国家自然科学基金(81270493)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 高脂饮食对C57BL/6J小鼠肝脏组织糖异生的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:研究高脂饮食对C57BL/6J小鼠肝脏组织糖异生的影响。方法:将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食组和高脂饮食组。饲养14周后处死,收集血清和肝脏组织,ELISA和酶学方法检测血清与肝脏组织中甘油三脂(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量,测定血清中胰岛素水平;过碘酸-希夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色观察肝细胞糖原颗粒;实时定量PCR和Western blot分别检测肝脏组织糖异生相关的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate car-boxykinase,PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)的基因和蛋白表达水平;葡萄糖耐量实验评价小鼠胰岛素抵抗程度。结果:饲养14周后,高脂饮食组小鼠体质量较普通饮食组明显增加;与普通饮食组相比,高脂饮食组小鼠血清与肝脏组织中TG、FFA含量明显增加;PAS染色表明高脂饮食组肝脏糖原含量明显增多;基因和蛋白检测结果显示高脂饮食组肝脏组织中糖异生相关的基因、蛋白表达增加;同时空腹血糖及血清胰岛素明显增加;葡萄糖耐量实验异常,血糖峰值延迟。结论:高脂饮食使C57BL/6J小鼠肝脏组织PEPCK、G-6-Pase表达增加,糖异生增加,导致空腹血糖增加,葡萄糖耐量受损。
- 杜琳敏赵蕾李青阮雄中陈压西
- 关键词：高脂饮食肝脏组织糖异生
- 炎症对脂肪酸负荷的HepG2细胞FAT/CD36表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察炎症是否干扰脂肪酸负荷的人肝癌细胞系HepG2细胞脂肪酸转运蛋白/CD36(fatty acid transporter/CD36,FAT/CD36)的表达及脂质代谢。方法:分别给予不同浓度软脂酸(0.00、0.04、0.08、0.16、0.32 mmol/L)处理HepG2细胞24 h。采用Western blot和real-time PCR的方法检测HepG2细胞FAT/CD36的蛋白及mRNA的表达水平,再用油红O的方法观察细胞的脂质积聚情况。然后进一步选取0.04 mmol/L的软脂酸联合炎症因子[25 ng/ml的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)或20 ng/ml的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]处理HepG2细胞24 h后,观察细胞FAT/CD36的蛋白表达情况,再用油红O和酶法检测细胞内的甘油三酯(triglyceride,TG)水平,ELISA检测细胞内游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量。结果:软脂酸呈浓度依赖性上调HepG2细胞FAT/CD36的蛋白(r=0.873,P=0.000)和mRNA表达(r=0.884,P=0.000)及细胞内脂质积聚。炎症因子TNF-α和IL-6能明显刺激脂肪酸负荷的HepG2细胞FAT/CD36的蛋白表达进一步增加(P值分别为0.001和0.000)。油红O染色显示炎症因子TNF-α和IL-6能明显促进HepG2细胞的脂质积聚,胞内TG定量检测也显示炎症因子能促进HepG2细胞的脂质积聚,其中软脂酸联合TNF-α组与对照组及软脂酸组相比,P值分别为0.009和0.037,软脂酸联合IL-6组与对照组及软脂酸组相比,P值均为0.000。胞内FFA定量检测结果与油红O染色和TG检测结果一致,也显示炎症因子能促进HepG2细胞的脂质积聚,其中软脂酸联合TNF-α组与对照组及软脂酸组相比,P值分别为0.001和0.002,软脂酸联合IL-6组与对照组及软脂酸组相比,P值均为0.000。结论:炎症因子可以上调HepG2细胞FAT/CD36的表达并加重细胞内的脂质积聚。
- 殷鹭赵蕾李青黄爱龙陈压西阮雄中
- 关键词：炎症软脂酸CD36HEPG2细胞
- 炎症上调固醇调节元件结合蛋白1致C57BL/6J小鼠肝脏脂质积聚被引量：4
- 2013年
- 目的:研究炎症是否通过影响核转录因子固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory binding protein1,SREBP1)而致C57BL/6J小鼠肝脏脂质的异常聚集。方法:将8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(n=6)和炎症组(n=6)组,2组均喂以高脂饮食,炎症组小鼠皮下注射酪蛋白建立慢性炎症模型,对照组注射相应量磷酸盐缓冲液,18周后处死,测定血清中炎症介质水平及肝脏中的脂质水平,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,实时定量PCR和Western blot检测肝脏肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein1,MCP1)及脂肪酸合成相关基因SREBP1、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase alpha,ACCα)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)的基因和蛋白水平。结果:与对照组相比,炎症组血清中的炎症因子细胞白介素-6(interleukin-6,IL-6)(t=3.866,P=0.003)和血清淀粉样蛋白A(serum amyloidA,SAA)(t=15.207,P=0.000)水平以及肝脏中炎症因子MCP1(t=2.56,P=0.028)和TNF-α(t=11.169,P=0.000)的mRNA水平均显著上升,Western blot结果亦显示炎症组小鼠肝脏中TNF-α和MCP1蛋白水平高于对照组。炎症状态下,肝脏甘油三酯(triglyc-eride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)含量显著高于对照组[(0.21±0.07)mg/mg vs.(0.40±0.14)mg/mg,t=2.98,P=0.014;(3.80±0.58)nmol/mg vs.(5.38±1.38)nmol/mg,t=2.596,P=0.027]。油红O结果显示,炎症使脂质积聚更显著。SREBP1(t=6.161,P=0.000)及其下游与FFA和TG合成相关的基因ACCα(t=14.937,P=0.000),FAS(t=6.976,P=0.000)的mRNA水平在炎症组均显著上升,Western blot结果亦显示炎症组小鼠肝脏中ACCα、FAS的蛋白水平高于对照组。结论:炎症可能通过上调SREBP1,加重脂质在肝脏的聚集。
- 柏灵灵赵蕾李青黄爱龙陈压西阮雄中
- 关键词：炎症肝脏脂质
- 高脂饮食致C57BL/6J小鼠脂肪组织中胰岛素受体底物蛋白1异常磷酸化的分子机制被引量：2
- 2013年
- 目的:通过体内实验探讨高脂饮食(high fat diet,HFD)是否通过干扰哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target ofrapamycin,mTOR)/核糖体蛋白S6激酶(p70 S6 kinase,S6K)信号通路致C57BL/6J小鼠脂肪组织中胰岛素受体底物蛋白1(insulin receptor substrate protein1,IRS1)异常磷酸化。方法:8周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食(chow diet,CD)组、HFD组、HFD+溶媒(vehicle,Veh)组(HFD+Veh)及HFD+雷帕霉素(rapamycin,rapa)组(HFD+rapa),处理14周。ELISA、酶法分别测定血清及组织游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量。葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验用于分析机体胰岛素敏感性,判断是否存在胰岛素抵抗。Western blot技术检测胰岛素信号通路及mTOR/S6K信号通路相关蛋白表达水平。结果:HFD喂养14周后,小鼠体质量(CD组vs.HFD组:t=-4.370,P=0.007)及脂肪体质量比(CD组vs.HFD组:t=-4.441,P=0.004)明显增加,血清和脂肪组织中TG、FFA水平均明显升高(CD组vs.HFD组血清FFA:t=-3.849,P=0.005血清TG:t=-2.768,P=0.039;脂肪组织FFA:t=-6.501,P=0.001;脂肪组织TG:t=-2.838,P=0.03)。与CD组相比,HFD组小鼠脂肪组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein1,MCP1)蛋白表达明显上调(Western blot定量结果:TNF-α/actin:t=-19.261,P=0.000;MCP1/actin:t=-52.345,P=0.000)。葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验显示:HFD组小鼠空腹及葡萄糖负荷30、60、120 min时的血糖水平明显高于CD组(F=17.581,P=0.009);注射胰岛素后血糖水平都有所下降,但HFD组仍较CD组高(F=49.441,P=0.002)。小鼠脂肪组织中胰岛素信号通路及mTOR/S6K信号通路相关蛋白表达结果显示:HFD可增强mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化S6K(p-S6K)和丝氨酸(serine,Ser)磷酸化的IRS1[p-IRS1(Ser)]蛋白的表达,而降低总IRS1以及酪氨酸(tyrosine,Tyr)磷酸化的IRS1[p-IRS1(Tyr)]水平[Western blot定量结果CD组vs.HFD组:①IRS1/ac
- 吴瑜赵蕾李青阮雄中陈压西
- 关键词：高脂饮食脂肪组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
