国家自然科学基金(20906076)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王敏庄文超郝健魏东史吉平更多>>
- 相关机构：天津科技大学中国科学院上海高等研究院燕山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 克雷伯氏肺炎杆菌电击转化条件的优化被引量：4
- 2012年
- 针对克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)TUAC01的电击转化方法进行了研究。主要考察了培养基EDTA的浓度、细胞的生长状态、感受态细胞的密度、电击电压、质粒浓度等参数对转化效率的影响,建立了一种适合K.pneumoniae TUAC01的电击转化方法。结果:K.pneumoniae TUAC01培养基中添加EDTA至终浓度0.7mmol/L;当细胞生长至OD600为0.7时收集菌体,制作感受态细胞;制作的感受态细胞浓度OD600大于30时,使用2mm的电转杯在2kV的电压下转化,转化效率达到最大值,达到8.58×105cfu/μg DNA。
- 魏东王敏庄文超史吉平郝健
- 关键词：克雷伯氏肺炎杆菌电击转化
- 大肠杆菌中1,3-丙二醇氧化还原酶的表达与纯化被引量：3
- 2011年
- 目的:在大肠杆菌中表达1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR),并对PDOR进行纯化。方法:从克雷伯氏肺炎杆菌(Kleb-siella pneumoniae)基因组中,克隆PDOR基因dhaT。构建表达载体pDK-dhaT,在E.coli DH5α中利用IPTG诱导进行表达。细胞裂解液利用硫酸铵盐析、Sephadex G-200凝胶层析和DE23 Cellulose阴离子交换层析,进行酶蛋白分离提纯。结果:用SDS-PAGE分析表明胞内PDOR占可溶性蛋白的39.8%,酶活为14.5U/ml。纯化后酶液比酶活提高3.94倍,回收率为15.5%。结论:成功地构建了PDOR高效表达载体,并且得到了高纯度的PDOR。
- 刘海平郝健
- 关键词：1,3-丙二醇氧化还原酶克隆纯化
