教育部留学回国人员科研启动基金(2009-03)
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 相关作者：郑华川勾文峰王建平张梅英郑志宏更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院承德医学院更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金留学人员科技活动项目择优资助经费沈阳市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胃癌组织芯片快速制备及Reg Ⅳ编码产物检测被引量：3
- 2014年
- 目的:建立快速胃癌组织芯片(tissue microarray,TMA)制作方法,探讨其在RegⅣ编码产物检测和研究中的应用。方法:收集日本富山大学医学部1993-04-20-2010-11-29胃癌石蜡标本372例和相应癌旁黏膜标本(距离癌组织>4cm)198例,应用AZUMAYA芯片机构建48阵列组织芯片,利用免疫组化和原位杂交检测RegⅣ蛋白和mRNA的原位表达。在Olympus BX41显微镜下选定切取部位,利用2mm的穿刺针切除供体蜡块,不用制备受体蜡块,直接将切除组织放入金属包埋皿的固定盒上制备48阵列芯片。结果:组织芯片经HE染色确定了组织病理学诊断,免疫组化和原位杂交均发现在肠上皮化生和黏液分泌性肿瘤细胞质中存在RegⅣ蛋白和mRNA表达。胃黏膜肠化生中RegⅣ蛋白表达为100%(63/63),高于胃炎的29.0%(27/93,χ2=73.67,P<0.001)、腺瘤的85.7%(36/42,χ2=9.54,P<0.005)和胃癌的45.2%(168/372,χ2=65.06,P<0.001)。胃癌组织中,印戒细胞癌阳性率为95.3%(41/43),高于低分化癌的27.4%(32/117),χ2=55.89,P<0.001。原位杂交发现,癌旁黏膜肠化生上皮细胞中RegⅣmRNA表达阳性率为95.2%(40/42),高于癌旁正常黏膜的38.6%(17/44,χ2=30.63,P<0.001)和胃癌的20.3%(14/69,χ2=55.74,P<0.001)。结论:制备TMA不需要制备受体蜡块,提高了TMA制作速度。异常RegⅣ表达与胃黏膜肠化生-球样异型增生-印戒细胞癌的发生途径关系密切。
- 陈说勾文峰牛哲峰赵爽郑鑫赵杨高野康雄郑华川
- 关键词：胃肿瘤组织芯片原位杂交免疫组织化学
- 晶状体自发肿瘤转基因鼠脑横截面标本制备及鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的确定JCV T抗原诱发晶状体肿瘤转基因鼠脑中肿瘤来源及路径。方法 18月龄转基因鼠麻醉后4%多聚甲醛灌流固定,EDTA脱钙颅骨软化后脑经横截制备石蜡标本并进行HE染色。免疫组化和免疫荧光确定脑组织T抗原表达。结果经过脱钙处理后颅骨组织非常软,横截后发现白色肿瘤组织蔓延至脑组织中,HE染色确定眼部和脑部白色组织均为晶状体肿瘤细胞,免疫组化和免疫荧光结果显示细胞核中存在T抗原强阳性表达。结论 JCV T抗原诱发晶状体肿瘤是经过视神经孔进入脑组织,鼠头横截面组织标本制备对研究头部肿瘤的毗邻关系和肿瘤组织在脑组织中侵袭部位极具应用价值。
- 王建平张梅英勾文峰高野康雄郑华川
- 关键词：转基因鼠T抗原
- JCV病毒T抗原诱发晶状体上皮肿瘤动物模型建立被引量：5
- 2011年
- 目的利用α-crystallin启动子构建晶状体上皮细胞中JCV T抗原表达转基因鼠,试图建立晶状体自发肿瘤动物模型。方法利用限制性内切酶BclI分离pBSK(pBluescript SK)-T抗原,BamH I同尾连接插入以pBSK为载体的α-crystallin启动子下游,通过NciI酶切电泳分离带有α-crystallin启动子的T抗原核酸序列后显微注射入C57BL/6J小鼠受精卵中。PCR检测转基因阳性鼠及JCV病毒T抗原拷贝数,大体和组织学观察眼球及病变组织,免疫组织化学观察T抗原、p53和β-catenin表达。结果成功构建α-crystallin JCV T抗原表达质粒,转基因阳性鼠中2号鼠(αAT-2)拷贝数最高,该鼠眼球于11个月表现出肿瘤样改变,肿瘤细胞中T抗原、p53和β-catenin呈强阳性表达。结论 JCV T抗原直接诱发晶状体上皮肿瘤动物模型建立为JCV T抗原嵌入所致上皮肿瘤提供了直接实验依据,为JCV所致上皮肿瘤发生和演进分子机理研究奠定坚实基础,同时为抗肿瘤药物筛选及基因治疗监控提供了良好的动物模型。
- 王建平张梅英徐小燕王巍夏蒲郑志宏王禄增高野康雄郑华川
- 关键词：JC病毒T抗原转基因鼠晶状体
- 地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用
- 2012年
- 目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用。方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平。在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA。杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色。结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中。ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中。NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰。结论地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观。
- 杨雪勾文峰丁蕾肖丽君高野康雄郑华川
- 关键词：原位杂交原位PCR核酸
