国家高技术研究发展计划(2006AA10Z143)
- 作品数：9 被引量：33H指数：4
- 相关作者：王栋朱化彬郝海生杜卫华韩伟东更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所甘肃农业大学北京奶牛中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程农业科学更多>>
- 牛精子蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定初步研究被引量：2
- 2009年
- 通过建立牛精子双向电泳-质谱鉴定研究平台,为从蛋白质水平研究精子生理机能奠定技术基础;采用改进的热TRIzol法裂解精子细胞制备蛋白,应用双向凝胶电泳(2-DE)分离牛精子蛋白,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质点。得到了重复性较好的牛精子2-DE图谱,质谱鉴定16个蛋白质点。建立牛精子双向电泳-质谱鉴定研究平台,为后续牛精子X、Y差异蛋白点的检测和分析奠定了理论和技术基础。
- 韩伟东王栋郝海生杜卫华赵学明朱化彬
- 关键词：精子蛋白质组学双向电泳基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
- 牛精子蛋白质组学技术平台的建立及冻融前后精子差异蛋白初步分析被引量：9
- 2008年
- 通过探索不同的精子蛋白制备方法、水化液成分和优化2D电泳程序以建立牛精子蛋白质组学研究技术平台,同时以牛鲜冻精为实验材料通过差异凝胶电泳寻找冻融前后精子蛋白的改变。结果表明:使用改进的热TRIzol法裂解精子细胞制备蛋白,结合优化的2D电泳技术可建立稳定的牛精子蛋白质组学研究技术平台。差异凝胶电泳揭示牛精子在冻融后有质和量的改变:冻融后缺失的蛋白点有20个,表达下调的有2个,表达上调的有10个。作为一项阶段性的实验成果,研究建立的2D平台和所发现的冻融引起的差异表达蛋白质点为揭示冷冻损伤机理和性控精液的差异蛋白质组学研究奠定了较好的基础。
- 陈龙朱化彬沙里金韩伟东王栋王宗礼郝海生杜卫华程金华
- 关键词：精子TRIZOL差异蛋白
- 蛋白质组学数据库建设的研究进展被引量：4
- 2008年
- 生物信息学是蛋白质组学研究的重要组成部分。大量蛋白质组学研究所获得的数据都需要借助生物信息学知识和方法快速有效地解释其背后隐含的生命信息。现已形成Swiss-Prot、PIR、UniProt等强大的蛋白质分析数据库。全面深刻地了解这些数据库建设进展将有助于积极有效地进行蛋白质组学研究。
- 陈龙朱化彬沙里金王栋王宗礼程金华郝海生杜卫华
- 关键词：蛋白质组学生物信息学蛋白质数据库
- 牛精子蛋白胶内酶切条件优化及问题分析
- 2009年
- 针对银染蛋白的胶内酶切质谱鉴定成功率较低的技术现状,对影响牛精子蛋白酶切鉴定的酶量、酶切时间、凝胶存储时间等影响因素进行了摸索,并优化了挖点、脱色、脱水、酶切消化和抽提肽段等操作细节,同时对质谱峰图中出现的污染问题进行了分析解决,提高了蛋白鉴定的成功率,为牛精子蛋白质的质谱鉴定奠定了技术基础。
- 韩伟东王栋朱化彬郝海生杜卫华赵学明王宗礼
- 关键词：双向电泳蛋白质组学
- 精子性染色体相关基因转录本及检测方法
- 2008年
- 精子形成过程中,基因表达经历了减数分裂性染色体失活,但有很多基因在减数分裂后期转录又重新被激活。转录产物研究表明,X和Y染色体特异基因在不同物种精子中都发生了不同程度的转录,并且对转录产物的研究方法也取得了巨大进展,产生了微阵列、SAGE及抑制消减杂交等先进的技术手段,随着这些技术的日益成熟和完善,通过深入研究,精子中性别相关基因转录表达调控机理将越来越清晰,并推动性别特异蛋白的研究取得更大进展。
- 王永贵朱化彬柳强王栋张林波郝海生杜卫华
- 关键词：转录物精子
- 牛冻、鲜精子差异蛋白的双向电泳和质谱鉴定的初步研究被引量：6
- 2010年
- 采用适合于精子裂解的热Trizol法制备牛精子全蛋白质,应用线性固相IPG胶条(pH 3～7、24cm)进行精子全蛋白2-DE电泳,在冻精和鲜精蛋白图谱中分别检测到839±34个蛋白点和564±16个蛋白点,经差异比较和显著性检验,在冻、鲜精子中共得到19个具有显著差异的蛋白点,在冻精中表达上调的蛋白点有9个,表达下调的蛋白点有1个,只在冻精中表达的蛋白点有9个。经过酶解和质谱鉴定,获得了3个差异蛋白点的质谱信息,生物信息学分析结果发现,这3个差异点分别为中性鞘磷脂酶激活结合因子(FAN)、谷胱甘肽S转移酶(GST-Mu5)及锌离子结合细胞色素氧化酶,分别与细胞应激和凋亡有关。推测认为,这3种与细胞应激反应及凋亡相关的蛋白在冻精中显著增高可能与精子冷冻损伤有关。
- 吴承疆朱化彬王栋郝海生杜卫华赵学明路永强
- 关键词：2-DE冷冻损伤
- 猪精液冷冻保存影响因素研究进展及展望被引量：5
- 2008年
- 由于在经济生产中的重要意义,猪精液冷冻保存技术已成为研究的焦点。早期的研究多集中在对冷冻保护剂和冷冻方法的筛选与优化上,对猪精液冷冻保存进行了深入的探索。但研究表明,无论采用何种冷冻保护剂、何种冷冻方法都损害了精子的受精能力,并伴随有蛋白质的丢失、表达量的改变、功能活性的增减等,这就迫使该领域的研究向充分揭示冷冻对精子损伤的机理方向转移,希望通过揭示冷冻保存所导致的蛋白质结构和功能改变的实质,充分阐明冷冻损伤的机理,为猪精液冷冻保存提供理论依据,并最终促进猪精液冷冻保存技术的快速发展。
- 陈龙朱化彬沙里金王栋王宗礼郝海生程金华韩伟东杜卫华
- 关键词：精液冷冻保存蛋白质
- 牛精子总RNA制备及mRNA线性扩增的初步研究
- 成熟精子蕴含了高等生命繁衍后代的重要生命信息,而精子mRNA是这些生命信息的重要成分之一,成功制备并获得足够数量和高质量的精子mRNA对于开展精子基因表达分析具有重要现实意义。本研究采用改进的热TRIzol法提取了奶牛精...
- 岳洋朱化彬郝海生杜卫华赵学明王栋
- 关键词：精子MRNA
- 文献传递
- 蛋白质组学技术在精子蛋白研究中的应用
- 2009年
- 从蛋白质组学研究的技术手段、蛋白质组学在人类不育及精卵相互识别并结合的机理研究、免疫法开展男性避孕方法的研究及蛋白质组学研究方法在家畜繁殖环节中的应用等几个方面阐述了蛋白质组学在人类生殖及动物繁殖环节相关研究中的重要作用。说明蛋白质组学已经成为生命科学未来发展的主要分支之一,为揭示生命个体的蛋白质动态变化提供了技术手段和理论基础,并将在药物开发,生命活动机理研究等方面发挥巨大作用,也必将会在家畜繁殖学领域发挥其应有的作用。
- 韩伟东王栋郝海生赵学明杜卫华朱化彬
- 关键词：精子蛋白蛋白质组学
- 猪精子冷冻损伤研究进展被引量：7
- 2010年
- 综述了猪冻存精子顶体、质膜和线粒体的形态学变化及其对精子受精能力的影响,同时分析了冻融精子中所发生的蛋白质、DNA等生物大分子的变化及其可能对冻存精子质量及受精能力的影响,指出冷冻保存过程对精子蛋白质、DNA等生物大分子质和量的影响是精子冷冻损伤的实质,应用先进的蛋白组学进行猪精子冷冻损伤机理研究,有助于深刻揭示冷冻损伤的分子机理,为推动猪精液冷冻保存技术研究取得突破性进展提供理论依据。
- 陈晓丽朱化彬郝海生杜卫华赵学明孙艳艳胡传活王栋
- 关键词：精子冷冻损伤
