河南省教育厅自然科学基金(2012B310019)
- 作品数：14 被引量：24H指数：3
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- 弓形虫actin蛋白多克隆抗体的制备及纯化
- 2013年
- 目的制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化。方法以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1mmol/L IPTG诱导表达actin-His6蛋白,采用亲和层析法纯化;取200μg纯化蛋白加等量佐剂混合,免疫SD大鼠4次,收集抗血清,用亲和纯化柱纯化。结果 PCR扩增出actin基因并成功构建actin/pET30a/BL21表达系统,获得actin-His6蛋白,制备的大鼠源性actin-His6蛋白多克隆抗体纯化后为单一蛋白抗体。结论制备并纯化了抗弓形虫actin的多克隆抗体,为弓形虫入侵机制的研究奠定了基础。
- 郑斌尹志奎詹希美
- 关键词：弓形虫肌动蛋白多克隆抗体
- 国外羊弓形虫感染情况及影响因素研究进展被引量：5
- 2013年
- 弓形虫可以感染多种动物和人导致人兽共患弓形虫病。山羊和绵羊感染后不仅影响其发育、繁衍,对畜牧业发展造成一定的经济损失。若以感染动物来源的奶和肉制品为食物,还可能威胁到人类的健康。本文对国外的山羊、绵羊弓形虫感染情况及影响因素的研究进展进行了综述。
- 郑斌尹志奎韩丁丁亢彩彩
- 关键词：山羊绵羊弓形虫血清阳性率影响因素
- 欧美散养鸡感染的弓形虫基因型研究进展
- 2015年
- 鸡在弓形虫病的传播中起重要作用,食入感染了弓形虫的鸡肉可以影响到人类和其他动物的健康。弓形虫在遗传上有多样性,弓形虫的毒力和致病力与基因型相关,不同地区的鸡感染弓形虫的基因型不同。对欧美散养鸡感染的弓形虫基因型进行了综述,以期对鸡肉制品的安全供给和弓形虫病的防治提供帮助。
- 郑斌尹志奎郑爱武
- 关键词：散养鸡弓形虫基因型
- 刚地弓形虫类枯草杆菌蛋白酶的研究进展被引量：1
- 2014年
- 刚地弓形虫的类枯草杆菌蛋白酶是虫体粘附、入侵宿主细胞过程中的一种重要蛋白酶。研究发现弓形虫的类枯草杆菌蛋白酶的催化区域高度保守;蛋白酶有多个作用底物,并与虫体的运动及毒力相关。本文对已发现的弓形虫类枯草杆菌蛋白酶的结构及性能作一综述。
- 郑斌尹志奎
- 关键词：刚地弓形虫蛋白结构
- 定点突变技术鉴定弓形虫微线体蛋白6与醛缩酶的作用位点被引量：1
- 2014年
- 目的利用定点突变技术鉴定弓形虫微线体蛋白6(MIC6)与醛缩酶的作用位点。方法根据GenBank中的弓形虫RH株MIC6基因序列(登录号为AF110270)及C端序列设计特异性引物,将MIC6蛋白羧基端(MIC6C)348位色氨酸(W348)的密码子碱基突变为缬氨酸(V)的碱基,PCR扩增MIC6C W/V突变体基因片段,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3);0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-MIC6C W/V突变体蛋白,亲和层析法纯化表达产物。以GST-MIC6C W/V突变体蛋白为探针蛋白,GST-MIC6C蛋白为对照蛋白,分别与弓形虫速殖子裂解液进行GST沉降实验,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析实验产物。分别以GST-MIC6C W/V突变体蛋白和GST-MIC6C蛋白为探针蛋白和对照蛋白,与弓形虫醛缩酶蛋白液进行GST沉降实验,SDS-PAGE分析实验产物。结果获得了MIC6C W/V突变体基因片段,构建了相应的原核表达载体,表达并纯化了GST-MIC6C W/V突变体蛋白。GST-MIC6C W/V突变体蛋白与弓形虫速殖子裂解液的GST沉降产物中未见蛋白条带,而GST-MIC6C蛋白的沉降产物中可见一蛋白条带,且能被抗醛缩酶抗体特异识别;GST-MIC6C W/V突变体蛋白与弓形虫醛缩酶蛋白液的GST沉降产物中未见蛋白条带,而GST-MIC6C蛋白的沉降产物中可见一蛋白条带。结论色氨酸(W348)为MIC6与醛缩酶的作用位点。
- 郑斌尹志奎詹希美
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶定点突变技术
- 刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾（MIC8CTD）的作用蛋白。方法分别以GST—MIC8CTD蛋白和GST蛋白（对照）作为探针蛋白，采用GSTpull—down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析；将目标蛋白转印至PVDF膜，测序，通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列，初步确定目标蛋白；以目标蛋白抗体为一抗进行Westernblot，分析GSTpull—down产物与目标蛋白抗体的相互作用；分别用GST—MIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验，沉淀物进行SDS—PAGE和Westernblot分析。结果PAGE显示GST—MIC8CTD蛋白的pull—down产物中有一蛋白条带（分子质量单位约35～45ku），GST蛋白的pull—down产物中无此蛋白；BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致；ECM检测GST—MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别，免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GSTpull—down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定，弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。
- 郑斌尹志奎史明珠任红斌詹希美
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶免疫共沉淀
- 河南新乡地区猪弓形虫感染与风险因素分析被引量：4
- 2017年
- 为了解河南新乡地区猪弓形虫感染的情况及风险因素,用间接血凝法对2011年-2013年采集的猪血样进行检测。采用SPSS13.0统计分析资料,χ~2检验比较年度间及各风险因素的差异。结果显示,新乡地区2011年-2013年猪弓形虫血清阳性率分别为20.9%、34.4%和23.9%,年度间弓形虫血清阳性率差异不显著(P>0.05);弓形虫感染的风险因素中,猫出现次数的高低之间、是否接触啮齿类(鼠类)之间、有否与狗接触之间和有无流产史之间差异显著(P<0.05)。调查结果表明,河南新乡地区的猪弓形虫感染普遍存在,猫出现的次数、接触啮齿类(鼠类)、接触狗和有流产史等因素对猪感染弓形虫有影响。
- 郑斌尹志奎李金娜姚志军王帅任红斌张海珠
- 关键词：刚地弓形虫血清学调查
- 弓形虫MIC6羧基端与醛缩酶相互作用的鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的鉴定弓形虫MIC6羧基端和醛缩酶的相互作用及两种蛋白在虫体内的定位。方法分别用GST-MIC6C多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀实验,实验产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。弓形虫速殖子涂片,免疫荧光定位法确定两种蛋白在虫体内的定位。结果与对照相比,GST-MIC6C多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白条带可分别被相应的抗体识别。荧光显微镜下显示,MIC6(红色荧光)和醛缩酶(绿色荧光)两种蛋白皆定位于弓形虫的顶端。结论弓形虫MIC6羧基端与醛缩酶存在相互作用并在虫体内存在共定位关系。
- 郑斌尹志奎詹希美
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶免疫共沉淀共定位
- 国外牛、马弓形虫感染及影响因素分析被引量：2
- 2013年
- 弓形虫可以感染多种动物和人导致人兽共患弓形虫病。牛和马感染后不仅影响其发育、繁衍,而且对畜牧业发展造成一定的经济损失。若以感染动物来源的奶和肉制品为食物,还可能威胁到人类的健康。本文对境外的牛、马弓形虫感染及影响因素进行了分析。
- 郑斌尹志奎黄倩李小会
- 关键词：弓形虫影响因素
- 国外猪弓形虫感染的风险因素及基因型研究进展被引量：3
- 2014年
- 弓形虫可以感染多种动物和人导致人兽共患弓形虫病。猪感染弓形虫后不仅影响其自身的发育、繁殖,对养殖业发展造成一定的经济损失,若以感染猪来源的肉制品为食物,还可能威胁到其他动物和人类的健康。猪弓形虫感染受多种因素(年龄、猪场管理及外界环境中猫、鼠的存在等)的影响,不同地区的猪弓形虫感染的风险因素不同;弓形虫在遗传上有多样性,不同地区的猪感染弓形虫的基因型不同。论文对国外的猪弓形虫感染的风险因素及基因型的研究进展进行了综述。
- 尹志奎王东郑斌
- 关键词：弓形虫基因型
