国家科技重大专项(2009ZX08005-003B)
- 作品数：9 被引量：46H指数：4
- 相关作者：陈创夫乔军胡圣伟周益军林玲更多>>
- 相关机构：石河子大学江苏省农业科学院教育部更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省农业科技自主创新基金江苏省农业科学院科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 死亡转基因克隆绵羊的组织病理学分析
- : 研究发现克隆动物死亡与各种组织器官异常发育有关.Li等报道死亡克隆牛心、肝、肺和肾组织存在不同程度的病变.本研究对死亡克隆绵羊的各种组织器官进行了组织病理学分析,初步表明了死亡克隆绵羊的各种组织器官发育异常情况...
- 胡圣伟倪伟王鹏雁乔军陈创夫
- 关键词：组织病理学组织器官分子机制
- 江苏省棉花黄萎病菌致病力分化和分子检测
- 棉花黄萎病是世界性的土传病害,是目前我国棉花生产上为害最严重的病害。棉花黄萎病菌存在明显的致病力分化,落叶型黄萎病菌对棉花产量和品质所造成的损失更是毁灭性的。近年来,落叶型棉花黄萎病菌扩散蔓延迅速,为了调查落叶型棉花黄萎...
- 林玲章如意张昕邓晟周益军
- 农杆菌介导转化大丽轮枝菌的体系优化被引量：7
- 2011年
- 为了揭示大丽轮枝菌的遗传变异和致病机理,以含潮霉素为抗性筛选标记、绿色荧光蛋白GFP为报告基因载体,优化了农杆菌介导转化大丽轮枝菌的遗传转化体系,获得了大丽轮枝菌菌株V991和BP2含绿色荧光蛋白GFP的转化子,转化率达到100×10-6～550×10-6。优化的转化条件为:农杆菌以IM液体培养基调节浓度至OD600=0.2并预培养4 h,然后与等体积的浓度为106个.mL-1的大丽轮枝菌孢子混匀,每皿取200μL混合液涂于固体IM共培养基的纤维素膜上,25℃共培养60 h,转移至固体PDA培养基上以头孢噻肟钠500mg.L-1+潮霉素B 50 mg.L-1进行筛选。研究发现农杆菌LBA4404和AGL-1比农杆菌SK1044和EHA105更适用于大丽轮枝菌转化。对转化子观察和鉴定发现:从表型上,70.8%转化子保持野生型形态,29.2%转化子发生了形态变化;从致病力上,81%转化子的致病力相对于野生型没有发生显著变化,19%转化子的致病力或增强或减弱。
- 陈天子袁洪波杨郁文刘蔼民张保龙
- 关键词：农杆菌大丽轮枝菌潮霉素GFP表型变异
- 猪白细胞介素-2在BHK-21细胞中表达及其活性分析被引量：1
- 2011年
- 为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用实时定量PCR及ELISA测定PoIL-2在BHK-21细胞内的表达,同时以淋巴细胞增殖试验(MTT)检测PoIL-2蛋白活性。试验结果表明稳定整合PoIL-2基因的BHK-21细胞系其PoIL-2mRNA的转录效率是阴性对照组1.43倍,蛋白表达量是阴性对照组1.29倍。MTT试验表明真核表达的PoIL-2促淋巴细胞增殖活性与阴性对照组相比差异极显著(p<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIL-2具有良好的生物学活性。本研究为开发新型基因工程疫苗佐剂和抗病毒制剂奠定了基础。
- 王大伟乔军张辉胡圣伟丁波陈创夫
- 关键词：猪白细胞介素2真核表达实时定量PCR
- O型口蹄疫病毒3D基因荧光定量PCR方法的建立及应用被引量：5
- 2014年
- 为建立快速检测抗FMDV转基因猪中O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的荧光定量PCR方法,本试验选择FMDV结构蛋白基因3 D的核苷酸序列设计特异性引物,经过RNA抽提、反转录成cDNA、PCR扩增,扩增出了大小为180bp的基因片段。将回收的目的片段与pMD18-T克隆载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为FMDV的阳性重组质粒。将验证正确的重组质粒10倍梯度稀释后作模板,进行荧光定量PCR试验,建立FMDV 3 D基因的标准曲线及其回归方程,并确定扩增的最佳退火温度。试验结果显示标准曲线的回归方程为Y=-3.727X+32.04,回归系数R2=0.980,熔解曲线为单一峰。建立的荧光定量PCR方法的灵敏度为1.2×101拷贝/μL,只与FMDV反应。结果表明,建立的荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,为检测FMDV在动物组织细胞中的含量提供了技术方法。
- 曹丽娟倪伟史慧君马世伟乔军陈创夫
- 关键词：口蹄疫病毒荧光定量PCR重组质粒
- 靶向山羊痘病毒DNA聚合酶基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选被引量：1
- 2011年
- 本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段,选取了5个干扰靶位点。根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒,转染细胞后接种病毒,通过细胞毒液的TCID_(50)测定和用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的抑制作用。结果显示,重组表达质粒组的抑制率在63%以上,其中以pSI-W2最为明显,抑制率为93.8%。该研究应用RNAi技术在细胞水平筛选出了能够高效抑制山羊痘病毒增殖的干扰片段,为抗山羊痘病毒转基因羊的研究奠定了基础。
- 王安涛陈创夫乔军张辉张娜胡圣伟
- 关键词：RNAI山羊痘病毒BHK-21
- 棉花黄萎病生防内生细菌Jaas cd的鉴定及田间防效被引量：21
- 2010年
- 对棉花黄萎病生防内生细菌Jaas cd(原名73a)进行了菌种鉴定和田间应用方式的改进。抑菌谱测定结果表明,该菌株对12种病原真菌均有较强的抑制作用。通过形态观察、生理生化鉴定、Biolog鉴定以及16S rD-NA序列比对,证明该菌株为多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。菌株Jaas cd的16S rDNA序列与多黏类芽孢杆菌(AM062684)的相似性为99.7%,GenBank登录号为AY942618。田间大区示范试验结果表明,用菌株Jaascd的发酵液在棉苗移栽前喷施棉苗和移栽时灌根2种方式处理,都能有效防治棉花黄萎病和提高棉花产量,但移栽前喷施棉苗操作更加简便易行。
- 林玲金中时马长文孙飞王凤良龚伟荣顾本康周益军
- 关键词：内生细菌棉花黄萎病
- 土壤中落叶型棉花黄萎病菌的分子检测方法被引量：10
- 2011年
- 为了建立快速、准确检测土壤中落叶型棉花黄萎病菌的方法,本试验将提取自落叶型棉花黄萎病菌菌株V991的DNA稀释成不同浓度,同时提取在灭菌土中接入不同数量的V991孢子后制成的人工病土中的DNA,并采用五点取样法提取自然土样中的DNA,选用落叶型黄萎病菌的特异性巢式PCR引物,对上述DNA样品进行检测。结果显示:采用巢式PCR法可检测到落叶型棉花黄萎病菌菌株V991的DNA浓度为1×10-4 mg/L,同时每克人工病土中含有10个V991孢子也可被检测到,该方法灵敏性比常规PCR法提高2～5个数量级。用该方法对所取自然土样进行检测,均可检测到落叶型棉花黄萎病菌的存在。
- 张昕简桂良林玲邓晟周益军
- 关键词：巢式PCR分子检测
- 绵羊itgαv基因靶向RNAi表达载体的构建和筛选
- 2015年
- 为了探讨和分析整联蛋白αv亚基基因(integrin alpha v,itgαv基因)的功能及受体基因表达量下调对口蹄疫病毒复制的影响,试验构建并筛选了绵羊itgαv基因的RNAi载体,根据绵羊itgαv基因核苷酸序列,设计了3条特异性双链小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,将合成的DNA片段退火形成双链后,连接到p Genesil-1.3载体人源U6启动子下游,分别命名为Genesil-αv1、Genesil-αv2、Genesil-αv3;以乳腺组织RNA反转录产物为模板,扩增绵羊itgαv,并将其克隆入p EGFP-N1载体多克隆位点,构建itgαv与GFP蛋白融合表达载体p EGFP-itgαv,用上述Genesil-αv1、Genesil-αv2、Genesil-αv3载体分别与p EGFP-itgαv共转染豚鼠BHK-21细胞之后,通过绿色荧光信号观察和半定量RT-PCR检测siRNA分子对itgαv基因表达的抑制效果,经酶切及测序鉴定以及瞬转试验证实,载体表达的RNAi分子构建成功,且能有效抑制目标基因的体外表达。结果表明:研究成功构建了有效抑制itgαv基因表达的RNAi载体。
- 吾热力哈孜.哈孜汗阿丽米拉黄增文胡圣伟赛务加普陈创夫
- 关键词：RNAI绵羊BHK-21细胞
- 抗BVDV转基因克隆胎儿的制备及抗病毒能力初步评价
- 毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)属黄病毒科,瘟病毒属.BVDV感染家畜后引起腹泻、流产、呼吸道疾病和免疫机能障碍,给畜牧业造成了巨大的经济损失.然而,目前还没有控制BVD...
- 倪伟胡圣伟王鹏雁乔军陈创夫
- 关键词：绵羊体细胞核移植技术抗病毒能力
