国家自然科学基金(39870854)
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
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- 相关机构：北京大学河南省人民医院北京医科大学人民医院更多>>
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- 人卵巢癌永生化细胞系BUPH:OVSC-2的建立及其生物学特性研究被引量：6
- 2002年
- 背景与目的:利用永生化技术建立预期表型的细胞系,已成为建系的重要手段之一,而人卵巢癌永生化细胞系的建立国内外少有报道。本文介绍人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系的建立,以及对其生物学特性的研究。方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因SV40T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究其生物学特性,并与其来源细胞的生物学特性进行比较。结果:建立一株人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,命名为BUPH:OVSC-2,现已传至90余代。其生物学特性为:形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;具有恶性细胞的特征,恶性度高。通过比较,与其来源细胞的生物学特性无明显差别。结论:BUPH:OVSC-2为一株恶性度高的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,保留了其来源细胞的生物学特性,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型。
- 冯捷刘广芝付天云叶雪姚煜
- 关键词：肉瘤样癌细胞系永生化生物学特征
- SV40 T基因诱导的人卵巢癌细胞永生化被引量：1
- 2002年
- 目的 建立人卵巢癌永生化细胞系 ,为卵巢癌体外研究提供实验模型。方法 利用基因重组技术构建猴肾病毒 4 0 (SV4 0 )T抗原基因的高效真核表达载体 pcD2 SV4 0。将其转染 10例原代培养的早期传代细胞 ,经G4 18筛选 ,抗性克隆扩大培养 ,建立永生化细胞系。免疫组化检测细胞的上皮起源 ,用PCR、RT PCR和SouthernBlot方法鉴定SV4 0T基因在转染细胞中的表达。观察所建立的永生化细胞系的染色体核型。结果 10例转染细胞中 ,6例筛选出抗性克隆。角蛋白免疫组化证实 3例为上皮起源。其中 2例上皮起源细胞得以扩大培养成系 ,长期稳定传代 ,分别命名为BUPH :OVSC 2和BUPH :OVCA 3。经鉴定两种细胞系中存在SV4 0T在基因水平及转录水平的表达。其染色体核型均符合人体恶性细胞特征。结论 利用SV4 0T抗原基因进行人卵巢癌原代细胞的永生化是一种可行的、可重复的建系方法 ,可提高卵巢癌细胞成系机率。
- 刘广芝冯捷叶雪张辛燕钱和年
- 关键词：卵巢癌细胞永生化
- 去甲斑蝥素联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测NCTD单药或联合ABT-737对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa增殖的影响;采用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果:NCTD单药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的增殖,抑制作用呈剂量依赖性。NCTD与ABT-737联用后抑制作用明显增强。1μmol/L ABT、60μmol/L NCTD及两药联用诱导HeLa细胞的凋亡率分别为(31.65±7.75)%、(40.34±14.52)%和(63.03±10.90)%,诱导SiHa细胞的凋亡率分别为(9.76±0.04)%、(22.04±3.03)%和(58.36±2.31)%。NCTD、ABT两药联合的促凋亡作用比单药显著增强(P<0.05)。结论:NCTD单药在体外能够明显抑制宫颈癌细胞HeLa、SiHa的增殖,与ABT-737联用后抑制增殖和促凋亡作用更加显著。
- 王娜张菊新刘广芝
- 关键词：宫颈肿瘤斑蝥素细胞增殖细胞凋亡
- 人卵巢肉瘤样癌细胞系BUPH:OVSC-1的建立及其生物学特性被引量：2
- 2004年
- 目的:介绍人卵巢肉瘤样癌细胞系的建立,研究其生物学特性。方法:以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养,建立人卵巢肉瘤样癌细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,对其生物学特性进行研究。结果:首次建立一株人卵巢肉瘤样癌细胞系,命名为BUPH:OVSC-1,现已传至100余代。其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;染色体为假二倍体,染色体丢失,且有三条标记染色体;具有集落形成能力;裸鼠皮下种植瘤生长快,与原组织形态相似;组织化学奥辛蓝过碘酸雪夫氏反应、免疫组化角蛋白7及波形蛋白染色均阳性。结论:BUPH:OVSC-1为一株高度恶性人卵巢癌细胞系,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征,可作为卵巢肉瘤样癌研究的实验模型。
- 刘广芝冯捷崔恒昌晓红钱和年
- 关键词：卵巢肿瘤肉瘤样癌细胞系
- SV40T基因介导的永生化对细胞生物学特性的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究SV40 T基因对其诱导的永生化细胞系细胞表型的影响。方法以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因———SV40 T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究转染与未转染细胞的生物学特性,通过四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)在相同条件下检测转染与未转染细胞对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性。结果建立人卵巢肉瘤样癌细胞系,命名为BUPH:OVSC-1。经SV40 T抗原基因转染,建立人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,命名为BUPH:OVSC-2,两者均已长期稳定传代。通过比较,两者的生物学特性无明显差别,对不同化疗药物的敏感性无明显差别。结论SV40 T基因永生化的细胞保留了原细胞的分化表型,SV40介导的永生化细胞系可作为体外研究的模型。
- 刘广芝冯捷崔恒昌晓红
- 关键词：SV40肉瘤样癌细胞系永生化
- 卵巢肉瘤样癌细胞系的生物学特性及对化疗药物的敏感性
- 2006年
- 目的研究人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系BUPH:OVSC2的生物学特性,筛选卵巢肉瘤样癌敏感的化疗药物。方法以手术切除的卵巢肉瘤样癌腹壁转移组织为材料,进行体外培养。将永生化基因———SV40T抗原基因转染第10代细胞,经筛选,抗性克隆扩大培养,得到人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系。通过光学显微镜、电子显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等,研究其生物学特性。用MTT的方法检测该细胞系对顺铂、阿霉素、足叶乙甙、拓扑替康四种化疗药物的敏感性。结果人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,BUPH:OVSC2,现已传至100余代。其生物学特性为,形态学观察细胞呈肉瘤样细胞形态,超微结构证实为上皮起源;细胞生长旺盛;具有恶性细胞的特征,恶性度高。该细胞在体外对阿霉素和顺铂非常敏感,对足叶乙甙尚敏感,对拓扑替康不敏感。结论BUPH:OVSC2为一株恶性度高的人卵巢肉瘤样癌永生化细胞系,保留了其来源细胞的生物学特性,阿霉素与顺铂联合治疗可能是卵巢肉瘤样癌较敏感的化疗方案。
- 刘广芝冯捷崔恒昌晓红
- 关键词：卵巢肿瘤肉瘤样癌细胞系永生化化学敏感性
- 人B7-1、IFN-γ双顺反子逆转录病毒载体的构建和表达被引量：2
- 2000年
- 目的 :制备免疫基因修饰的卵巢癌肿瘤疫苗。方法 :利用口蹄疫病毒的内在性核糖体插入位点 (internalribosomeentrysites,IRES) ,通过基因克隆技术构建人B7 1、IFN γ双顺反子逆转录病毒载体PLXSN/B7 1IFN γ。结果 :将PLXSN/B7 1IFN γ转染逆转录病毒包装细胞 ,包装成病毒 ,经滴度测定后 ,转导卵巢上皮癌细胞系 3AO ,筛选稳定表达克隆 ,RT PCR和免疫流式细胞测定均可证实B7 1、IFN γ在同一转导细胞的共表达。结论 :口蹄疫病毒的IRES可提供B7 1、IFN
- 曹善津钱和年冯捷付天云叶雪姚煜
- 关键词：B7-1干扰素Γ肿瘤基因治疗逆转录病毒
- 人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系BUPH∶OVCA-3的建立及其生物学特性被引量：1
- 2003年
- 介绍人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系的建立 ,研究其生物学特性 .以卵巢浆液性乳头状囊腺癌的腹水细胞为材料 ,进行体外培养 .将永生化基因———SV4 0T抗原基因转染第 2代细胞 ,得到永生化细胞系 .通过光学显微镜、生长曲线测定、染色体分析、双层软琼脂培养、裸鼠接种、免疫组化等 ,研究其生物学特性 ,并与其来源细胞的生物学特性进行比较 .建立了一株人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,命名为BUPH∶OVCA 3,现已传至 6 0余代 .其生物学特性为 ,细胞生长旺盛 ;具有人体恶性细胞的核型特征 ;细胞恶性度较低 ,不具有集落形成能力及裸鼠接种致瘤性 ;除较未永生化细胞生长速率增快 ,饱和密度增加外 ,仍保留上皮细胞的分化表型 .结果表明 ,BUPH∶OVCA 3为一株恶性度较低的人卵巢浆液性囊腺癌永生化细胞系 ,保留其来源细胞的生物学特性 。
- 刘广芝冯捷付天云叶雪昌晓红
- 关键词：浆液性腺癌细胞系永生化
- 人卵巢上皮癌细胞原代培养及细胞系BUPH:OVSC-1的建立被引量：2
- 2002年
- 目的 :为人卵巢上皮癌的研究提供更多体外研究模型 ,确立卵巢上皮癌原代培养的条件 ,建立细胞系。方法 :将 2 5例卵巢上皮癌手术切除的肿瘤组织或腹水标本进行体外培养 ,比较不同组织培养方法的效果。对所建卵巢癌细胞系的形态学、染色体核型、生长增殖及裸鼠种植情况进行观察。结果 :建立一套人卵巢上皮癌原代培养方法 ,使其体外培养传代数扩展至 10～ 15代。经原代培养得到一株人卵巢癌细胞系BUPH :OVSC 1,其形态学、染色体核型分析、接种致瘤性的观察结果表明 ,该细胞系符合人体恶性细胞特征。裸鼠种植瘤病理切片该细胞呈肉瘤样细胞形态 ,电镜及角蛋白免疫组化证实其为上皮起源。结论 :应用改良的卵巢上皮癌原代培养方法能改善细胞的体外生存期。BUPH :OVSC 1是一株特殊的人卵巢癌细胞系 ,符合人卵巢肉瘤样癌细胞系的特征 。
- 刘广芝冯捷叶雪付天云成夜霞
- 关键词：细胞系卵巢肿瘤肿瘤细胞原代培养
- 双顺反子人B7-1、IFN-γ共表达载体修饰的卵巢癌瘤苗免疫反应的研究被引量：4
- 2003年
- 目的 :研究B7 1、IFN γ双基因修饰的卵巢癌瘤苗的免疫效果。方法 :构建了双顺反子人B7 1、IFN γ共表达逆转录病毒载体 ,用其修饰卵巢癌原代细胞 ,制备成肿瘤疫苗 ,体外刺激自体淋巴细胞 ,以MTT法进行杀伤抑制试验。对SCID小鼠进行人免疫重建 ,于皮下接种双基因修饰的卵巢上皮癌细胞系 3AO ,观察肿瘤的成瘤情况。结果 :体外试验证明人B7 1、IFN γ基因修饰的卵巢癌疫苗可诱导肿瘤特异性杀伤活性。体内试验观察到双基因修饰的卵巢癌细胞系成瘤性下降。结论 :B7 1、IFN γ双基因修饰的肿瘤细胞可诱导很强抗肿瘤免疫反应 ,为联合免疫基因修饰的卵巢癌瘤苗的制备提供了一定的借鉴。
- 钱和年刘广芝曹善津冯捷叶雪
- 关键词：B7-1IFN-Γ逆转录病毒载体
