贵州省科技计划项目([2010]3152)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- 雷帕霉素对白血病SUP-B15细胞株HIF-1α、VEGF表达的影响
- 2012年
- 目的:观察雷帕霉素对人急性淋巴细胞白血病SUP-B15细胞的生长及HIF-1α、VEGF表达的影响。方法:实验分为雷帕霉素处理组和对照组,雷帕霉素处理组以含不同终浓度雷帕霉素(10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L)的IMDM培养处理,对照组以相同体积细胞IMDM培养液培养,并于处理后24 h、48 h、72 h观察各组细胞形态,实时荧光定量PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达。结果:雷帕霉素处理后SUP-B15活细胞数量减少,死细胞数量增加,可见细胞抱团生长、胞膜出泡、细胞破碎等现象,随药物浓度升高和作用时间增加变化程度明显。瑞氏染色观察可见,雷帕霉素处理组早期无明显变化,处理后期(72 h)细胞出现明显空泡样改变,并呈浓度依赖关系;雷帕霉素处理组细胞HIF-1αmRNA的表达在24 h变化不明显;48 h时,10 nmol/L、100 nmol/L雷帕霉素处理细胞HIF-1αmRNA的表达上调,20 nmol/L、50 nmol/L雷帕霉素处理细胞HIF-1α表达下调;72 h时,各浓度的雷帕霉素对HIF-1αmRNA的表达均呈上调趋势;在雷帕霉素处理后,除较低浓度(10 nmol/L、20 nmol/L)雷帕霉素处理72 h外,SUP-B15细胞的VEGF mRNA表达均呈显著下调。结论:雷帕霉素可抑制SUP-B15细胞生长,导致形态明显改变,并能下调SUP-B15细胞VEGF mRNA的表达。
- 张亚莉陈涛李美王剑青张建英
- 关键词：雷帕霉素低氧诱导因子-1Α
- 雷帕霉素对低氧下人HL-60细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2012年
- 本研究拟通过小分子化合物氯化钴(CoCl_2)模拟的低氧环境,探讨雷帕霉素(RPM)对该低氧下人急性髓细胞白血病HL-60细胞的生物学行为的影响。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组HL-60细胞分别采用CoCl_2、CoCl_2/RPM、RPM进行处理,对照组为常氧下常规培养的HL_60细胞,处理及培养24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;MTT比色法检测各组细胞的活性和增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,与对照组细胞形态规则,胞核呈圆形或椭圆形相比,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组细胞密度降低,生长明显受抑,细胞胞核呈不规则形或杆状,染色质粗糙,伴扭曲折叠等变化。各组间不同时间细胞增殖抑制率差异显著(P<0.05),低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组增殖抑制率随着处理时间延长而增大,且低氧雷帕霉素处理组的增殖抑制率大于低氧模拟组。与常氧下的对照组及雷帕霉素处理组比较,低氧的模拟组和雷帕霉素处理组诱导细胞发生较明显的凋亡,且后期72 h低氧雷帕霉素处理组凋亡率显著高于模拟低氧处理组。以上结果表明,模拟低氧环境下,HL_60细胞生长明显受抑制,且诱导细胞凋亡;雷帕霉素可增强对低氧对细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。
- 张亚莉朱红敏王剑青刘会陶建蜀陈涛莫小阳
- 关键词：雷帕霉素HL-60细胞低氧凋亡
- 低氧对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及HIF-1α表达的影响被引量：2
- 2011年
- 探讨模拟低氧环境对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及低氧诱导因子表达的影响。方法 常规方法复苏、传代培养细胞，待细胞进入对数生长期后用于实验。将细胞分为低氧处理组和常氧对照组，常氧对照组采取常规培养，低氧处理组分别用50、200、400、800 μmol/L二氯化钴（CoC1 2 ）处理，并于24、48、72 h收集细胞进行以下指标检测：①倒置相差显微镜观察细胞形态变化；②MTT比色法检测细胞增殖抑制率；③实时荧光定量PCR检测HIF-1α在转录水平的表达。结果 1：低氧模拟环境下，细胞在形态上呈较明显变化，并随CoCl 2 浓度和处理时间的延长变化显著；2：MTT实验结果显示，与常氧对照组比较，CoCl 2 处理组均产生明显抑制作用，抑制率随着药物浓度增加而增大；3：实时荧光定量PCR结果表明，与对照组（24 h）相比，50 μmol/L CoCl 2 和200 μmol/L CoCl 2 低浓度处理组HIF-1α mRNA的表达均有上调，且上调呈剂量和时间依赖关系；结论 1：CoCl 2 模拟低氧后，细胞生长明显受抑；2：低浓度（50~200 μmol/L）CoCl 2 组HIF-1α mRNA表达上调并呈现时间、浓度依赖性；3：本研究涉及的低氧模拟环境对HL-60细胞未引起明显的诱导分化现象。
- 张亚莉徐琳邱健李志樑王剑青李锐刘会朱红敏
- 关键词：低氧诱导因子HL-60细胞白血病氯化钴
- 雷帕霉素对人急性淋巴细胞白血病细胞SUP-B15的增殖、凋亡与自噬的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨雷帕霉素(RAPA)对人急性淋巴细胞白血病SUP-B15细胞的增殖、自噬与凋亡的影响。方法常规方法复苏、传代培养SUP-B15细胞,设置空白对照组(正常培养)、雷帕霉素处理组。处理24、48、72 h后收集细胞,采用MTT比色法检测细胞的活性和增殖能力;采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;吖啶橙单染及透射电镜观察细胞自噬现象。结果 MTT检测结果显示,RAPA对SUP-B15细胞增殖有较强抑制作用(IC50=18.174 nmol/L),且抑制作用随药物剂量增加和作用时间延长而增强;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,不同浓度RA-PA作用可诱导SUP-B15细胞凋亡,作用48、72 h细胞凋亡较24 h时明显;RAPA作用48 h时的细胞凋亡随药物浓度增大而增多,72 h时高剂量药物(50、100 nmol/L)引起的细胞凋亡较低剂量药物(10、20 nmol/L)少;吖啶橙单染荧光显微镜观察显示,与空白对照组相比,雷帕霉素处理组细胞胞质中出现较多红色斑点的酸性膜泡(即自噬小体),且随药物浓度增大红色斑点增多;透射电镜观察结果显示,雷帕霉素处理组细胞胞质内可见较多自噬小体和自噬溶酶体,线粒体内嵴明显紊乱,细胞核不规则,染色质边缘化。结论雷帕霉素对SUP-B15细胞生长有较强的抑制作用;雷帕霉素可诱导SUP-B15细胞发生自噬和凋亡,且自噬的发生先于凋亡出现,一定强度的自噬活性可诱导细胞凋亡增加。
- 张亚莉陈涛王剑青李美张建英
- 关键词：雷帕霉素凋亡自噬
- HOLE基因外显子2区SNP与先天性心脏病的关联研究被引量：2
- 2010年
- 目的:研究HOLE基因外显子2区SNP与人类先天性心脏病(CHD)的相关性。方法:以病例组179例CHD患者和对照组183例门诊体检健康人为研究对象,酚-氯仿法提取外周血DNA,PCR扩增产物经变性丙烯酰胺电泳鉴定基因型,应用卡方检验分析组间基因型频率及等位基因频率差异。结果:(1)粤黔两地汉族人群中存在HOLE基因SNPrs10569304的插入缺失(GCC/-)多态性,对应为等位基因A/B。(2)对照组和病例组的基因型频率及等位基因频率符合Hardy-Weinberg平衡,两组AA、AB和BB三种基因型频率分别为21.31%、54.09%、24.59%和16.75%、46.36%、36.87%,经卡方检验基因型分布差异有统计学意义(χ2=6.51,P<0.05),与对照组相比,病例组中BB基因型频率升高,AA、AB基因型频率降低。(3)对照组与病例组A和B等位基因频率分别为48.36%,51.64%和39.94%,60.06%,病例组B等位基因频率显著高于对照组,分布差异有显著性(χ2=5.20,P<0.05)。结论:粤黔两地汉族人群中HOLE基因SNPrs10569304存在插入缺失(GCC/-)多态性,具有BB基因型的个体罹患CHD的危险度增高。
- 张亚莉徐琳蒙仕仁王剑青邱健
- 关键词：心脏缺损先天性单核苷酸多态性
