广东省自然科学基金(05300419)
- 作品数：8 被引量：30H指数：3
- 相关作者：曾耀英肇静娴刘毅曾祥凤李海仙更多>>
- 相关机构：暨南大学中国医学科学院北京协和医学院北京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 调节性T细胞介导异基因交配孕鼠对父方抗原同种反应性的影响被引量：2
- 2006年
- 目的研究怀有同种异基因胚胎对母体对父方抗原同种反应性的影响及其相关机制。方法采用CFSE标记应答细胞、SNARF-1标记刺激细胞的单向混合淋巴细胞培养体系,对孕10.5d的同基因交配孕鼠BALB/c×BALB/c(syn-BALB/c)和异基因交配孕鼠BALB/c×C57(allo-BALB/c)对C57小鼠同种抗原的应答强度进行比较;流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞在syn-BALB/c和allo-BALB/c各淋巴器官的比例变化,及其胞内Foxp3表达。结果孕10.5d的allo-BALB/c对C57同种抗原的应答强度明显低于syn-BALB/c,但将应答细胞中的CD4+CD25+T细胞去除后,应答强度反而高于syn-BALB/c。allo-BALB/c脾脏、淋巴结和外周血CD4+CD25+T细胞明显高于syn-BALB/c,这些细胞均表达高水平的Foxp3。结论异基因交配孕鼠对父方抗原的同种反应性较同基因交配孕鼠降低,这一现象很可能是由CD4+CD25+Treg介导的。
- 肇静娴曾耀英刘毅
- 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞混合淋巴细胞反应CFSE
- 妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响
- 2006年
- 目的研究妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响。方法检测终浓度为1×106U/L的重组人绒毛膜促性腺激素(hCG)和终浓度为10-7mol/L(相当于妇女分泌期外周血水平)、10-6mol/L(相当于妊娠妇女外周血水平)和10-5mol/L(相当于母胎界面局部浓度)的雌二醇(E2)和孕酮(P4)对HIV-1介导荧光标记的HIV-1ⅢB/H9与未标记荧光的MT-2细胞融合的影响;ELISA法检测感染HIV的MT-2细胞培养上清p24抗原含量来探讨妊娠激素对HIV-1复制的影响。结果10-5mol/L的E2和P4可以明显抑制HIV-1介导的细胞融合,合胞体形成数分别为14.87±2.18和16.52±3.20,与对照组(28.93±4.22)比较有极显著性差异(P<0.01),hCG和10-6mol/L的E2也能抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞的融合,融合数分别为22.18±3.87和24.16±4.25,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。hCG及10-5mol/L E2和P4能明显降低感染细胞培养上清中p24抗原含量,依次为(42.61±2.97)pg/ml(、44.28±3.42)pg/ml和(45.37±2.88)pg/ml,与对照组(57.22±3.10)pg/ml比较有显著性差异(P<0.05)。结论妊娠激素hCG、E2和P4体外可以抑制HIV-1感染MT-2细胞及在其内复制。
- 李海仙曾耀英曾祥凤肇静娴王通林羿
- 关键词：人类免疫缺陷病毒细胞融合
- 联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应被引量：9
- 2006年
- 目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养。混合培养96h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数。结果随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题。应用ModFitTM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标。结论联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具。
- 肇静娴曾耀英刘毅何贤辉
- 关键词：混合淋巴细胞反应增殖
- 妊娠期调节性T细胞介导保护性效应需要同种抗原的刺激被引量：7
- 2006年
- 越来越多的证据表明,人和小鼠妊娠期CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)参与介导母胎免疫耐受。然而,目前对于妊娠期间调控Treg变化的因素还不清楚,对同基因交配(BALB/c×BALB/c)和异基因交配(BALB/c×C57)小鼠以及妊娠妇女CD4+CD25+Treg进行了分析,以探讨雌、孕激素和胎儿同种异基因抗原对Treg的影响。发现异基因孕鼠外周淋巴器官CD4+CD25+T细胞于早孕、中孕期明显高于非孕对照,而在同基因孕鼠只有少数个例升高;这些CD4+CD25+T细胞均表达Foxp3蛋白,在体外具有无反应性和免疫抑制能力;而且异基因孕鼠淋巴细胞对父方同种抗原的应答强度明显弱于同基因孕鼠。对去势的雌鼠给予雌二醇或孕酮,使其在血清中浓度接近中孕水平,未发现外周血CD4+CD25+Treg的明显变化。妊娠妇女CD4+CD25highTreg在早孕、中孕期显著升高,临近分娩期降至非孕水平,而此时CD4+CD25lowT细胞反而增加。以上结果表明,异基因抗原的存在对于妊娠期CD4+CD25+Treg介导对胎儿的免疫保护效应具有重要作用,而CD4+CD25+Treg的消失可能与分娩的发动有一定关系。
- 肇静娴曾耀英刘毅
- 关键词：CD4+CD25+调节性T细胞FOXP3孕酮
- 人胎盘绒毛提取物体外对T细胞应答的抑制效应被引量：2
- 2006年
- 目的:了解胎盘绒毛对T细胞应答的抑制能力及其在妊娠周期不同阶段的变化.方法:制备孕10,20和37wk的绒毛提取物,通过检测CD69和CD25分子的表达,评价其对T细胞活化的影响,WST-1法分析其对T细胞增殖的影响,流式微球阵列(CBA)法分析其对Th1/Th2细胞因子谱的影响,并以Western印迹法分析提取物中吲哚胺-2,3双加氧酶(IDO)的含量.结果:孕早、中、晚期的胎盘绒毛提取物均能显著抑制植物血凝素(PHA)诱导的人T细胞活化,增殖,细胞因子分泌以及ConA诱导的小鼠T细胞活化(P<0.01).但三个时期的提取物对上述不同T细胞行为的抑制强度不同,以20wk提取物的抑制作用最强.提取物中IDO蛋白的含量20wk最高,37wk次之,10wk最低.结论:妊娠不同时期的绒毛滋养细胞均能够抑制T细胞应答,但抑制强度不一致,且对T细胞不同行为的抑制存在分离现象,提示妊娠不同时期的绒毛滋养细胞表达抑制因子的模式不同.
- 肇静娴曾耀英江逊季煜华刘毅
- 关键词：胎盘绒毛滋养层免疫抑制T淋巴细胞
- 喘可治注射液对小鼠体外CD4^+CD25^+T细胞的影响被引量：7
- 2006年
- 利用荧光抗体标记和流式细胞术检测喘可治对刀豆蛋白A(ConA)诱导的T细胞CD69和CD25表达的影响,研究喘可治是否具有促进CD4+CD25+调节性T细胞升高的作用.结果发现喘可治对ConA诱导的T细胞活化标志分子CD69的表达具有抑制作用,但对CD25的表达具有促进作用.说明喘可治对T细胞活化具有抑制作用,CD25表达的上调并不是由活化引起的,而很可能是CD4+CD25+Tr水平升高的标志.
- 王幼萍曾耀英肇静娴
- 关键词：喘可治CD4^+CD25^+调节性T细胞CD69
- 脐血和外周血单个核细胞培养上清影响HIV-1感染的体外实验研究
- 2006年
- 目的:体外研究脐血和外周血单个核细胞(CBMC和PBMC)培养上清对HIV-1感染的影响,为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。方法:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h收集上清,加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中,2h后在倒置荧光显微镜下观察其对细胞融合的影响;用Luminex100TM分析仪检测收集上清中细胞因子含量。结果:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h的上清均可抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合,同一时间收集的PBMC和CBMC上清对HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合的抑制作用无差异,但5h上清的抑制作用强于12h的上清;CBMC5h上清中促炎症细胞因子比PBMC5h上清为低,而CCR5配体MIP-1α和RANTES则比PBMC5h上清高,差异显著(P<0·05)。结论:通过脐血和外周血单个核细胞可以制备有效抗HIV感染的可溶性因子,可能为艾滋病治疗药物提供新的来源。
- 李海仙曾耀英曾祥凤肇静娴李孝建王通
- 关键词：胎血细胞因子类HIV-1
- 佛波醇酯加离子霉素诱导脐血和成人外周血CD4^+CD25^+ T细胞分泌IL-2的相关机制研究被引量：3
- 2006年
- 目的:以佛波醇酯加离子霉素作为刺激剂,验证CD4+CD25+调节性T细胞本身并不存在分泌IL-2障碍;同时通过对脐血和成人外周血的比较性研究,了解脐血CD4+CD25+T细胞的成熟度。方法:以autoMACS从足月婴儿脐血(CB)和成人外周血(PB)分选CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,以PDB+ionomycin作为刺激剂,培养45h后流式细胞术检测各组细胞表达CD69和CD25水平,并以Luminex多重细胞因子检测技术检测培养上清中7种细胞因子的浓度。结果:经PDB+ionomycin刺激后,CB、PB的CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞均发生增殖,但在培养45h后CD4+CD25+T细胞均出现细胞状态变差或死亡倾向。CB、PB的CD4+CD25+T细胞活化后CD25分子表达进一步上调,高于CD25-细胞活化后的CD25分子密度。经PDB+ionomycin刺激后,PB CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞均分泌高水平的IFN-γ、IL-2和TNF-α,但CD25+细胞分泌IL-5、IL-4和IL-10水平远远高于CD25-细胞;CBCD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞亦分泌高水平的IL-2和TNF-α,但IFN-γ水平远远低于PB,基本不分泌IL-5、IL-4和IL-10。结论:CD4+CD25+T细胞本身并不存在合成和分泌IL-2障碍,其可能具有与传统T细胞不同的T细胞受体信息转导模式;脐血CD4+CD25+T细胞功能尚未完全成熟。
- 肇静娴曾耀英李海仙曾祥凤季煜华何贤辉
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞佛波醇酯类
