中国博士后科学基金(2005037776)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：刘玉毛敬辛晓燕张潍李萍更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双基因shRNA干扰乙酰肝素酶在卵巢癌细胞中表达的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的：采用编码2条短发卡式RNA(shRNA)的抗乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)特异性载体干扰卵巢癌细胞中Hpa的表达,观察其对肿瘤生长转移的抑制作用。方法：以脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗Hpa短发卡式RNA (Hpa-shRNA)基因真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞SKOV3；流武细胞仪鉴定转染效率,免疫组化和实时定量RT-PCR检测转染前后卵巢癌细胞中Hpa蛋白和mRNA表达,Boyden小室观测细胞增殖和侵袭能力的变化,透射电镜观察卵巢癌细胞超微结构改变。结果：Hpa mRNA表达在SKOV_3-Hpa(转染Hpa)明显升高(P＜0．01),SKOV3-Hpa-shRNA(转染Hpa- sh RNA)显著降低(P＜0．01),SKOV3-DZ-shRNA(转染非特异性sh RNA片段)和SKOV3无显著性差异(P＞0．05)。电镜下,SKOV3-Hpa组Hpa蛋白表达最为明显,SKOV3-Hpa-shRNA Hpa蛋白则最低,各组间比较差别有显著性意义(P＜0．01)。SKOV3-Hpa细胞器发达,细胞表面绒毛丰富,细胞间连接稀少。SKOV3-Hpa-shRNA以变形为主,细胞表面绒毛少,细胞器不发达,部分见线粒体皱缩,肿胀和空泡样改变。SKOV3-Hpa、SKOV3-DZ-shRNA和SKOV3-Hpa-shRNA 3种细胞穿过人工基底膜的细胞数分别为82．3±9．16,36．1±8．73和18．6±10．5,各组间比较有显著性差异(P＜0．01)。结论：双基因Hpa特异性shRNA可显著抑制卵巢癌细胞Hpa表达,降低细胞侵袭能力。
- 刘玉辛晓燕毛敬张潍
- 关键词：卵巢肿瘤RNA干扰乙酰肝素酶SKOV3细胞
- siRNA抑制卵巢癌细胞株SKOV3 HPA基因表达的研究
- 2006年
- 目的：研究siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因表达的抑制作用。方法：设计合成两对HPA编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PGenesil-1,构建siRNA真核表达载体,经稳定转染SKOV3细胞后应用RT-PCR、real-time PCR及免疫组化技术检测卵巢癌细胞中HPA基因mRNA及蛋白表达水平的抑制情况。结果：测序证实成功地构建了编码2条shRNA的siRNA真核表达载体。通过RT-PCR、real-time PCR及免疫组化技术检测转染siRNA的SKOV3细胞,与对照组相比,HPA mRNA表达水平和蛋白表达水平明显降低。结论：构建的PGenesil-1(+)-HPA重组质粒能有效的抑制HPA基因在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达,为研究HPA基因在肿瘤细胞中的调节途径和肿瘤的基因治疗提供了新的方法。
- 辛晓燕毛敬刘玉于月成李萍
- 关键词：卵巢癌
- 乙酰肝素酶基因转染SKOV3细胞对细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是能降解细胞外基质和基底膜的β-D-葡萄糖醛酸内切酶。HPA在人类正常组织局限于胎盘和免疫器官有表达,但在许多恶性肿瘤中有高水平的表达,促进了肿瘤的侵袭和转移。本文探讨乙酰肝素酶基因转染卵巢癌SKOV3细胞后对细胞生长、黏附、侵袭能力的影响。方法:以携带HPA基因的质粒(pCDNA3.0-HPA)经脂质体介导转染SKOV3细胞。RT-PCR法检测转染后HPA mRNA表达水平;MTT法检测SKOV3细胞生长曲线及细胞与细胞外基质的黏附;同质黏附试验和细胞分离试验检测细胞间的黏附和分离能力;利用transwell小室检测卵巢癌细胞SKOV3细胞的侵袭能力;流式细胞仪测细胞周期;免疫组化法检测卵巢癌细胞中HPA蛋白表达。结果:与对照组和空载组比较,转染组HPA mRNA水平上调,差异有显著性(t=-128.726,-96.959,P<0.01);细胞周期中S期指数明显增多;细胞生长曲线显示细胞生长速度增快;对细胞外基质的黏附率明显升高(t=11.824,11.234,P<0.01);同质黏附率降低(t=-14.455,-18.348,P<0.01);细胞分离率增强(χ2=869.847b,796.068b,P<0.01);穿透重组基底膜的细胞数目显著增高(t=11.964,12.263,P<0.01);细胞浆中的HPA蛋白表达显著上升。结论:转染HPA基因可以促进卵巢癌细胞的生长增值,增强卵巢癌细胞的侵袭转移能力。
- 毛敬辛哓燕刘玉李萍
- 关键词：乙酰肝素酶转染卵巢癌
