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军队“十五”医药卫生科研基金: 作品数：64 被引量：641H指数：14; 相关作者：姚咏明盛志勇刘毅杨明会窦永起更多>>; 相关机构：中国人民解放军总医院解放军总医院第一附属医院第四军医大学唐都医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>

一个编码lamin样蛋白的基因在人胃癌组织低表达被引量：2: 2003年; 目的　克隆人胃癌相关基因 ,分析其在胃粘膜组织的表达特征。方法　采集 7例胃窦部进展期腺癌患者配对的新鲜癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜组织 ,荧光标记的mRNA差异显示技术 (mRNAdif ferentialdisplayreversetranscriptasepolymerasechainreaction ,DDRT PCR)分析了不同组织间表达基因的差异。对感兴趣的差异基因片段进行了克隆、Northern印迹及核苷酸序列分析。用原位杂交分析了目的基因在 3 0例胃腺癌患者配对的石蜡包埋癌组织及正常胃粘膜组织中的表达特征。结果　通过DDRT PCR获得 1条差异片段 ,在 6/7位患者的正常和癌旁组织中的表达高于癌组织 ,命名为W 12。将W 12克隆入pGEM TEasy载体 ,插入序列命名为GCRG 12 3。Northern印迹显示与DDRT PCR一致的结果 ,人类多组织Northern显示GCRG 12 3广泛存在于人正常胸腺、前列腺、睾丸、卵巢、小肠、结肠、外周血中性白细胞。序列分析结果显示GCRG 12 3由 44 5bp组成 ,具有 1个完整的开放阅读框架 ,含 49个氨基酸。BLASTX分析显示其编码产物是 1个人类lamin样蛋白。该核苷酸序列登录GenBank ,登录号AF45 45 5 4,预测编码产物序列的登录号AAL61668.1。原位杂交显示该基因在正常的胃粘膜上皮细胞和幽门腺高表达 ,而在胃腺癌组织。; 王刚石王孟薇吴本俨尤纬缔; 关键词：胃癌基因表达原位杂交核纤层蛋白

小鼠AMCase基因突变体的cDNA克隆及序列分析被引量：3: 2006年; 目的克隆小鼠酸性哺乳动物几丁质酶（AMCase）,并进行序列分析。方法从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因，构建pMD18T／AMCase重组载体，测序后应用DNAMAN4.0软件与标准序列进行比较，并通过SignalP 3.0和TMHMM Serverv．2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析。结果所克隆基因共编码473个氨基酸,分子量为51．93kD。等电点为4．73。与AMCase同源性达99．57％，同属18家族的几丁质酶成员，由信号肽（氨基酸1～21）、催化区（氨基酸22～391）、铰链区（氨基酸392～425）和结合区（氨基酸426～473）组成。编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变。292位氨基酸由Ala（丙氨酸）突变为Pro（脯氨酸），404位氨基酸由Thr（苏氨酸）突变为Ser（丝氨酸）。结论所克隆的基因为AMCase的一个突变体。其相关生物学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础。; 陈凌沈柱刘玉峰刘斌刘瑛; 关键词：突变体 DNA

LPS、TNF-α、IL-1β对人脐静脉内皮细胞COX-2表达的影响被引量：3: 2004年; 目的 :探讨LPS、TNF -α、IL - 1β对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)环氧合酶 2 (COX - 2 )表达及前列腺素(PGs)的影响。方法 :在分离培养的HUVEC细胞给予LPS、TNF -α、IL - 1β刺激 2 4h后 ,采用原位杂交、逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)、免疫组化检测HUVECCOX - 2mRNA及蛋白的表达并观察了培养液前列腺素 (PGs)的变化。结果 :静息状态的HUVEC表达极少量的COX - 2 ;受炎性刺激后 ,HUVEC大量表达COX - 2mRNA及蛋白 ,同时伴有PGs的升高。结论 :结果提示 ,静息状态下HUVEC表达极少量的COX - 2 ,炎性刺激可诱发COX - 2高表达和PGs升高 ,因此内皮细胞可通过COX - 2的调节参与炎症反应。; 王建春毛宝龄钱桂生; 关键词：人脐静脉内皮细胞前列腺素内过氧化物合酶前列腺素类

人类survivin基因的克隆及在胃粘膜中表达的初步分析被引量：8: 2003年; 目的　克隆人类 Survivin(SVV)基因并分析其在胃粘膜中的表达情况。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应从人胃癌组织中克隆 SVV基因 ,地高辛标记 c RNA探针 ,原位杂交检测其在胃粘膜中的表达。结果　得到两个 SVV基因 c DNA克隆、即 SVV- S4 A与 SVV- S1B,前者与已知 SVV基因 c DNA序列相同 ,后者发生了 SVV第 3外显子丢失。原位杂交显示 SVV- S4 A主要表达于胃癌细胞的胞质 ,SVV- S1B主要表达于正常胃组织。结论　 SVV- S4 A和 SVV-; 杨欣艳王孟薇王刚石尤纬缔; 关键词：SURVIVIN基因克隆胃粘膜胃癌

HCVIRES介导荧光素酶小鼠体内表达模型的建立被引量：6: 2004年; 詹林盛饶林彭剑淳王会中贾帅争王全立; 关键词：丙型肝炎病毒荧光素酶动物模型

人类抗凋亡基因Survivin的克隆及其在胃癌细胞中的表达定位: 2003年; 目的从人胃癌细胞中克隆Survivin(SVV)基因,研究其在胃癌细胞中的表达定位。方法 RT-PCR技术自人胃癌细胞SGC7901中克隆Survivin基因。建立真核表达载体pEGFP-N1-SVV。将含SVV序列的阳性重组子克隆瞬时转染人胃癌细胞SGC7901。激光共聚焦技术检测SVV基因转染胃癌细胞后的细胞内定位。结果获得人SVV基因的全长cDNA片段,经序列测定、核苷酸序列比对,证实所获片段与SVV基因已知序列完全一致。含SVV基因序列的阳性重组子瞬时转染人胃癌细胞SGC7901后,激光共聚焦显示,SVV基因转染成功,并且表明,SVV基因在胃癌细胞的细胞浆中表达。结论 SVV基因在胃癌细胞的细胞浆中表达。; 杨欣艳王孟薇王刚石; 关键词：抗凋亡基因 SURVIVIN 胃癌细胞 DNA 逆转录-聚合酶链反应核苷酸

湿热复合创伤应激对兔血浆胃动素的影响被引量：4: 2005年; 目的探讨高温高湿创伤复合条件下血浆胃动素的变化规律,为研究提高部队对抗应激反应的能力提供实验依据。方法(1)常温对照组置于干球温度(24±1)℃、相对湿度(55±5)%环境2 h;(2)常温创伤组置于同样环境,以350 N的力撞击致兔右后肢股骨中下段粉碎性骨折2 h;(3)湿热无创组置于仿真模拟气候舱[干球温度(38±1)℃,相对湿度(65±5)%]2 h;(4)湿热创伤组同时施加(2)、(3)两种条件2 h。每30 m in抽取静脉血4 m l,用放射免疫法测定血浆胃动素。结果湿热、创伤应激均可引起血浆胃动素含量的升高,4组血浆胃动素的变化均有显著差异(P<0.05)。结论复合因素应激对血浆胃肠激素的影响大于单因素应激,湿热应激对胃肠激素的影响超过创伤应激,且应激刺激强度大,机体的内分泌反应出现早,而早期动态观察血浆胃动素变化,对把握干预时机、提高机体对应激的适应能力有重要意义。; 翟惠敏李亚洁陈光忠罗炳德廖小艳王惠珍; 关键词：湿热环境高温环境应激生理

经心包腔途径转染提高大鼠体内心肌细胞转染的效率被引量：1: 2012年; 背景:如何获得安全、有效、广泛心肌组织的转染一直是国内外学者研究的热点。目的:探讨能够改善动物水平心肌组织非病毒载体的转染效率、增强基因导入靶向性的方法。方法:以β半乳糖苷酶质粒PLacZ作为报告基因,将Wistar大鼠随机分为5组:①空白组。②心包腔内组:心包腔注射质粒+微泡+酶混悬液,超声导入。③心包腔内阴性对照组:以生理盐水代替质粒干预。④舌下静脉组:舌下静脉注射质粒+微泡混悬液,超声导入。⑤舌下静脉阴性对照组:以生理盐水代替质粒干预。注射6d后处死,进行心、肺、肝、肾组织的X-gal染色。结果与结论:转染6d后,仅有心包腔内组大鼠的部分心肌细胞在心尖、心室及心房水平可见明显的蓝染,其他各组大鼠心肌X-gal染色为阴性;各组大鼠肺、肝、肾组织X-gal染色均为阴性。提示采用心包腔内途径转染、再辅以超声微泡导入以及酶类的使用,可明显改善质粒对在体心肌细胞的转染效率,且不伴有心外组织目的基因的表达,具有较好的靶向性。; 齐迎春谢晓华陈雯李朝晖; 关键词：心包心肌细胞 SIRNA RNAI 转染

纳米级金颗粒在基因芯片检测技术中的研究进展被引量：14: 2005年; 纳米直径的金颗粒用于生命科学研究中的示踪技术已有较长的历史,由于其独特的物理、化学性质及生物相容性,近年来更是在芯片检测技术中得到了广泛的应用,特别是用不具备吸附能力离散的纳米金作为信号报告分子则被认为是芯片检测中的一个重要进展。; 顾大勇鲁卫平周元国; 关键词：基因芯片纳米金胶体金

杀菌/通透性增加蛋白对脓毒症大鼠组织TNF-α表达的影响及意义被引量：7: 2002年; 目的　探讨杀菌 /通透性增加蛋白 (BPI)对脓毒症动物肝、肺肾组织肿瘤坏死因子 α (TNF -α)表达及多器官功能障碍的影响与意义。方法　采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。动物分为正常对照组 (10只 )、CLP组 (2 0只 )及BPI治疗组 (2 0只 )。CLP后 12h和 2 4h处死动物 ,分别检测肝、肺、肾组织TNF αmRNA表达、TNF α蛋白水平和器官功能指标。结果　CLP后 12h动物肝、肺、肾组织TNF αmRNA表达均显著增强 ,分别为伤前基础值的 2 4 6倍 (P <0 0 5 )、 2 86倍 (P <0 0 1)、 2 2 7倍 (P<0 0 1) ,同时各组织TNF α水平迅速升高 (P <0 0 1)。重组BPI治疗可不同程度地抑制肝、肺、肾组织TNF -αmRNA表达上调 (P <0 0 5 ) ,12h各组织TNF α水平显著降低 (P <0 0 5 ) ,均恢复至伤前正常范围。此外 ,BPI组动物血清丙氨酸转胺酶、肌酐水平在CLP后 12h显著低于未治疗组 ,CLP后 2 4h肺组织髓过氧化物酶活性也明显下降 (P <0 0 1)。结论　严重腹腔感染早期应用重组BPI治疗有助于下调TNF α的过量表达 ,从而抑制机体过度炎症反应。; 姚咏明陆家齐张立天董宁鄢小建于燕方文慧盛志勇; 关键词：杀菌脓毒症多器官功能障碍综合征

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