国家自然科学基金(20906050)
- 作品数：8 被引量：25H指数：3
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- 相关机构：南京工业大学淮阴工学院更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>
- 大黄欧文菌中蔗糖异构酶基因的克隆表达及应用被引量：1
- 2011年
- 以大黄欧文菌(Erwinia rhapontici)NX-5基因组DNA为模板,PCR扩增得到编码蔗糖异构酶(SIase)的基因palⅠ,构建克隆载体pUC18-palⅠ。经测序正确后,将palⅠ亚克隆至表达载体pET-22b(+)上,并在E.coliBL21(DE3)中成功表达相对分子质量约为66 000的可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱对表达产物进行纯化,纯酶的比活为40 U/mg。转化条件研究表明:重组菌能够高效转化质量分数为50%的蔗糖溶液,转化液中异麦芽酮糖得率为85%。
- 李莎任贲林璐徐虹蔡恒
- 关键词：克隆表达
- Gluconobacter oxydans NH-10中短链D-阿拉伯糖醇脱氢酶的研究被引量：2
- 2010年
- 以氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)NH-10基因组DNA为模板,扩增得到D-阿拉伯糖醇脱氢酶基因arDH,将其克隆到大肠杆菌表达载体JM109(DE3)中进行诱导表达。SDS-PAGE电泳分析ArDH的分子量约为30kDa,是一个短链脱氢酶,既能催化D-阿拉伯糖醇氧化为D-木酮糖,又能催化D-木酮糖还原为D-阿拉伯糖醇。催化氧化反应时,对D-阿拉伯糖醇的Km为60.67mmol/L,Vmax为0.803U/mg;它能同时依赖于NAD+和NADP+,但是更加偏好辅酶NAD+;最适pH为12.0。还原反应对D-木酮糖的Km为36.39mmol/L,Vmax为1.71U/mg;最优pH为7.0,最适温度均为30℃。
- 戴小燕沈晓波朱宏阳徐虹
- 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌克隆
- 蔗糖异构酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达及重组菌的细胞固定化被引量：3
- 2010年
- 分别利用IPTG和乳糖两种诱导物诱导蔗糖异构酶(SIase)基因在E.coliBL21(DE3)中实现表达,对诱导温度、诱导时机、诱导物浓度、诱导持续时间进行比较分析并优化,确定了二者的最佳诱导条件,在E.coli培养3h后(OD600约为0.9)添加终浓度为0.8mmol/L的IPTG(0.5mmol/L乳糖)在20℃(24℃)条件下诱导14h(12h)能获得最高的蛋白表达量及SIase酶活。在最优条件下以IPTG为诱导物时目的蛋白占总蛋白的41.6%,单位体积培养液中SIase酶活为12.37U/mL,以乳糖为诱导物时分别为27.2%,14.72U/mL,从收获酶活角度考虑可见乳糖作为诱导物的优势;而后利用海藻酸钠包埋法固定化重组菌,转化初始浓度为500g/L的蔗糖溶液,转化10～11h后异麦芽酮糖平均得率在83%以上,蔗糖平均转化率大于99%,固定化细胞能够连续稳定转化25批次,转化效率相对于原始菌提高了近55%。
- 任贲李莎徐虹蔡恒
- 关键词：乳糖诱导IPTG固定化
- 氧化葡萄糖酸杆菌驯化选育及其产二羟丙酮被引量：3
- 2012年
- 通过梯度增加种子培养基中甘油浓度驯化氧化葡萄糖酸杆菌(Cluconobater oxydans),有效地提高了该菌对甘油的耐受性,菌株产二羟丙酮水平比驯化前提高了29%,在此基础上,采用单因素试验,对其发酵工艺进行优化。考察甘油质量浓度、酵母膏质量浓度、CaCO_3质量浓度、接种量对发酵的影响,结果显示最佳工艺条件为:甘油质量浓度为60 g/L,酵母膏质量浓度为5 g/L,CaCO_3质量浓度为10 g/L,接种量4%,在此条件下,经72 h摇瓶发酵甘油转化率达96%,二羟丙酮产量可达57.4 g/L,7.5 L发酵罐分批发酵54 h时甘油转化率达97%,二羟丙酮产量可达58.2 g/L。
- 游庆红戴小燕朱宏阳徐虹
- 关键词：甘油氧化葡萄糖酸杆菌驯化发酵
- 基于同源建模和定点突变技术研究嗜热型L-阿拉伯糖异构酶与D-半乳糖的亲和作用被引量：3
- 2012年
- 通过同源建模分析选取对Lactobacillus fermentum CGMCC2921来源的L-阿拉伯糖异构酶(简称L-AI酶)催化D-半乳糖生产D-塔格糖起重要作用的氨基酸位点进行突变,发现当Q16,M311,K423和Q438位点的氨基酸突变为丙氨酸时,突变酶Km值降低,其中突变酶M311A降至本体的51.6%,对D-半乳糖的转化率提高了18.7%.当K423位点的氨基酸残基分别突变为丙氨酸、天冬酰胺或精氨酸时,突变酶与底物的亲和力以及D-半乳糖的转化率随着423位点突变氨基酸侧链长度的增加而降低.运用计算机分子模拟技术分析表明,当M311位点氨基酸突变为丙氨酸以后,催化位点氨基酸残基与底物D-半乳糖之间的氢键作用增强,导致与底物亲和力增大,从而提高了酶活力.
- 李贵祥徐铮李莎徐虹
- 关键词：L-阿拉伯糖异构酶D-塔格糖发酵乳杆菌同源建模
- 微生物来源蔗糖异构酶的研究进展及应用被引量：7
- 2011年
- 异麦芽酮糖是近年来新兴的一种功能性甜味剂,在食品、医药等工业中具有广阔的应用前景。蔗糖异构酶是生物法工业化生产异麦芽酮糖最有效的酶。本文介绍了近年来国内外蔗糖异构酶的生产菌株、酶学性质、结构与功能,阐述了蔗糖异构酶催化生产异麦芽酮糖和海藻酮糖的机制及其在异麦芽酮糖生产中的应用。并展望了其今后的研究方向:应从SIase高产菌株的选育、发酵产酶工艺优化方面开展工作,大幅度提高产酶水平。
- 李莎徐虹
- 关键词：异麦芽酮糖酶学性质
- 利用固定化重组大肠杆菌细胞生产D-塔格糖被引量：4
- 2011年
- 利用经海藻酸钙包埋的重组大肠杆菌细胞催化D-半乳糖生产D-塔格糖,考察了细胞包埋量、反应条件对固定化细胞催化效率以及对D-塔格糖生产稳定性的影响。确定的最优转化条件为:温度65℃,pH 6.5,添加终浓度为1 mmol/L Mn2+,底物(D-半乳糖)浓度100 g/L,重组大肠杆菌细胞用量40 g/L。固定化小球在0.3%戊二醛溶液中交联30 min可以显著提高其在高温下的机械强度。考察了异构化反应体系中硼酸与底物间的摩尔比对产率的影响。研究结果表明,添加适量的硼酸可以改变原有的化学反应平衡,实现D-塔格糖的高产。利用D-半乳糖为底物在最优的反应条件下催化24 h,固定化细胞对D-半乳糖的转化率最高,可达65.8%,连续转化8批次的平均转化率为60.6%,为工业化生产D-塔格糖奠定了基础。
- 付凤根徐铮李贵祥李莎冯小海徐虹
- 关键词：D-塔格糖固定化细胞重组大肠杆菌硼酸L-阿拉伯糖异构酶
- 响应面法优化重组大肠杆菌产蔗糖异构酶发酵培养基被引量：4
- 2011年
- 通过碳氮源的不同浓度对重组大肠杆菌E.coil BL21(DE3)发酵产蔗糖异构酶(SIase)的影响,并借助于数学分析软件Design Expert,结合Plackett-Burman试验设计和中心复合试验设计分析法,对蔗糖异构酶的产生菌进行了发酵培养基的优化研究。实验表明,最佳培养基组分为甘蔗糖蜜10.65 g/L,玉米浆22.22 g/L,NaCl7.57 g/L,MgSO4.7H2O0.52 g/L,KH2PO44.46g/L,优化后的蔗糖异构酶活力达到29.1U/ml,比LB培养基培养重组大肠杆菌(15U/ml),蔗糖异构酶活力提高了94%,与原始菌大黄欧文菌NX-5相比提高了21.4倍(1.3U/ml)。
- 汪晨李莎徐虹魏艳蔡恒
- 关键词：响应面甘蔗糖蜜乳糖诱导
