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间日疟原虫裂殖子表面蛋白3α基因多态性的研究进展: 2013年; 间日疟原虫裂殖子表面蛋白3α(Plasmodium vivax merozoite surface protein-3α,PvMSP-3α)是红内期间日疟原虫裂殖子形态的一种表面蛋白。PvMSP-3α基因在世界范围内具有高度基因多态性,是对间日疟原虫进行基因分型和流行病学研究较合适的分子标记物,为开发抗疟疫苗提供了重要候选抗原。本文就PvMSP-3α的分子结构、基因多态性和基因分型作一综述。; 徐超徐秀来黄炳成; 关键词：间日疟原虫分子标记物多态性基因分型

输入性恶性疟原虫耐药相关基因Pfcrt和Pfmdr1单倍型及突变分析被引量：2: 2016年; 目的了解目前山东省输入性恶性疟原虫抗药性基因Pfcrt和Pfmdr1的单倍型,分析突变基因型及其分布情况。方法根据恶性疟原虫Pfcrt和Pfmdr1基因序列设计套式PCR引物,对采自全省非洲务工返乡的输入性恶性疟感染者血样扩增,并对其产物进行基因测序和序列对比分析。结果 68例样本Pfcrt基因第72~76位点和Pfmdr1基因第86、1 042和1 246位点目的片段全部成功扩增和测序。Pfcrt基因中69.12%为野生单倍型CVMNK,30.88%为突变单倍型,突变型包括CVIET、CVIDT及混合型,其中CVIET数量最多。Pfmdr1基因中69.12%为野生单倍型NND,30.88%为突变单倍型,即YND及混合基因型。6个非洲输入来源国样本中,除几内亚Pfcrt基因全部为野生型外,其它国家Pfcrt和Pfmdr1基因均有突变型存在。5例样本Pfcrt和Pfmdr1基因共同表现为突变单倍型。结论山东省输入性恶性疟Pfcrt和Pfmdr1基因突变单倍型具有多样化特征。Pfcrt和Pfmdr1突变型比例均低于野生型,提示目前该省流行的输入性恶性疟未出现严重的氯喹耐药性。; 徐超魏庆宽李瑾肖婷尹昆孔祥礼王用斌崔勇孙慧赵桂华朱嵩闫歌黄炳成; 关键词：恶性疟原虫输入性病例单倍型

3种方法提取血膜疟原虫DNA的比较研究被引量：1: 2014年; 目的对3种提取血膜疟原虫DNA的方法进行比较研究，筛选出从血膜中提取疟原虫DNA的最佳方法。方法血膜依次经过二甲苯脱油和乙醇脱色处理，然后分别采用NazHPO。法、Chelex-100法和试剂盒法提取DNA。根据疟原虫小亚基核糖体RNA编码基因（18SSSUrRNA）保守区设计套式PCR引物，分别以3种方法提取的疟原虫DNA为模板进行套式PCR扩增，并对扩增产物进行测序分析。结果疟原虫新血膜（保存1年内）3种方法提取的DNA经PCR扩增后均呈阳性且测序成功，与镜检结果一致。Chelex-100法提取的旧血膜（保存1～5年）标本和试剂盒法提取的旧血膜和陈旧血膜（保存6～10年）的DNA经PCR扩增后均呈阳性且测序成功，与镜检结果一致。结论3种方法均可成功提取新血膜疟原虫DNA，Chelex-100法可提取旧血膜的疟原虫DNA，试剂盒提取法适用于旧血膜和陈旧血膜的疟原虫DNA的提取。; 肖婷徐超李瑾魏庆宽尹昆朱嵩孔祥礼赵长磊黄炳成; 关键词：疟原虫血膜提取DNA

山东省间日疟原虫MSP-1和CSP等位基因型及同源性分析: 2017年; 目的分析山东省间日疟原虫MSP-1和CSP基因类型及其同源性,为病例溯源提供科学依据。方法采集2011年山东省报告的12例间日疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA;分别根据间日疟原虫MSP-1和CSP基因序列设计引物,进行巢式PCR扩增、酶切、测序、序列比对及同源性分析。结果 12份间日疟患者血样MSP-1基因全部出现470bp扩增条带以及350、120 bp酶切片段,均为Sal-1型;MSP-1进化树分析显示,9份省内感染者样品序列同属一个分枝,1份印度感染者样品序列与印度分离株位于同一分枝。12份间日疟患者样品CSP基因均包含GDRA(D/A)GQPA序列,为PV-Ⅰ型,其中10份省内感染者和1份广东感染者样品CSP基因出现560~840 bp和150~230 bp两种扩增条带,为PV-Ⅰ型温带族,1份在印度感染者样品CSP基因仅出现560~840 bp条带,为PV-Ⅰ型热带族。CSP进化树表明,10份省内感染者及1份广东感染者样品序列同属一个分枝,1份在印度感染者样品序列与印度和印度尼西亚分离株位于同一分枝。结论山东省本地感染间日疟原虫MSP-1基因型均为Sal-1型,CSP基因型均为PV-Ⅰ型温带族,本地虫株具有较强的基因同源性。; 徐超魏庆宽孔祥礼李瑾王用斌肖婷尹昆贾凤菊孙慧黄炳成陈延平; 关键词：间日疟原虫基因分型同源性

套式聚合酶链式反应在疟原虫检测和分型中的应用研究被引量：6: 2013年; 目的比较疟疾病例样本套式PCR检测和传统镜检结果,探讨套式PCR在疟疾诊断中的应用价值。方法采集疟疾患者血样,分别涂制厚、薄血膜用于常规镜检;抗凝血或滤纸血用于提取疟原虫DNA等。按要求设计属种等多套引物,应用套式PCR扩增感染人的4种疟原虫目的基因片段,将检测结果与镜检结果进行比较分析,并对目的片段进行测序鉴定等。结果 259份血样,套式PCR共检测出恶性疟187例、间日疟45例、卵形疟8例和三日疟1例,阴性10例。其中恶性疟阳性检出率最高(75.10%),间日疟阳性检出率次之(18.07%),还检测到混合感染血样8份(3.21%)。与Gen Bank标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确,显示套式PCR在分型上比传统镜检更客观。套式PCR检测与传统镜检结果比较显示,前者阳性率(96.14%)明显高于后者(90.73%),并且差异具有统计学意义(χ2=12.07,P<0.05)。结论套式PCR法检测疟原虫具有较高敏感性和特异性,且适用于疟原虫混合感染,在疟疾病例诊断和分型方面均具有良好的应用前景。; 徐超魏庆宽李瑾肖婷王用斌孔祥礼张本光魏艳彬赵长磊黄炳成; 关键词：疟疾显微镜检查

提取陈旧阳性血膜疟原虫DNA方法的研究被引量：1: 2015年; 目的建立一种能够提取陈旧阳性血膜疟原虫DNA的方法,为疟原虫基因溯源研究奠定基础。方法应用DNA抽提试剂盒(QIAampDNA Mini Kit)改良后提取41份吉氏染色镜检阳性血膜的疟原虫DNA,并与Chelex-100和Na2HPO4法进行比较。巢式PCR扩增疟原虫SSU r RNA基因片段,鉴定疟原虫虫种。PCR结果进行测序和序列比对,统计分析20世纪80年代与近10年血膜、不同血膜处理方法以及不同质量血膜的PCR阳性检出率差异。结果改良试剂盒法PCR结果总阳性检出率为70.7%(29/41)。80年代和近10年血膜PCR阳性检出率分别为78.6%(11/14)和66.7%(18/27),两组间差异无统计学意义(χ2=0.63,P>0.05)。经去油、脱色处理和未经处理组血膜的PCR阳性检出率分别为62.5%(15/24)和82.4%(14/17),两组间差异无统计学意义(χ2=1.89,P>0.05)。质量较好和较差血膜的PCR阳性检出率分别为93.3%(28/30)和9.1%(1/11),两组间差异有统计学意义(χ2=27.59,P<0.01)。测序结果表明扩增目的片段与预期结果一致。Chelex-100和Na2HPO4法PCR未能扩增出特异性目的条带。结论试剂盒(QIAampDNA Mini Kit)改良法提取80年代血膜疟原虫DNA可获得较高PCR阳性检出率,且染色剂和镜检油渍对血膜疟原虫DNA提取效果无明显影响。; 徐超魏庆宽李瑾肖婷贾凤菊王卫艳尹昆付婷霞赵桂华刘功振黄炳成; 关键词：疟原虫 DNA提取巢式PCR

套式聚合酶链式反应诊断三日疟原虫感染的临床应用被引量：4: 2014年; 目的应用套式聚合酶链式反应(PCR)扩增小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因诊断三日疟原虫感染,以减少三日疟的漏诊和误诊。方法分别提取可疑三日疟患者抗凝血DNA和对照间日疟、恶性疟患者抗凝血DNA,以此为模板,用疟原虫属特异性引物进行第一轮扩增;然后以第一轮扩增产物为模板,用4种疟疾的种特异性引物进行第二轮扩增,比较扩增出的18 SSU rRNA基因片段的大小,并对目的片段进行测序鉴定。结果经属特异性引物PCR扩增后,3个样本均出现大小约为1 200bp的条带。经种特异性引物PCR扩增后,间日疟及恶性疟确诊样本均扩增出相应的120bp和205bp特异性条带;可疑患者样本仅在用三日疟原虫种特异性作引物时扩增出144bp特异条带,与理论值相符,与Genbank标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确。证实患者感染三日疟原虫。结论利用小亚单位核糖体核糖核酸基因片段三日疟种特异引物进行扩增可以用于诊断三日疟原虫感染。; 李瑾徐超魏庆宽肖婷孔祥礼王用斌张本光魏艳彬赵长磊黄炳成

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山东省自然科学基金(2012ZRC03040)

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