上海市自然科学基金(98ZC14025)
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
- 相关作者：张德福王凯刘东吴华莉陈莹更多>>
- 相关机构：上海市农业科学院上海第二医科大学上海市农业遗传育种重点实验室更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金上海市科委科技攻关项目上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响被引量：6
- 2006年
- 本研究系统探讨了体细胞的组织来源及培养代数对猪核移植重构胚发育的影响。体外成熟培养40-44h的猪卵母细胞去核后,将经血清饥饿(0．5%FBs)培养2-9d、0．1mg/L Aphidicolin (APD)培养+0．5%FBS培养2-9d或一般培养法(10%FBS)培养的卵丘细胞、颗粒细胞、输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞,直接注射到去核的卵母细胞质中,或注射到卵周隙中。再经电融合(100V/mm,30μs,电脉冲1次)构建重构胚。重构胚以钙离子载体A23817或电脉冲结合6- DMAP激活处理,体外培养6天。耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经0．1mg/L APD+0．5%FBS培养处理后的重组胚卵裂率,均高于血清饥饿和一般培养处理的同种供体细胞(P＜0．01)。卵丘细胞、颗粒细胞经0．1mg/L APD+0．5%FBS处理后进行核移植的分裂率和发育率均高于输卵管上皮细胞和耳皮成纤维细胞(P＜0．05)。以猪颗粒细胞为核供体时,电融合法的重构胚分裂率显著高于胞质内注入法(P＜0．05),但囊胚发育率无显著差异(P＞0．05)。培养3代和6代的猪颗粒细胞以及培养6代和10代的耳皮成纤维细胞,其具有正常二倍染色体的细胞比例均无显著差异(P＞0．05)；以这2种细胞不同培养代数做供体进行核移植时,各代之间核移胚的体外分裂率、囊胚发育率无显著差异(P＞0．05)。这些结果表明：(1)猪耳皮成纤维细胞和颗粒细胞经培养传代所建立起来的细胞系相对比较稳定；(2)0．1mg/L APD预培养处理供体细胞能提高猪体细胞核移植的效果,血清饥饿培养则无明显效果；(3)猪颗粒细胞和耳皮成纤维细胞等均可做供核细胞．核移植后都能得到体细胞克隆的囊胚,但前者的效果略优于后者,且其核移植效果不受供核细胞培养代数的影响；(4)电融合核移植胚胎的发育率高于胞质内直接注入法,但两者的总体效率相近。
- 张德福刘东汤琳琳王英陈茵王凯Karl SchellanderLIN Cai Lu
- 关键词：体细胞核移植细胞周期
- 猪耳成纤维细胞的体外培养及EGFP基因的转染被引量：15
- 2007年
- 优化脂质体Liperfectamin 2000转染EGFP（加强型绿色荧光蛋白）至猪耳成纤维细胞的参数，如DNA和脂质体的用量、细胞汇合度、细胞暴露于DNA和脂质体复合物的时间。试验显示：24孔板内1．0μg DNA和2．4μL脂质体的用量转染效率最高，DNA和脂质体过量会对细胞产生毒性，影响转染效率；细胞汇合85％～90％才能得到较高的转染效率；细胞暴露4h转染效率最高，时间过长反而使转染效率下降。
- 刘伟吴华莉张德福
- 关键词：绿色荧光蛋白基因
- 猪体细胞核移植重构胚发育异常及印迹基因表达特征研究的进展
- 2006年
- 由于猪的器官极可能成为人类未来器官的供应源，猪体细胞核移殖及转基因等方面的研究已成为全球的热点。近几年来，猪体细胞核移植研究取得了一定的进展，但总体来看核移植效率还很低（1％～2％），还需要不断完善核移植程序及对一些基础问题的深入研究。本文主要对猪体细胞核移植重构胚发育异常及“印迹”基因表达特征作一综述与分析，旨在为研究者提供一些有益的启示。
- 张德福吴华莉刘东陈学进陈莹王凯
- 关键词：核移植印迹基因
- 影响小鼠转基因原核胚体外发育的若干因素被引量：5
- 2001年
- 探讨了显微注射不同浓度的外源 DNA以及温度、培养基等对小鼠原核胚体外培养发育能力的影响。显微注射 1 .5、1 5、3 0 mg/L的衰变加速因子 ( CD55)、膜反应溶解因子 ( CD59)基因后 ,小鼠原核胚发育到囊胚的比率随 DNA质量浓度的升高而依次降低为 57.7%、3 6.6%、1 0 .4 % ,差异极显著 ( P <0 .0 1 )。注射 1 .5mg/L外源 DNA,原核胚的囊胚率 ( 57.7% )比对照组 ( 54.5% )稍有提高 ,但差异不显著 ( P >0 .0 5)。 1 .5mg/L为本试验最佳外源 DNA注射质量浓度。 3 7℃、CZB培养液或改进的 Whitten氏培养液 ,可取得较好的体外培养效果。
- 张德福陈茵王英王凯张平李震
- 关键词：显微注射体外发育转基因小鼠原核胚
- 猪作为异种器官移植供体的研究现状及发展趋势被引量：1
- 2006年
- 本文详细介绍了猪作为异种器官移植供体的研究现状及发展趋势,表明随着猪转基因克隆技术的成熟,猪作为异种器官移植供体将成为现实。
- 张德福刘东吴华丽陈学进王凯陈莹
- 关键词：异种器官移植体细胞克隆
- 猪体细胞克隆研究进展被引量：7
- 2007年
- 综述了用核移植方法生产体细胞克隆猪的技术关键和难点及应用情况,并对提高猪体细胞核移植效率的策略进行了分析。
- 张德福吴华莉刘东陈学进陈莹王凯
- 关键词：核移植克隆转基因
