国家自然科学基金(30670101)
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 相关作者：温博海陈梅玲王锡乐吴德平孙长俭更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国药品生物制品检定所北京市丰台区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 贝氏柯克斯体抑制宿主单核细胞的碳源代谢
- 2010年
- 贝氏柯克斯体是一种专性细胞内寄生的革兰阴性小球杆菌，为Q热的病原体。本文通过比较贝氏柯克斯体感染单核细胞和非感染单核细胞的蛋白表达谱，研究该病原体感染引发宿主细胞表达差异的蛋白。用贝氏柯克斯体I相毒株感染人单核细胞（THP一1），采用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳对感染单核细胞和非感染单核细胞进行比较蛋白质组学研究，用电泳图谱分析软件发现它们之间的差异表达蛋白，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定差异表达蛋白。结果发现，电泳图谱分析发现137个差异蛋白，质谱分析鉴定到15种差异蛋白与细胞生理代谢有关。这些蛋白的表达变化说明贝氏柯克斯体感染单核细胞使宿主细胞碳源代谢受到抑制，由此可能影响单核细胞正常杀菌功能，而有利于贝氏柯克斯体在细胞内的生存。
- 李丽莉朱力温博海高尚先王恒樑陈梅玲
- 关键词：贝氏柯克斯体单核细胞蛋白质组
- 贝氏柯克斯体重组膜蛋白抗原激活树突状细胞诱导特异性免疫应答
- 2010年
- 目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DCs;分别用Cb的5种重组膜蛋白IcmO、EnhA、SecB、Lo1A、HspB刺激DCs;用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测刺激后DCs表面分子表达。结果 SecB刺激的DCs表达CD83,CD86,CD80,CD54,CD58,和CD40水平显著高于其它4种蛋白;将SecB激活DCs或SecB激活DCs培养上清刺激T淋巴细胞,FACS检测显示刺激后CD4+和CD8+细胞高水平表达的T淋巴细胞活化标志CD69以及细胞因子IFN-γ和TNF-α。结论 SecB膜蛋白抗原能有效激活DCs和它所激活DCs能够诱导特异性细胞免疫应答,为贝氏柯克斯体潜在保护性抗原。
- 王颖王锡乐吴德平熊小路尉雁温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞表面分子流式细胞分析
- 贝氏柯克斯体新桥株刺激人树突状细胞的表型分析被引量：1
- 2009年
- 目的树突状细胞(dendritic cell,DC)具有成熟与未成熟两种形态,前者是早期免疫应答强有力的抗原呈递细胞,后者能诱导免疫耐受。分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)、Cb脂多糖(LPS)、去除LPS的Cb对DC的激活作用,探讨Cb逃逸宿主免疫清除的机理。方法从健康成年人的外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DC;分别用灭活Cb、Cb LPS、去LPS Cb刺激体外培养未成熟DC,大肠杆菌LPS作为阳性对照刺激因子;刺激后24h,用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测DC表面分子:成熟标记分子CD83与共刺激分子CD40、CD58、CD80、CD86。结果去LPS Cb刺激DC表面分子表达水平与大肠杆菌LPS刺激最相近,显著强于未刺激DC,而灭活Cb、Cb LPS刺激DC表面分子CD83、CD40、CD80、CD86的表达在一低水平。结论LPS遮盖了Cb激活DC所需的表面分子,除去LPS后暴露的分子与DC相互作用,对DC的成熟刺激作用显著高于灭活Cb、Cb LPS的刺激作用。LPS的存在有利于贝氏柯克斯体逃逸宿主的免疫清除。
- 王颖吴德平王锡乐陈梅玲尉雁温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞表面分子流式细胞分析
- 贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片的研制被引量：2
- 2008年
- 目的:构建贝氏考克斯体毒力与毒力相关蛋白芯片。方法:根据贝氏考克斯体全基因组序列,筛选出约160个编码毒力及毒力相关蛋白的基因,采用PCR扩增基因片段,将获得的基因片段与pET32a表达载体连接,然后将该重组质粒转化大肠杆菌并使目的基因表达,采用Ni-NTA亲和层析柱纯化表达的目的重组蛋白。将纯化的重组蛋白点在醛基化玻片上制备蛋白芯片。结果:由贝氏考克斯体104个重组蛋白构建毒力与毒力相关蛋白芯片,通过荧光扫描仪分析蛋白芯片与贝氏考克斯体感染的小鼠血清反应,发现10个重组蛋白与该血清反应为强阳性。结论:所制备的毒力与毒力相关蛋白芯片具有贝氏考克斯体特异性,可用于贝氏考克斯体感染患者血清的检测。
- 王锡乐温博海陈梅玲王君孙长俭杨晓
- 关键词：重组蛋白蛋白芯片
- 贝氏柯克斯体毒力相关基因芯片对其他胞内寄生菌基因组DNA检测结果分析
- 2012年
- 目的用建立的贝氏柯克斯体毒力相关基因芯片研究贝氏柯克斯体与其致病性相似的专性胞内寄生菌(立克次体、埃立克体、新立克次体),以及与其密切相关的兼性胞内寄生菌(巴通体和肺炎军团菌)等病原菌的毒力基因的差异。方法贝氏柯克斯体国际标准株-九里株作为本研究参考株,从全基因序列中选取166个毒力及毒力相关基因进行PCR扩增,纯化后的产物制备基因芯片。采用双色荧光标记,待测DNA(即用于分析的各菌株基因组DNA)用Cy5标记,贝氏柯克斯体九里株参照基因组DNA用Cy3标记。芯片杂交后,采用软件GenePixPro4.1,辅助以软件Excel,进行图片处理和数据分析。结果芯片的166个基因片段中有165个存在于所有贝氏柯克斯体属的6个分离株中,另一锚定蛋白(AnkI)基因(CBU1213)仅存在于九里株及Grita株;立克次体属的5株菌株均与CBU1631和CBU1125杂交;埃立克体属的3种菌株与新立克次体属的3种菌株均含有基因CBU1125;东方属的1株菌株具有基因CBU1449,而巴通体属的菌株,军团菌和大肠杆菌与基因芯片均无杂交。结论贝氏柯克斯体种内基因组具有高度保守性,它的专性细胞内寄生菌的毒力相关基因与胞外寄生菌的毒力相关基因有非常显著差异。
- 王世斌赵建忠董晓根
- 关键词：贝氏柯克斯体毒力基因基因芯片杂交
- 贝氏柯克斯体感染小鼠血清与其毒力相关蛋白的免疫印迹反应
- 2008年
- 目的筛选与贝氏柯克斯体感染血清反应的贝氏柯克斯体毒力相关蛋白。方法以贝氏柯克斯体标准株九里株为模板,采用PCR扩增包括IV型分泌系统、分泌性蛋白和膜蛋白在内的毒力及毒力相关的基因,将扩得目的基因片段与原核表达质粒pET32a重组,将重组质粒转化大肠杆菌,用贝氏柯克斯体实验感染小鼠血清与转化大肠杆菌作免疫印迹。结果设计173对引物共扩增出170个目的基因,经PCR及酶切鉴定,有155个基因与pET32a质粒重组成功,SDS-PAGE电泳分析发现,共有104个转化菌表达目的蛋白,在104个重组蛋白中,筛选到32个与贝氏柯克斯体感染小鼠血清反应的重组蛋白。结论这些与贝氏柯克斯体感染血清反应的毒力相关蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性。
- 王锡乐陈梅玲吴德平孙长俭杨晓温博海
- 关键词：贝氏柯克斯体毒力重组蛋白免疫印迹
- 贝氏柯克斯体抑制单核细胞的杀菌活性
- 2010年
- 目的比较贝氏柯克斯体感染单核细胞和非感染单核细胞的蛋白谱,发现该柯克斯体感染诱导单核细胞表达蛋白。方法用贝氏柯克斯体I相毒株感染人单核细胞(THP-1),采用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳对感染单核细胞和非感染单核细胞同时做蛋白分离,用专业电泳图谱分析软件发现它们之间的差异表达蛋白,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定差异表达蛋白。结果质谱分析鉴定97个差异表达蛋白,经蛋白氨基酸序列数据库检索和生物信息学分析发现其中15个差异表达蛋白参与调节单核细胞的吞噬、杀菌、细胞凋亡等。结论贝氏柯克斯体侵入单核细胞诱导细胞某些蛋白分子差异表达,增强柯克斯体细胞内入侵、抑制单核细胞的杀菌活性和细胞凋亡,促进贝氏柯克斯体在细胞内生存。
- 李丽莉朱力温博海王恒樑陈梅玲
- 关键词：贝氏柯克斯体单核细胞蛋白质组杀菌活性
