江西省科委社会发展攻关资助项目
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：江西省人民医院丰城市人民医院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 兔角膜缘干细胞的体外培养和生物学特性观察被引量：1
- 2005年
- 目的探讨兔角膜缘干细胞的体外培养方法并观察其生物学特性.方法采用消化培养法,分2组培养,1组为消化并过滤后的角膜缘干细胞培养组,另1组为消化后未过滤的带组织块培养组,均用含20%胎牛血清的培养液培养,待细胞长成良好单层后消化传代,分别观察记录细胞在原代和传代培养时的生长特性并行HE染色观察.结果过滤组角膜缘干细胞在培养24 h后开始贴壁生长,7～10 d形成良好单层,细胞以圆形或椭圆形为主,核较大,呈原始细胞特征,传代培养时见细胞体积逐渐增大,核变小,成纤维细胞少见;带组织块培养组原代培养时与过滤组无明显差异,传代时则见成纤维细胞渐增多,至第3代时占主导并抑制了角膜缘干细胞的生长.结论采用消化培养法可成功培养出兔角膜缘干细胞,培养时应滤除组织块以减少成纤维细胞的影响.
- 易敬林钟文贤
- 关键词：角膜缘干细胞生物学特性
- 深低温保存兔角膜缘干细胞的体外培养被引量：2
- 2005年
- 目的探寻深低温保存兔角膜缘干细胞的体外培养方法。方法将2 mm宽的兔角巩膜组织通过程序降温仪降温后置于-196℃液氮中深低温保存。1年后复温,应用消化培养法分别对冻存及新鲜的兔角膜缘干细胞进行体外培养,观察并记录细胞生长情况,HE染色观察培养细胞的形态特征。结果经过深低温保存的兔角膜缘干细胞可以在体外被成功培养并传代,其在原代培养48h后开始贴壁生长,5 d后生长较旺盛,但可见部分破裂和死亡细胞,约12 d基本形成单层;传代培养时次日贴壁,7 d形成单层。新鲜兔角膜缘干细胞原代培养时细胞形态相似,但破碎死亡细胞少见,且于7 d左右即基本形成单层,传代时两者无明显差别。结论深低温保存的角膜缘干细胞能被成功地进行体外培养,培养后细胞具有与培养的新鲜角膜缘干细胞基本相似的特性,为深低温保存的角膜缘干细胞培养后移植治疗临床眼表疾病提供了实验依据,并为眼库技术的发挥开辟了新的应用途径。
- 易敬林钟文贤杨海军钟琳娜
- 关键词：角膜缘干细胞深低温保存
- 人胎儿角膜缘干细胞的体外培养及鉴定
- 2005年
- 目的探讨人胎儿角膜缘干细胞的体外培养及鉴定方法。方法应用消化培养法对人胎儿角膜缘上皮组织进行体外培养并观察记录培养细胞的生长特性;对胎儿角膜缘组织及培养细胞采用一系列单克隆抗体进行免疫酶细胞化学染色检测;并用扫描电镜观察原代细胞的表面状况。结果胎儿角膜缘上皮细胞原代培养时生长旺盛,传代培养时保持高增殖速率。免疫酶细胞化学染色见培养前胎儿角膜缘组织基底层有多量AE5阴性、AE1和PCNA阳性细胞,并见较多HLA-DR阳性细胞;原代细胞绝大部分AE5和HLA-DR染色阴性,AE1和PCNA阳性;传代培养至第3代时AE5阴性细胞仍占大部分;扫描电镜观察原代细胞以球形或短圆柱形为主,表面多突起和微绒毛。结论采用消化培养法可成功培养出具有高增殖力和低抗原性的人胎儿角膜缘干细胞,为临床眼表重建开辟了新的思路。
- 易敬林钟文贤
- 关键词：胎儿角膜缘干细胞生物学特性
- 不同来源人角膜缘干细胞的体外培养研究被引量：5
- 2005年
- 目的探讨胎儿和成人角膜缘干细胞的体外培养方法并观察其生物学特性.方法应用消化培养法对胎儿和成人角膜缘上皮组织分别进行体外培养,观察记录培养细胞的生长特性并计算其克隆形成率(colony-forming efficiency, CFE).对胎儿和成人角膜缘组织及培养细胞采用一系列单克隆抗体进行免疫酶细胞化学染色检测;并用扫描电镜观察原代细胞的表面状况.结果胎儿角膜缘干细胞原代培养时生长旺盛,8～10 d达到生长高峰,CFE为(26.18±4.75)%,传代时保持高增殖速率;成人角膜缘干细胞原代培养时生长不及胎儿细胞旺盛,6～8 d达到生长高峰,CFE为(15.45±3.88)%,随着传代次数增加其增殖能力明显下降;两种细胞原代培养时CFE值差异有显著性(t＝6.78, P＜0.001).免疫酶细胞化学染色见培养前胎儿角膜缘组织基底层有多量AE5阴性、AE1和PCNA阳性细胞,并见较多HLA-DR阳性细胞;胎儿原代培养细胞绝大部分AE5和HLA-DR染色阴性,AE1和PCNA阳性;传代培养至第3代时AE5阴性细胞仍占大部分;成人角膜缘组织及培养细胞染色结果则见上述干细胞特征细胞数量比例较低,而HLA-DR染色结果相似.扫描电镜观察胎儿原代细胞以球形或短圆柱形为主,表面多突起和微绒毛,成人原代细胞形态相似,但直径较大.结论采用消化培养法可成功培养出具有高增殖力等干细胞特性的胎儿角膜缘干细胞,其抗原性较培养前明显降低,且其生物学特性显著优于成人角膜缘干细胞,是一种新的优越的角膜缘干细胞来源,将在临床眼表重建中展现广阔的应用前景.
- 易敬林钟文贤
- 关键词：胎儿角膜缘干细胞生物学特性
- 带角膜缘干细胞的板层角膜移植术治疗严重角膜病变
- 2005年
- 目的报告带角膜缘干细胞的异体板层角膜移植术治疗严重角膜病变的疗效.方法供体角膜选用新鲜尸体眼球,制作的板层角膜植片包括透明角膜、角膜缘和角膜缘周围4 mm的巩膜,移植到已去除病变组织的眼球表面,观察眼表结构的愈合情况.结果 63例(63眼)角膜病变患者被实施了带角膜缘干细胞的板层角膜移植术,经过5～52月,平均(12.5±6.2)月的随访,大部分患者维持较稳定的眼表,但有3例患者出现明显的上皮排斥反应,经过强化抗排斥治疗,2例被控制;1例蚕蚀性角膜溃疡患者于术后6月复发;所有角膜良性肿瘤患者在随访期内均未见复发.结论带有活性角膜缘干细胞的异体板层角膜移植是治疗伴有角膜缘干细胞缺乏或功能障碍的严重角膜病变的较好方法.
- 易敬林崔华杨海军
- 关键词：板层角膜移植角膜缘干细胞角膜疾病
- 培养的异体人角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病被引量：2
- 2005年
- 目的探讨培养的异体人角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的方法和疗效.方法采用消化培养法,对角膜移植术后剩余角膜缘组织进行体外培养,载体为冰冻保存人羊膜,培养的细胞形成单层后,移植到已去除病变组织的眼球表面,观察眼表结构的愈合情况.结果 31例(34眼)眼表疾病患者进行了培养的异体人角膜缘干细胞移植,所有病例术后早期(2月内)均形成良好眼表,但随访3～41(平均15.4±11.6)个月后,有3例复发性翼状胬肉患者再次复发,1例急性眼碱烧伤于术后2月时发现角膜轻度血管化和结膜化,其他患者在随访期内均维持稳定的眼表情况,视力也有不同程度的提高.结论培养的异体角膜缘干细胞移植术是治疗因角膜缘干细胞缺乏或功能障碍引起的眼表疾病的有效方法.
- 易敬林杨海军钟文贤崔华幸宜春
- 关键词：同种异体移植角膜缘干细胞眼表疾病
