广东省自然科学基金(5009153)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 相关作者：刘建军黄海燕邢秀梅席仁荣周丽更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心华南理工大学湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高剂量三氯乙烯对L-02肝细胞中Rho GDIα表达的影响被引量：1
- 2008年
- 背景与目的:观察高剂量三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对L-02肝细胞中Rho GDIα基因在mRNA及蛋白水平表达的影响。材料与方法:以β-actin为内参,采用蛋白印迹(western blot)和实时荧光定量RT-PCR技术对分别40μmol/L TCE(实验组)和DMSO(溶剂对照组)处理的正常L-02肝细胞中的Rho GDIα蛋白和mRNA水平进行检测。结果:高剂量TCE处理后Rho GDIαmRNA表达量显著下降而蛋白含量明显升高。结论:Rho GDIα基因表达在高剂量TCE处理后发生了特异性改变,为揭示TCE对机体的损伤作用机制提供了重要线索。
- 邢秀梅张坚松刘建军席仁荣黄海燕
- 关键词：三氯乙烯RHOBLOT实时定量RT-PCR
- 三氯乙烯诱导人L-02肝细胞适应性反应的差异蛋白质组学分析
- 2006年
- 目的研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,确定对细胞增殖无明显作用的1μmo.lL-1TCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺激浓度,预刺激时间12 h,预刺激后再刺激浓度(适应组)为30μmo.lL-1TCE,刺激时间24 h。然后选取0,1,30和1+30μmo.lL-1TCE(1μmo.lL-1TCE预刺激12 h后,再次接受30μmo.lL-1TCE刺激24 h)4组平行进行双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,银染显色,图像分析后,挑选差异蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定。结果1μmo.lL-1TCE预刺激L-02肝细胞后,能降低30μmo.lL-1TCE攻击产生的细胞毒性。与单独用30μmo.lL-1TCE攻击相比,细胞增殖能力增加明显,细胞死亡减少。分析比较4组二维电泳图谱,发现15个蛋白质斑点表达发生改变,对其中5个差异较明显的蛋白点进行质谱分析鉴定,分别为Ku 86自体抗原相关蛋白1、透明质酸蛋白(hyaluronan)介导细胞运动受体、谷胱甘肽转移酶ω1、白细胞弹性蛋白酶抑制剂和空泡ATP合酶亚单位B。结论TCE可诱导L-02肝细胞产生适应性反应,引起L-02肝细胞蛋白表达改变,差异蛋白大多参与机体保护。
- 刘建军黄海燕赵锦庄志雄袁建辉阳帆何建凡李习艺
- 关键词：三氯乙烯肝细胞蛋白质组
- SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达
- 目的构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达载体（EGFP）的融合表达质粒pEGFP-N2-SET并获得表达。方法根据人SET基因序列。设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、HindⅢ和KpnⅠ酶切位点的引物。从人L-0...
- 周丽席仁荣刘建军邢秀梅黄海燕
- 关键词：蛋白磷酸酶2A
- 文献传递
- 靶向Annexin A3短发夹环RNA干扰载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- [目的]利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术构建和鉴定膜联蛋白A3(Annexin A3)的真核表达载体,为进一步研究Annexin A3在肝细胞中的功能奠定基础。[方法]人工合成3对shRNA序列,退火后定向克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo上,采用酶切和测序法鉴定。[结果]质粒酶切及测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致。[结论]成功构建膜联蛋白A3靶向的真核表达载体。
- 席仁荣刘建军吴振强邢秀梅黄海燕
- 关键词：ANNEXINA3RNA干扰真核表达载体
- 三氯乙烯对L-02肝细胞Rho GDIα、ANXA3及GLO1表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的研究三氯乙烯（trichloroethylene，TCE）处理L-02肝细胞后，Rho鸟苷二磷酸分离抑制因子（RhoGDIα）、膜联蛋白A3（ANXA3）及乙二醛酶I（GL01）的表达变化。方法以40μmol／LTCE对L-02肝细胞进行染毒处理，DMSO做溶剂对照。分别采用蛋白质印迹（Western blot）法和实时荧光定量反转录一聚合酶链反应real—time quantitative RT—PCR）法检测RhoGDIα、ANXA3及GLO1在蛋白质和mRNA水平的表达变化。结果Western blot法分析结果显示，TCE处理后RhoGDIα、ANXA3和GLO1蛋白表达水平均上调，差异有统计学意义（P〈0．05）；实时荧光定量RT—PCR结果显示，TCE处理后ANXA3和GLO1mRNA表达的相对值分别为2．786±0．492和1．893±0．402，而RhoGDIα的mRNA表达的相对值为0．563±0．106，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TCE刺激后，RhoGDIα、ANXA3和GLO1蛋白分别在蛋白质和转录水平发生了相应变化，为进一步研究和揭示TCE致肝细胞损伤的分子机制奠定了基础。
- 周丽刘建军席仁荣邢秀梅黄海燕袁建辉庄志雄
- 关键词：三氯乙烯L-02肝细胞
- 三氯乙烯诱导L-02肝细胞适应性反应蛋白质组学改变
- 目的研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%DMSO作为溶剂对照组,确定无明显作用的1μmol·LTCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺...
- 刘建军黄海燕庄志雄袁建辉阳帆李习艺
- 关键词：三氯乙烯L-02肝细胞蛋白质组双向电泳
- 文献传递
- SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达载体(EGFP)的融合表达质粒pEGFP-N2-SET并获得表达。方法根据人SET基因序列。设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、HindⅢ和Kpn I酶切位点的引物。从人L-02肝细胞提取总RNA,以逆转录后cDNA为模板,PCR扩增获得SET基因片段,经双酶切后回收得到有以上两个酶切位点的SET基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pEGFP-N2载体中,获得重组质粒pEGFP-N2-SET。以LipofectamineTM 2000为载体,将构建好的真核表达质粒转染到L-02肝细胞中进行瞬时表达。结果经DNA测序鉴定证实,pEGFP-N2-SET重组质粒构建成功,经荧光倒置显微镜观察,证实能在细胞内进行蛋白表达。结论SET表达质粒的成功构建及表达为其进一步结构和功能研究奠定了基础。
- 周丽席仁荣刘建军邢秀梅黄海燕
- 关键词：蛋白磷酸酶2A
