国家自然科学基金(30670109)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王洪海王虹军曹健徐胜凤金瑞良更多>>
- 相关机构：复旦大学河南工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科委“登山计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌耐药株和敏感株菌体碱性蛋白的比较蛋白质组学研究被引量：4
- 2007年
- 目的研究结核分枝杆菌耐多药菌株与敏感菌株菌体碱性蛋白的蛋白质表达差异。方法运用双向电泳技术(2-DE)比较8株耐多药菌株与9株敏感菌株的菌体碱性蛋白表达图谱差异,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果比较发现重复性较好的差异蛋白质斑点10个,获得5个明确的肽质量指纹谱,鉴定5个蛋白分别为:NADH-CoQ氧化还原酶B链(NuoB,Rv3146)、乙酰羟酸合成酶小亚基(IlvN,Rv3002c)以及3个假定蛋白,分别由Rv2159c、Rv0068、Rv0992编码。结论上述蛋白的鉴定在深入研究结核分枝杆菌耐药形成机制,筛选具有潜在价值的结核药物靶位和耐多药结核病诊断的分子标志物方面具有参考价值。
- 张鹭王庆忠路福平王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌耐多药碱性蛋白比较蛋白质组学
- 结核分枝杆菌4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合成酶的分离纯化与酶学特性
- 2008年
- 克隆并表达了结核分枝杆菌H37Rv的4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D赤藓糖醇(CDP-ME)合成酶基因,并纯化该蛋白。经HPLC和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明该蛋白为同二聚体,Mg2+为最适二价金属离子。对辅因子的底物特异性高,最适底物为胞苷三磷酸(CTP)。CTP和2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(MEP)的Km值分别为92和43μmol/L,Vmax为7.8μmol·(min·mg)-1。
- 施文钧张雪莲张旻赖旭卉王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌纯化
- 结核分枝杆菌H37Rv高丝氨酸激酶基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：1
- 2008年
- 采用PCR方法克隆到结核分枝杆菌H37Rv的高丝氨酸激酶基因thrB,将其连接到pET-28a(+)表达载体中,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中经丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到高效表达.用Ni.NTA His.Bind亲和层析柱对表达的活性重组蛋白进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究.结果表明:重组结核分枝杆菌高丝氨酸激酶能以L-高丝氨酸和ATP为底物催化L-高丝氨酸生成O-磷酰-L-高丝氨酸,该酶的比活力为2.946 U/mg,对底物L-高丝氨酸和ATP的米氏常数分别为2.303 1 mmol/L和2.342 9 mmol/L.
- 王虹军刘瑞卿金瑞良曹健徐胜凤王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌ATPNADH
- 结核分枝杆菌H37Rv组氨醇脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质分析被引量：2
- 2007年
- 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增hisD基因,构建pET-28a-HDH重组质粒;转化重组质粒到E.coli BL21(DE3)并诱导表达,纯化可溶性的结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶(HDH),并对其性质进行研究,结果表明:重组结核分枝杆菌L-组氨醇脱氢酶能以L-组氨醇和NAD+为底物催化L-组氨醇生成L-组氨酸;该酶的最适pH值为8.3,最适温度为45℃,比活力为1.788 U/mg;Mn2+,Ca2+,Zn2+,Co2+等对酶促反应有激活作用;底物NAD+和L-组氨醇的米氏常数分别为0.9765 mmol/L和2.755μmol/L;25℃时重组蛋白的二级结构中有20.5%的α-螺旋,40.9%β-折叠,4.2%β-转角,34.3%无规卷曲.
- 刘瑞卿金瑞良王虹军徐胜凤曹健淳于利娟许云敏王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌NADH
