河南省医学科技创新人才工程项目(2000-84)
- 作品数：15 被引量：28H指数：3
- 相关作者：段广才范清堂郗园林黄学勇黄志刚更多>>
- 相关机构：郑州大学河南省分子医学重点学科开放实验室河南省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：河南省医学科技创新人才工程项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌的分子分型及其分子流行病学研究被引量：5
- 2002年
- 目的 在基因分型基础上探讨不同基因型别的幽门螺杆菌 (Hp)与疾病之间的关系。方法 采用随机扩增的多态性DNA(RAPD)和PCR -RFLP法对 5 0株来自不同病人的Hp进行分析 ,在此基础上运用聚类分析进行基因分型 ,并用病例对照研究探讨不同基因型别的Hp与疾病之间的关系。 结果 RAPD结果显示 ,不同基因型别的Hp与不同的疾病结局有关。PCR -RFLP结果显示 ,单个基因的分析结果均未能说明不同基因型别的Hp与不同的疾病结局有关 ,而多个基因的综合分析结果则说明不同基因型别的Hp确实与不同的疾病结局有关。将RAPD和PCR -RFLP的分析结果进行综合分析 ,也从多方法水平说明不同基因型别的Hp确实与不同的疾病结局有关。结论 对于Hp来说 ,多基因性状数值分类法的分型效率高于单基因数值分类法 ,这为建立Hp的多基因。
- 代敏段广才范清堂郗园林李倩施侣元
- 关键词：幽门螺杆菌分子分型分子流行病学
- 幽门螺杆菌黏附素HpaA蛋白在大肠杆菌中表达及其免疫保护作用被引量：1
- 2010年
- 目的表达和纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)黏附素HpaA蛋白,研究其免疫活性和对小鼠的免疫保护作用。方法诱导TB1(pMAL-c2X-hpaA)表达H.pylori黏附素HpaA蛋白,Amyloss树脂预装柱进行分离、纯化,Western blot鉴定其免疫学活性;纯化蛋白免疫小鼠后,H.pylori国际标准菌株NCTC11637攻击感染,观察H.pylori定植情况及免疫保护效果。结果获得了高纯度且免疫活性良好的目的蛋白;HpaA蛋白免疫小鼠的保护率为53.33%(8/15),与对照组统计学差异显著(P=0.002)。结论纯化HpaA蛋白对小鼠有免疫保护作用,可作为H.pylori基因工程疫苗的候选组分。
- 黄学勇许汴利段广才范清堂郗园林
- 关键词：幽门螺杆菌小鼠模型免疫保护
- 幽门螺杆菌外膜蛋白基因omp22克隆测序及生物信息学分析被引量：3
- 2007年
- [目的]克隆幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)外膜蛋白omp22基因,并对其进行测序及生物信息学分析,为幽门螺杆菌疫苗研究提供依据。[方法]利用PCR技术从Helicobacter pylori郑州分离株MEL-Hp27染色体DNA上扩增出omp22基因,将其定向插入克隆载体pBluescriptbⅡ,并进行序列测定和生物信息学软件分析其生物学特性。[结果]用PCR方法扩增的omp22基因长度为540bp,编码179个氨基酸,DNAstar和Omiga软件预测其蛋白质的相对分子量(Mr)约为20kDa,并显示出良好的抗原性和疏水性。[结论]本研究获得了序列正确的幽门螺杆菌omp22基因,为其重组蛋白表达及其相关研究奠定了基础。
- 黄学勇段广才范清堂郗园林黄志刚宋春花
- 关键词：幽门螺杆菌克隆生物信息学分析
- 幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白包涵体的纯化及活性鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的 :建立一种有效的纯化幽门螺杆菌热休克蛋白 A亚单位 -尿素酶 B亚单位 (Hsp A- Ure B)融合蛋白包涵体的方法。方法 :基因工程重组大肠杆菌 BL2 1(p ET- HU2 7)诱导表达的 Hsp A- Ure B融合蛋白包涵体经洗涤、变性、复性 ,在 A¨ KTA FPL C上运用 Hi Trap Chelating HP分离纯化 ,用 SDS- PAGE和 Bradford法检测目的蛋白的纯度和含量 ,用 Western blotting对纯化后蛋白进行免疫学活性鉴定。结果 :纯化后 Hsp A- Ure B融合蛋白的纯度 >90 % ,含量达 0 .2 5 g· L- 1 ,并可以被 Hsp A- U re B融合蛋白免疫小鼠血清识别。结论 :成功地建立了从包涵体中纯化高纯度 Hsp A- U re B融合蛋白的方法。
- 纪晋文代丽萍段广才郗园林
- 关键词：螺杆菌热休克蛋白质类尿素酶重组融合蛋白质类包涵体
- 幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位编码基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2004年
- 目的 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)热休克蛋白A亚单位的编码基因(hspA)克隆和序列分析,为H.pylori基因工程疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法获得国内分离H.pylori菌株MEL-HP27和国际标准参考株H.pylori的hspA基因,通过定向克隆的方法分别插入克隆载体pNEB193中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒。克隆基因经测序后进行核苷酸和氨基酸的同源性比较。结果 重组质粒经双酶切后得到0.35kb的hspA基因片段,特异PCR可扩增出hspA基因片段,证实H.pylorihspA基因的重组克隆质粒构建成功。经测序,国内分离HpMEL-HP27的hspA基因全长357bp(Genbank收录号:AY295084),编码由118个氨基酸残基组成的肽链,hspA基因序列与GenBank公布的H.pylori相应基因同源性高达95.20％-97.48％,氨基酸序列同源性在95.76％-97.46％之间。结论 克隆了H.pylori菌株MEL-HP27的hspA基因,其核酸序列与国际参考株NCTC11637同源性为97.48％。
- 代丽萍段广才郗园林范清堂
- 关键词：热休克蛋白A亚单位克隆基因基因片段酶切核酸序列
- RAPD法对50株幽门螺杆菌的分子流行病学被引量：8
- 2002年
- 目的 从基因水平研究幽门螺杆菌与疾病的关系。方法 用随机扩增的多态性 DNA(RAPD)法对 5 0株来自不同病人的幽门螺杆菌进行基因分型 ,并在此基础上探讨不同基因型别的幽门螺杆菌与疾病之间的关系。结果 5 0株幽门螺杆菌均呈现不同的基因图谱 ,经聚类分析可分为 3个基因型别 ,此 3个基因型别在不同疾病中的发生率不同 ,经统计学分析 ,差异有显著性 (P=0 .0 3)。
- 代敏段广才郗园林范清堂李倩施侣元
- 关键词：随机扩增多态DNA技术幽门螺杆菌流行病学分子
- 幽门螺杆菌中国株cagA全长基因克隆及其分子特征分析被引量：2
- 2007年
- 目的克隆幽门螺杆菌中国株MEL-Hp 27cagA全长基因,并进行分子特征分析。方法参考Hp26695基因组序列,分别针对cagA基因编码区保守序列和位于cagA基因上、下游的基因序列设计两对PCR引物,交叉分段扩增包括cagA基因编码区、5′、3′非编码区在内的全长基因序列,并对cagA基因调控序列、编码序列及源自中国的CagA分子EPIYA基序分布特点进行分析。结果Hp27cagA基因编码区长3510bp,编码1169个氨基酸。5′端非编码区长649bp,-10区、-35区分别位于起始密码子ATG上游89bp和154bp处,3′端非编码区长476bp。Hp27cagA基因编码区核苷酸序列与东亚菌株同源性为96%,与西方菌株的同源性仅为86%左右。Hp27CagA分子存在典型的EPIYA基序,属于ABD型,与国际参考株NCTC11637的AB-CCC型不同。比较源自中国的HpCagA序列的EPIYA基序分布特点,未发现中国Hp分离株之间存在CagAEPIYA基序与疾病结局(胃癌、慢性胃炎和十二指肠溃疡)的聚类关系。结论成功克隆幽门螺杆菌全长ca-gA基因;cagA基因编码区及非编码区序列存在东西方差异;未发现中国Hp分离株之间存在CagA EPIYA基序与疾病结局的聚类关系。
- 黄志刚段广才范清堂郗园林
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA基因克隆
- 幽门螺杆菌外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因原核表达系统的构建与鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:构建表达幽门螺杆菌(Hp)的外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因的重组蛋白质候选菌株,为Hp疫苗研究提供依据.方法:用PCR方法扩增出带3个甘氨酸残基柔韧接头的融合基因omp22-hpaA,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中转化大肠杆菌(E.coliTB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western Blot鉴定其免疫原性.结果:测序结果显示,omp22-hpaA融合基因片段由1326bp组成,为编码440个氨基酸残基的多肽,接头序列GGTGGAGGC已成功地插入omp22-hpaA融合基因中;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为53ku,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的20%.结论:成功克隆并构建了omp22-hpaA融合基因原核表达系统.
- 黄学勇段广才范清堂郗园林黄志刚宋春花
- 关键词：幽门螺杆菌克隆基因表达
- 幽门螺杆菌中国株cagA全长基因克隆
- 2007年
- 世界范围内不同Hp菌株CagA分子变异较大，该变异可能导致不同菌株的cagA生物学作用乃至致病性不同。我国作为Hp感染较严重的国家之一，临床分离株中超过90％含有cagA基因，从克隆和分析全长cagA基因入手，开展cagA基因／CagA蛋白功能研究，对于揭示CagA在Hp致病中的分子机制具有现实意义。
- 段广才黄志刚范清堂
- 关键词：CAGA基因幽门螺杆菌中国株CAGAHP菌株分子变异
- 幽门螺杆菌hpaA基因工程菌蛋白表达条件优化、纯化及其活性鉴定
- 2007年
- 目的:优化幽门螺杆菌hpaA基因工程菌(pMAL-c2X-hpaA-TB1)的表达条件,并对其表达产物进行纯化和免疫活性鉴定。方法:通过诱导表达实验了解不同诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间对蛋白表达量的影响,并应用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析;Amyloss树脂预装柱对可溶性HpaA蛋白进行分离、纯化;对纯化后蛋白做Western blot实验鉴定免疫活性。结果:该工程菌培养2h时加入异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为0.3mmol/L进行诱导4h,目的蛋白表达量达到菌体总蛋白的30%以上;经纯化得到了较高纯度(>90%)的目的蛋白,并具有良好的免疫活性。结论:建立了从TB1(pMAL-c2X-hpaA)可溶性表达产物中纯化高纯度rHpaA融合蛋白的方法,为进一步的动物实验和诊断性抗原的研制以及工程菌发酵、高效表达生产工艺的研究打下了基础。
- 黄学勇段广才范清堂郗园林黄志刚宋春花
- 关键词：幽门螺杆菌基因工程纯化免疫活性
