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稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立被引量：2: 2011年; 目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-N1表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功。构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞。qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达。结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达。BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX。结论本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础。; 陈可绪王啓名王啓名吴焕黄怡哲

荧光原位杂交与免疫组织化学技术检测乳腺癌人表皮生长因子受体2基因扩增及蛋白表达研究被引量：3: 2011年; 目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测乳腺癌人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)基因表达及扩增状态的临床意义。方法采用FISH和IHC技术分别检测35例乳腺癌患者手术切除标本的HER2基因和蛋白表达情况及17号染色体倍体性,分析HER2基因扩增和蛋白表达状态的差异与17号染色体倍体性的相关性。结果 IHC与FISH检测的总符合率为82.8%;FISH检测HER2基因扩增情况与IHC检查HER2蛋白表达为()、()和(-/+)者的符合率分别为93.3%,60.0%和90.0%;HER2基因绝对拷贝数阳性和阴性的患者中分别存在26.7%和10.0%的17号染色体多体扩增。结论 IHC是初步筛查HER2基因状态的首选方法;IHC检测HER2蛋白阳性的乳腺癌标本存在假阳性,FISH可准确、稳定地检测乳腺癌组织中HER2的基因状态及17号染色体倍体性。; 张矅耀王啓名黎相照张庆玲; 关键词：乳腺癌免疫组织化学荧光原位杂交人表皮生长因子受体2

新抑癌基因WTX在肾肿瘤中的表达及意义被引量：3: 2011年; 目的探讨定位于X染色体的新抑癌基因WTX mRNA及其蛋白在肾肿瘤及对应正常肾组织中的表达及意义。方法采用地高辛标记cDNA探针原位杂交及免疫组织化学S-P法检测40例肾细胞癌、10例肾母细胞瘤以及对应正常肾组织中WTX mRNA及其蛋白的表达情况。结果 WTX mRNA及其蛋白在正常肾组织中普遍高表达,而在肾母细胞瘤中表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.001),在肾细胞癌中表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。WTX mRNA与蛋白表达具有较好的一致性。结论 WTX抗体的应用为WTX蛋白的生物学功能研究奠定了实验基础。WTX表达降低与肾肿瘤有关,可能在肾肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。; 张庆玲于莉娜丁彦青; 关键词：肾肿瘤 X染色体

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广东省自然科学基金(8451051501000555)