浙江省自然科学基金(Y2101289)
- 作品数：7 被引量：55H指数：5
- 相关作者：朱发明许先国吕杭军严力行应燕玲更多>>
- 相关机构：浙江省血液中心卫生部浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一例ABO血型系统B抗原减弱表达的分子机制被引量：18
- 2011年
- 目的研究1例B抗原减弱献血者的血清学特性和抗原减弱的分子机制。方法应用单克隆抗体检测献血者红细胞ABO血型抗原，标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体，并检测其血清转移酶活性。采用聚合酶链反应技术扩增ABO基因全部外显子序列和5′端非编码区序列并进行测序分析，应用逆转录-PCR和克隆测序技术分析献血者ABO cDNA转录剪接情况，采用重亚硫酸盐转化直接测序法分析ABO基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果献血者血清学表现为B抗原明显减弱，血清中无抗-B抗体，B转移酶活性降低。基因型为B101／O01，全部外显子序列和拼接接受位点碱基无任何突变。5′端非编码区序列多态性符合B101／O01的特征，启动子、增强子、负调控序列和微卫星重复序列未发现异常。献血者存在ABO基因全长cDNA转录本，未发现新的转录剪接体。与正常对照标本比较，在启动子区CpG岛内发现启动子附近有多个特异性半甲基化位点。结论启动子区CpG岛中的甲基化位点可能是引起B抗原弱表达的原因。
- 应燕玲陶苏丹和艳敏许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因甲基化表观遗传
- 1种用于分析疾病相关ABO抗原丢失的染色体杂合性缺失方法
- 目的建立1种9号染色体杂合性缺失（LOH）的分析方法,以解释因ABO基因附近染色体的LOH导致的疾病相关ABO抗原丢失现象。方法在9号染色体长臂和短臂上共选取13个微卫星位点,其中10个位点（D9S1677、D9S289...
- 许先国应燕玲洪小珍蓝小飞马开荣陈舒朱发明吕杭军
- 关键词：ABO血型血液病染色体杂合性缺失
- 文献传递
- 利用红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法监测个体嵌合状态被引量：2
- 2012年
- 本研究建立红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术以监测个体嵌合状态。根据红细胞Kidd血型等位基因的差异设计TaqMan MGB探针和特异性引物,进行实时荧光定量PCR检测个体嵌合状态,利用倍比稀释的方法模拟个体DNA嵌合状态并进行敏感性分析。结果表明,实时荧光定量PCR法可有效区分JK*A和JK*B等位基因。人工嵌合JK*A和JK*B的DNA标本实测值与理论值无显著差异(P>0.05)。在104个嵌合型细胞中存在156个供者型细胞时,该方法可有效检出供者型细胞。结论:建立的红细胞Kidd血型基因实时荧光定量PCR法检测嵌合体具有可行性,可以在一定范围内用于定量监测嵌合样本。
- 陈舒许先国刘瑛洪小珍朱发明吕杭军严力行
- 关键词：红细胞实时荧光定量PCR嵌合体
- 一例ABO亚型ABx09的撒物学研究和鉴定被引量：20
- 2011年
- 目的研究1例ABO亚型ABx09的分子机制。方法应用单克隆抗体检测先证者红细胞AB0血型抗原，标准A、B、0红细胞检测先证者血清中的ABO抗体，采用聚合酶链反应（polymerase chainrea ction，PCR）技术分别扩增先证者ABO基因的第1～7外显子序列，PCR产物经酶切后直接测序分析。第5～7外显子扩增产物经TOPOTA克隆到质粒载体中获得单链，对所得克隆进行AB0基因第5～7外显子双向测序分析。家系调查采集先证者父母的标本进行血型血清学实验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞有A、B抗原，同时血清中存在抗B抗体。直接测序分析发现第6外显子第261位无缺失、第297位AG，第7外显子467CT、526CG、657CT、703GA、796CA、803GC、889GA、930GA杂合，可指定为A102Bx09基因型。克隆测序得到两个等位基因A102和Bx09。与B101序列相比，Bx09第889位G—A，导致第297位谷氨酸变成赖氨酸。家系调查显示先证者Bx09等位基因从母亲遗传所得。结论α-1，3-半乳糖基转移酶基因第889位G—A突变导致产生Bx09表型，其血清中可含有抗B抗体。
- 洪小珍应燕玲许先国马开荣兰小飞刘瑛朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因抗B抗体
- α1，4半乳糖基转移酶基因26个碱基缺失导致的罕见p表型被引量：8
- 2013年
- 目的研究中国人个体PIPk血型系统中罕见P表型的血清学特征及其分子遗传背景。方法对1例血清中含有疑难抗体的先证者及其8位家系成员样本，应用特异性血型抗体和谱细胞进行血型血清学鉴定。对P表型相关的a1，4半乳糖基转移酶（a-1，4-galactosyltransferase，A4GALT）编码基因A4GALT编码区及侧翼内含子区进行聚合酶链反应和DNA序列分析，并进一步通过克隆测序法鉴定A4GALT等位基因组合。结果先证者为罕见的P表型，其血清中含有能与所有非P表型红细胞凝集反应并致其溶血的抗-Tja抗体，其他家系成员为正常的P1或P2表型。DNA直接测序和克隆测序分析发现，先证者的A4GALT基因编码区存在972～997位26bp纯合缺失，该26bp缺失可引起多肽链的移码突变，导致变异型a1，4半乳糖基转移酶比野生型多83个氨基酸残基；而其他家系成员在该位点均为缺失杂合子或未缺失。结论在中国人群中发现因A4GALT基因972～997位26bp缺失导致的P表型。
- 许先国洪小珍马开荣蓝小飞陈舒刘瑛应燕玲朱发明吕杭军
- 关键词：P血型A1遗传学基础
- 一种ABx变异型相关的B糖基转移酶基因新突变研究被引量：7
- 2012年
- 目的研究1例ABO血型系统ABx变异型的分子遗传背景。方法用血型血清学技术鉴定1例AB0血型疑难样本的红细胞表型和唾液血型分泌物质，并用聚合酶链反应分别扩增先证者ABO基因全编码区共7个外显子及侧翼内含子序列，扩增产物经双酶切纯化后直接进行双向测序分析。进一步对存在突变位点的第6～7外显子扩增产物经进行TA克隆和单倍体序列分析。结果先证者红细胞ABO抗原表达为A强B弱，结合其它血清学特征，鉴定其血型为罕见的ABx变异型。ABO基因全编码区测序发现9处核苷酸杂合位点，分别为第6外显子的297A／G杂合，第7外显子的467C／T、526C／G、657C／T、703G／A、796C／A、803G／C、808T／A、930G／A杂合。单倍体序列分析发现，其中一个等位基因为常见的A102，另一个等位基因除808T〉A突变外，其它变异位点与B101等位基因一致。808T〉A突变可导致B糖基转移酶第270位苯丙氨酸转变为异亮氨酸。结论B糖基转移酶基因808T〉A突变可能引起酶活性减弱，并进而导致产生Bx变异型。
- 胡文健傅广成许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO血型基因突变
- 一种用于定量分析ABO基因启动子区域甲基化水平方法的建立
- 2011年
- 目的:建立重亚硫酸盐测序法(BSP法)定量分析ABO基因启动子区CpG岛的甲基化水平。方法:提取胃癌细胞株MKN45和KatoⅢ以及人全血基因组DNA,以重亚硫酸盐转化法修饰其DNA,应用Meth Primer软件在ABO基因启动子区非CpG位点区设计4对特异性甲基化扩增引物,将ABO启动子附近区域的CpG岛分成4个片段分别扩增,优化PCR扩增条件后进行T-A载体克隆和测序分析,采用BiQ Analyzer软件分析ABO基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果:PCR扩增获得了约2kb的完整CpG岛片段,共包含191个CpG位点,测序图谱证实亚硫酸盐转化修饰完全。MKN28细胞株整个CpG岛内191个检测的CpG位点全部甲基化,细胞株KatoⅢ甲基化比例为8.9%,随机标本DNA甲基化比例为30.4%。结论:建立的方法可检测出ABO基因启动子区CpG岛所有CpG位点的甲基化状况,定量分析其甲基化水平。
- 应燕玲陶苏丹和艳敏许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：甲基化CPG岛
- 献血人群红细胞血型意外抗体的筛选被引量：5
- 2012年
- 目的:分析献血人群中红细胞血型意外抗体的情况,并对抗体特性进行确认。方法:应用O型红细胞结合PK7200血型检测系统筛选红细胞血型意外抗体,利用谱细胞鉴定抗体特性。结果:在献血人群中红细胞血型意外抗体阳性率为0.025%,意外抗体以抗M和冷凝集素为主。发现两例类孟买型血型和两例p血型。结论:献血人群中存在低比例的红细胞血型意外抗体,在献血者血型检测中应加以重视。
- 祝宏洪小珍吴亚玲励晓涛马开荣兰小飞朱发明
- 关键词：献血者意外抗体
