损伤;②细胞因子治疗放射病的新进展,提出重视造血恢复后患者的免疫重建; ③造血干细胞移植的适应证,骨髓间充质干细胞对放射病有重要治疗意义;④放射病的抗感染防护和治疗,临床真菌感染症状出现前,抗真菌用药的适应证。
- 胡锴勋艾辉胜
- 关键词：辐射防护剂细胞因子类急性放射病
- 间充质干细胞对小鼠辐射早期造血组织细胞的细胞周期及凋亡的影响被引量：13
- 2007年
- 本研究探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对急性放射病小鼠重要造血免疫器官的早期辐射防护作用及其机制。BALB/c小鼠受5.5Gy60Coγ射线照射后随机分为两组。MSC组照射后1小时内,经尾静脉输注BALB/c小鼠的MSC2.5×107/kg;对照组在照射后输注等体积生理盐水。用流式细胞术检测两组小鼠照射后6、12、24和72小时的骨髓、胸腺和脾细胞的凋亡及细胞周期变化;用免疫组织化学法检测照射后12小时胸腺和脾脏P53蛋白表达情况。结果显示:照射后6小时各器官细胞出现G0/G1及G2/M期阻滞,S期下降。胸腺细胞,脾细胞和骨髓细胞分别于照射后12、6和24小时后发现G0/G1期阻滞峰值,随后G0/G1期细胞减少,S和G2/M期细胞增多,72小时时G0/G1期细胞数低于正常值,S期细胞数高于正常值。胸腺和脾细胞周期改变快于骨髓细胞,改变幅度也大于骨髓细胞。MSC组细胞周期变化速度和程度高于对照组。流式细胞术显示各器官细胞照射后6小时凋亡率明显增加,12小时达高峰,24小时后逐渐降到正常,脾与胸腺细胞凋亡率高于骨髓细胞。MSC组的胸腺细胞照射后12小时、脾细胞照射后12、24小时、骨髓细胞照射后24小时的凋亡率均少于对照组。免疫组织化学检测显示,照射后12小时MSC组小鼠脾脏胸腺细胞P53蛋白表达低于对照组。结论:MSC加快辐射小鼠骨髓、胸腺和脾脏细胞的周期变化,减少细胞凋亡,促进受损的造血和免疫器官修复,从而对受照小鼠起到早期辐射保护作用。
- 胡锴勋赵士富郭梅艾辉胜
- 关键词：急性放射病骨髓间充质干细胞细胞周期
