国家自然科学基金(20906003)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王凤寰杨建国孟青青谭天伟王晓楠更多>>
- 相关机构：北京化工大学北京工商大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 利用甘油发酵耦联生产3-羟基丙酸及1,3-丙二醇重组菌的构建及筛选被引量：5
- 2011年
- 在肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)代谢甘油生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,为了减少有毒中间产物3-羟基丙醛(3-HPA)的积累,可将其转化为3-羟基丙酸(3-HP),从而实现1,3-丙二醇和3-羟基丙酸的联产。克隆来自于酿酒酵母的NAD+依赖型的乙醛脱氢酶(ALDH)的基因aldh4,构建了表达载体pKP-aldh,转化K.pneumoniae,得到了有效表达乙醛脱氢酶的重组肺炎克雷伯杆菌(K.pneumoniae A+)。在此基础上,使用紫外诱变联合菌种驯化的方法对K.pneumoniae A+进行筛选,获得了可耐受较高3-HP浓度(≥35 g/L)的重组肺炎克雷伯杆菌K.pneumoniae A+5-3。发酵实验结果表明,K.pneumoniae A+5-3可将3-HPA转化为3-HP,能够同时利用甘油耦联生产3-HP和1,3-PD,产量分别达到5.0 g/L和74.5 g/L。
- 王凤寰杨建国王晓楠谭天伟
- 关键词：3-羟基丙酸1,3-丙二醇乙醛脱氢酶
- 生物法合成丙烯酸的研究进展被引量：6
- 2012年
- 丙烯酸是一种重要的化工原料,被广泛应用于涂料、超吸附材料等领域。目前丙烯酸的获得主要通过丙烯氧化,但由于石油资源日渐枯竭以及生产过程造成的环境问题,利用生物质资源生产丙烯酸已成为研究热点。介绍了丙烯酸的性质及其在工业上的应用,并详细综述了生物法制备丙烯酸的研究进展。根据丙烯酸生产中是否应用传统的化工过程,将其分为半生物合成和全生物合成。半生物法主要包括乳酸化学法脱水以及丙烯腈、丙烯酰胺的生物转化;全生物法主要包括乳酸生物法脱水、3-羟基丙酸途径、糖直接发酵法以及DMSP(二甲基巯基丙酸内盐)途径。由于乳酸发酵的工艺成熟、原料易得,因此对乳酸脱水进行了重点介绍,其中生物法脱水符合可持续发展的要求,对其进行了详细介绍。同时还分析了各种方法的优缺点,探讨了利用生物质资源生产丙烯酸的研究趋势。
- 孟青青杨建国王凤寰
- 关键词：丙烯酸生物合成
- 嗜热糖化酶基因在重组黑曲霉工程菌中的表达及酶学性质初步研究被引量：3
- 2012年
- 为了提高糖化酶的耐热性能,降低淀粉糖化发酵工艺的生产成本,构建了同源整合载体pEasy-glaAdir以及pEasyssg,将黑曲霉(Aspergillus niger)的糖化酶基因(glaA)灭活,并将硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobus solfataricus)的嗜热糖化酶基因(ssg)插入到黑曲霉基因组中,筛选得到表达嗜热糖化酶的重组黑曲霉工程菌(A.nigerWW1)。重组菌的发酵结果显示,嗜热糖化酶在黑曲霉中得到了分泌表达,发酵液酶活达到3 030 U/mL。重组嗜热糖化酶的最适反应温度为90℃,最适pH为6.0,该酶具有较高的热稳定性,在80℃时的半衰期在60 min以上,具有良好的工业应用前景。
- 王凤寰孟青青封棣杨建国汪兵
- 关键词：黑曲霉同源重组
- 丙酸梭菌简易培养及电转化方法被引量：3
- 2010年
- 建立了一种简易的丙酸梭菌(Clostridium propionicum)厌氧培养方法——输液瓶蜡封法,从而使厌氧培养快速有效。基于输液瓶蜡封法,采用电击缓冲液PEB,结合0.03 g/mL维生素C的方法,通过对不同对数生长期的菌体细胞进行实验,在无需借助厌氧培养箱的条件下,成功地将外源质粒pGJ103(3 283 bp)转化丙酸梭菌,结果表明处于对数生长中期(18 h)的丙酸梭菌细胞最适宜用于电转化。该研究为严格厌氧微生物的培养提供了一种普适的方法,并且为丙酸梭菌的分子生物学操作奠定了一定的基础。
- 王晨飞王凤寰田平芳谭天伟
- 关键词：电转化
- budC敲除及ldhA过表达对Klebsiella pneumoniae合成D-乳酸的影响
- 2012年
- 为了提高K.pneumoniae中D-乳酸的合成效率,本文以BUD和LDH为改造目标,扩增丁二醇脱氢酶基因budC,并在其中插入四环素抗性基因tet,构建了基因敲除载体pTBT,转化K.pneumoniae,利用同源重组技术,敲除K.pneumoniae染色体上的budC基因,得到重组菌K.pneumoniae B-;在此基础上,构建了表达载体pKP-ldhA,转化K.pneumoniae B-,过量表达乳酸脱氢酶基因ldhA,得到重组菌K.pneumoniae B-L+。摇瓶发酵结果显示,重组菌K.pneumoniae B-L+的丁二醇合成浓度比原始菌降低了90%以上,D-乳酸合成浓度比K.pneumoniae B-和原始菌分别提高了77.1%和41.4%,发酵罐实验D-乳酸产量68.4 g/L,转化率0.78,生产强度1.22 g/(L.h)。结果表明,敲除budC及过表达ldhA有利于改善克雷伯肺炎杆菌中D-乳酸的合成。
- 王凤寰孟青青
- 关键词：D-乳酸乳酸脱氢酶基因敲除
- 透明颤菌vgb基因在地衣芽孢杆菌中表达用于改良α-淀粉酶生产菌株被引量：2
- 2012年
- 地衣芽孢杆菌高温α-淀粉酶是淀粉加工与食品发酵工业上关键酶制剂之一。为了降低高温α-淀粉酶生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求,进一步提高α-淀粉酶的生产性能,本研究构建同源整合载体pAX01-sacB-vgb,在地衣芽孢杆菌(B.licheniforms)CICC 10181染色体中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)。发酵实验结果表明,在同等溶氧条件下,重组菌比野生菌生物量提高了45.8%,高温α-淀粉酶酶活提高了116.7%,具有良好的工业应用前景。
- 王凤寰杨建国汪兵
- 关键词：地衣芽孢杆菌高温Α-淀粉酶透明颤菌血红蛋白基因
