国家自然科学基金(81071252)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 雄激素可调节的肾脏近端肾小管上皮细胞靶向杂合启动子的优化被引量：1
- 2014年
- 为研究肾脏雄激素调节蛋白杂合启动子Kap147／HAGT-Kpn的细胞特异性，将HAGT-Kpn片段克隆到pGL3-Kap147载体质粒上，通过细胞转染和荧光素酶活性测定，证实Kap147／HAGT-Kpn杂合启动子只在肾小管上皮细胞来源的OK、LLC-MK2细胞中具有活性，经20nmol／LDHT处理后其活性增加了7～8倍。依据雄激素应答原件的保守性，将不同长度的HAGT-Kpn亚片段克隆到pGL3-Kap147载体质粒上，经20nmol／LDHT处理后，KpnI-StuI和MscI-KpnI两个片段能够使Kap147活性增强1～2倍，由此表明Kap147／HAGT-Kpn杂合启动子依然具有组织细胞特异性且受雄激素调控，KpnI-StuI和MscI-KpnI两个片段承担了雄激素的调控作用。
- 孟军刘飞范立强朱庆庆吴宝杰左丽君
- 关键词：肾脏
- Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达
- 2019年
- 为了验证杂合启动子Kap147/Kpn的体内、外功能,构建了Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠。体外细胞转染和激素诱导证实Kap147/Kpn启动子具有细胞特异性,且受雄激素诱导。通过RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)和荧光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)证实Kap147/Kpn启动子引导Cre重组酶在转基因鼠(Cre-F0-2)睾丸组织中特异表达。荧光定量PCR检测发现,Cre mRNA在转基因鼠睾丸中的表达量与小鼠年龄相关,经15 mg/(kg·d)二氢睾酮(DHT)处理后睾丸中Cre mRNA表达量增加1.7倍,经100 mg/(kg·d)醋酸环丙孕酮(CAP)处理后Cre mRNA表达量降低约50%,证实Kap147/Kpn启动子在转基因鼠体内受雄激素调控。荧光组化显示,转基因鼠Cre-F0-2与双荧光Cre重组酶报告鼠杂交后,能成功介导子代鼠睾丸组织特异性的基因敲除。杂合启动子Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠(Cre-F0-2)具有雄激素调节性和睾丸靶向性,是一个潜在的研究睾丸基因功能的有力工具。
- 刘飞孟军范立强
- 关键词：基因打靶睾丸
- 重组人SOD2/3杂合酶的制备及其生物活性初探被引量：1
- 2011年
- 为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pET-SOD2/3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的SOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;利用肝素柱层析验证SOD2/3的肝素靶向性;将纯化后的融合蛋白加入体外培养的宫颈癌细胞,通过FITC和MTT实验观察杂合酶SOD2/3的转导能力及其在细胞内的活性。成功构建了SOD2/3杂合酶的表达载体,重组SOD2/3表达量占菌体总蛋白30%左右;金属螯合亲和层析一步纯化,回收率在70%以上,纯度达90%左右;重组酶能与肝素亲和层析结合,说明杂合酶SOD2/3有肝素靶向性;细胞实验证实SOD2/3较SOD2能更好地抑制Hela细胞生长。获得了较纯的重组SOD2/3杂合酶,该酶能直接以天然有活性的形式转导人宫颈癌细胞内并抑制其细胞增殖,具有很好的作为肿瘤治疗、抗氧化损伤药物的潜力。
- 程安阳范立强赵健李小灵王刚
- 关键词：纯化抗肿瘤
