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深圳献血人群隐匿性乙型肝炎病毒全基因序列系统进化树分析被引量：4: 2013年; 目的了解深圳献血人群隐匿性乙型肝炎B和C基因型及亚型的分布规律,研究不同毒株全基因序列进化关系。方法对30例HBsAg(-)/HBV DNA(+)标本进行基本核心启动子/前C区(BCP/PC,295 bp)、HBV全基因(3 162 bp)巢式PCR扩增,PCR产物克隆后测序。2者均为阳性的5份标本合成3 215 bp长的全基因序列,与GenBank中已发表的HBV A～H基因型23株的全序列进行系统进化树分析确定基因型,将所属基因型B和C亚型再作系统进化树分析,以确定基因亚型。结果获得5例全基因序列,4例为C型,1例为B型。分属于C2,C2,C2,C1和B2亚型。3例C2亚型与日本、马来西亚基因亚型的进化距离最近,C1株与马来西亚和泰国2例携带者的病毒株进化距离最近。B2株与印度尼西亚华裔基因亚型的病毒株进化距离最近。结论深圳献血人群隐匿性乙型肝炎感染病毒基因亚型有C2,C1,B2,以C2亚型为主。; 叶贤林郑欣杜鹏; 关键词：献血者

核酸筛查后HBsAg-/NAT+/HBV DNA-献血者标本的确认试验被引量：12: 2013年; 目的对核酸筛查后HBsAg-/NAT＋/HBV DNA-献血者标本做确认试验及调查HBsAg-/HBV DNA＋标本检出率。方法采用核酸检测方法（NAT）筛查本中心2011年11月-2012年7月的52 672（人）份无偿献血者标本,对其中HBsAg阴性NAT初筛阳性、HBV DNA鉴别试验阴性的81（人）份标本,使用巢式PCR（NestedPCR）和实时荧光定量检测方法（QPCR）确认其HBV DNA是否存在。结果从52 672份NAT无偿献血者标本中,筛得HBsAg-/NAT＋/HBV DNA-81份、HBsAg-/NAT＋/HBV DNA＋15份;经Nested-PCR和QPCR方法扩增,81份HBsAg-/NAT＋/HBV DNA-标本共检出10份HBV DNA＋,HBsAg-/HBV DNA＋检出率为0.05%[（10＋15/52 672）;25例HBsAg-/HBV DNA＋标本病毒载量介于不可检出到至108.9 IU/mL,抗-HBc＋/HBsAg-/HBV DNA＋标本病毒载量（不可检出到至108.9 IU/mL）明显高于与抗-HBc-/HBsAg-/HBV DNA＋标本（不可检出到至54.0 IU/mL）（P〈0.05）。结论目前采用的核酸检测存在假阳性或假阴性情况,应提高核酸检测试剂灵敏度与特异性,确保检测HBsAg-/HBV DNA＋准确性。; 曾劲峰郑欣熊文陈云龙曾雪珍; 关键词：献血者乙肝表面抗原巢式PCR

深圳地区无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染血清学和分子生物学特征分析被引量：7: 2014年; 目的了解深圳地区无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒（OBI）感染情况，分析无偿献血者中OBI的BCP／PC区和S区变异特征。方法应用ELISA和NAT方法筛查深圳地区84865（人）份无偿献血者血液标本，对HBsAg－／HBVDNA＋标本做BCP／PC、S区及全基因序列巢武－PCR扩增以及病毒载量的测定，对检测的病毒序列做基因分型和与HBV野毒株序列比对分析。结果深圳地区无偿献血者HBsAg－／HBVDNA＋检测率为1：2652（32／84865），这类标本的ALT均正常（〈40）；其中OBI检出率为1：3031（28／84865），28例OBI中22例为B基因型、4例为C基因型、2例未能确定基因型。OBI血清型分类中21例为adw、4例为adr、1例为ayr、2例未确定。所有OBI标本的病毒载量为〈10～1701（中位数116）IU／mL。BCP／PC区有35．7％（10／28）的标本出现G1896A突变，B型标本在MHR第1个袢状结构区（aa124-aa137）氨基酸的置换频繁。结论深圳地区无偿献血者中存在着相对较高的OBI；其OBI标本中BCP／PC区的碱基突变以及B型的主要亲水区（MHR）氨基酸的置换可能是其发生发展的机制之一。; 杜鹏郑欣许晓绚王镇曾劲峰王文敬黎诚耀叶贤林; 关键词：血清型乙型肝炎病毒无偿献血者

低载量隐匿性乙型肝炎病毒检测和序列分析被引量：3: 2012年; 目的对低载量隐匿性乙型肝炎病毒进行Q-PCR定量检测和BCP序列分析。方法采用诺华公司NAT方法筛查35332份献血者HBV DNA,有18例确认为HBsAg-/HBV DNA+,48例为可疑HBV DNA+血样,使用Q-PCR和Nested-PCR方法对48例可疑血样进行定量检测和BCP区域扩增和测序;并与野毒株BCP序列作比对分析。结果从48例可疑HBV DNA+血样中成功应用Q-PCR定量检出HBV DNA阳性6例,均为隐匿性乙型肝炎(OBI),并获得6例BCP序列,发现在TA富含区的变异相对较多,1例样品发生缺失变异,6例OBI血样共有14个变异位点在BCP区域。结论本方法能对可疑标本进行检测和定量,通过BCP区域的检测进行OBI的确认。; 叶贤林余雷郑欣; 关键词：隐匿性乙型肝炎 Q-PCR 基因测序

献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究进展被引量：7: 2014年; 近年来,一种潜伏性乙型肝炎病毒(HBV)感染形式,即隐匿性HBV感染(OBI),受到临床与输血医学工作者的高度重视。OBI表现为HBV表面抗原(HBsAg)阴性而DNA阳性(HBsAg-/DNA+),病毒载量低或不可定量。OBI不仅存在于一般人群,部分可以通过输血传播HBV,还可能与重症肝损伤和肝细胞癌相关。本文对献血者OBI感染与血液安全、OBI感染研究现状及OBI的主要分子生物学特征和形成机制进行综述。; 李婷婷黎诚耀; 关键词：献血者

锁核酸结合分子信标技术检测乙型肝炎病毒DNA G1896A点突变研究: 2012年; 目的研究和评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA G1896A点突变的实时荧光PCR检测方法。方法收集经测序验证HBV DNA G1896A未突变的野生型样本150例和已发生突变的突变型样本58例,在突变区域设计分子信标探针,点突变处进行锁核酸处理,利用荧光PCR方法检测HBV前C区G1896A点突变;再从临床标本中随机抽取18例、8例和19例荧光PCR结果分别显示为G1896A突变的标本、杂合的标本以及野生型的标本的PCR产物进行序列测定。结果突变型质粒和野生型质粒的检测灵敏度均可以达到100copies/ml;突变型探针检测高浓度的野生型质粒时无检测信号,野生型探针检测高浓度突变型质粒时无检测信号;突变型模板在总杂合模板中的比例达到5%时则都可以将突变型检测出来;序列测定的8例G1896A突变标本、6例杂合标本和19例野生型标本的PCR产物结果和荧光PCR检测结果完全吻合。结论实时荧光PCR检测方法可以快速、简便、准确地检测HBVDNAG1896A点突变,是检测点突变的重要方法,具有重要的临床应用价值。; 张红郑欣宋庆涛蔡剑英王大明曾劲峰叶贤林熊文; 关键词：乙型肝炎病毒分子信标锁核酸实时荧光PCR

献血者人群隐匿性乙型肝炎病毒感染分子与细胞免疫特征分析: 背景和目的：　　慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的发生及发展机制与乙肝病毒变异、宿主的免疫状态、宿主性别、年龄、遗传基因和肝脏内炎症活动密切相关。然而，隐匿性HBV感染(OBI)在病毒学特征、合并感染、宿主免疫应答以及表观遗...; 张卫云; 关键词：慢性乙型病毒性肝炎隐匿性感染细胞免疫; 文献传递

核酸检测技术在血液筛查中的应用研究被引量：10: 2011年; 目的大样本、多方法调查深圳地区无偿献血人群中乙肝、丙肝和艾滋病病毒血清学阴性者的核酸阳性率,探讨在我国血液筛查中引进核酸扩增技术的必要性,了解和分析献血者血清学阴性核酸阳性感染状况。方法采用大样本数调查,应用ROCHE PCR-ELISA、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法和CHIRON TMA(转录依赖的扩增技术)多种方法对血清学检测阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1RNA检测,对乙肝阳性献血者追踪检测ALT和乙肝两对半标志物,对丙肝核酸阳性献血者追踪检测ALT及抗-HCV及HBV DNA和HCV RNA病毒载量。结果共对141288人份血样进行了检测,检出HBsAg(-)、HBV DNA阳性28例,总阳性率为0.020%,其中21例为anti-HBc阳性,占0.015%。HIV-1RNA未检出阳性,17例HBsAg(-)、HBV DNA阳性样本追踪发现,9例发生了血清转换现象,4例呈窗口期特征,所有追踪的HBV DNA阳性献血者ALT检测结果正常。1例anti-HCV(-)、HCV RNA阳性献血者追踪发现为典型窗口期献血,ALT显著升高。结论应采用高灵敏度的核酸扩增技术筛查血液中的乙肝和丙肝病毒,可提高血液安全。; 叶贤林郑欣熊文张红许晓绚曾劲峰; 关键词：核酸扩增技术供血者血清转换

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国家自然科学基金(81071348)

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