国家自然科学基金(31270315)
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
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- 植物exocyst复合体的功能
- 2016年
- Exocyst是广泛存在于酵母及动植物中的一种八蛋白复合体,它最先是在酵母中被发现的,之后人们在植物中也发现了该复合体,并探究了它在植物细胞的功能。由于exocyst中的EXO70亚基在植物中数量很多,所以很有可能不同的EXO70亚基会组成不同的exocyst复合体,各exocyst在植物体内有着不同的功能。本文主要介绍exocyst各亚基间的相互作用、各亚基与其他因子间的相互作用,并详细阐述迄今为止发现的exocyst的各种功能:即其在非常规蛋白分泌、病原体防御、植物细胞壁的形成、细胞极化以及内膜运输中的作用。
- 曹雅君高志勇
- 关键词：EXOCYST
- 匍枝根霉内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的克隆及表达
- 2013年
- 从匍枝根霉TP-02的cDNA文库中克隆得到其内切葡聚糖酶基因,并在毕赤酵母中进行表达.该内切葡聚糖酶基因大小为954bp,将其与pPIC9K质粒经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,利用T4连接酶进行连接.将线性化后的重组质粒转化毕赤酵母GS115,并利用MD平板和刚果红平板进行筛选.阳性克隆经甲醇诱导培养84h后,产生的内切葡聚糖酶酶活力达到峰值为1.754IU/mL.
- 张莹莹汤斌
- 关键词：匍枝根霉内切葡聚糖酶毕赤酵母
- 利用WGCNA对受白粉菌侵染后的拟南芥转录组差异基因分析被引量：2
- 2020年
- 加权基因共表达网络分析(WGCNA)是一种用于鉴定协同表达的基因模块的方法。为探究拟南芥天然抗病基因,本研究利用WGCNA分析拟南芥受白粉菌UCSC1 (Erysiphe cichoracearum)侵染后的表达情况,挖掘其转录组的差异表达基因,构建基因共表达网络并识别协同表达的基因模块。筛选出与白粉菌侵染最相关的基因模块,并进行验证分析以确认鉴定的基因。功能富集分析结果表明:模块基因富集于机体获得性免疫,水杨酸生物合成等多个抗病相关通路,值得继续挖掘与拟南芥抗病过程的更多功能性关联。其他基因功能仍需鉴定,本研究为拟南芥抗病及植物育种研究提供了新思路。
- 尚鸿运高志勇
- 关键词：拟南芥白粉菌转录组
- 匍枝根霉TP-02内切葡聚糖酶基因eg2的克隆表达及功能分析被引量：8
- 2013年
- 从匍枝根霉TP-02的cDNA文库中克隆得到内切葡聚糖酶基因eg2,在大肠杆菌BL21中成功表达,通过对其结构功能进行初步分析,并对EGⅡ的纤维素结合模块CBM1及催化结构域GH45区进行突变研究。结构分析表明:N39S可影响CBM1亲水平面的形成,V136D及E260D对GH45活性中心的改变较大。突变株的发酵特性显示,N39S可缩短达到峰值的时间,V136D及E260D可显著提高酶活。其中,突变株EGⅡ-F在发酵21 h后,酶活达到最高为1.321 IU/mL,比突变前提高了82.7%。
- 汤斌张莹莹杨亚平
- 关键词：匍枝根霉内切葡聚糖酶突变功能分析
- 高质量匍枝根霉cDNA文库的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 从匍枝根霉总RNA出发纯化获得mRNA,经逆转录酶作用合成cDNA,构建高质量的cDNA文库,为快速筛选和研究匍枝根霉相关关键基因提供了基础.研究采用CHROM SPIN柱回收大于500bp的cDNA并连接pUCm-T载体,成功构建了匍枝根霉cDNA文库.鉴定结果显示：文库库容为1.95×10^6 cfu,文库滴度为7.84×10^6 cfu/mL,该文库中cDNA片段大小分布在500~4 000bp,文库重组率为96%.
- 李祥林汤斌李松
- 关键词：匍枝根霉CDNA文库
- 匍枝根霉纤维素酶发酵条件优化及分批发酵动力学模型的构建被引量：8
- 2014年
- 以滤纸酶活为检测指标,通过单因素实验和均实验设计优化匍枝根霉产纤维素酶培养条件,并以此为基础进行分批发酵,并利用Logistic方程和Luedeking-Piret方程构建动力学模型。优化结果表明:滤纸酶活在发酵时间为84 h时达到13.16 IU/mL,比优化前提高了149%,其中,内切酶活、外切酶活和β-葡萄糖苷酶活高值分别为45.81 IU/mL、0.537 IU/mL和12.45 IU/mL且所建模型拟合良好。
- 汤斌许钟源李松陈涛
- 关键词：匍枝根霉纤维素酶发酵优化动力学模型
- 匍枝根霉组成型内切葡聚糖酶基因的筛选和表达
- 2014年
- 从匍枝根霉cDNA文库中筛选得到组成型内切葡聚糖酶基因(zeg1和zeg2),经比对zeg1和zeg2相似度为86%,有相似的催化活性区域,经CDD(保守序列数据库)分析,该蛋白归属于糖苷水解酶第5家族,对比PDB(蛋白结构数据库)中第五家族的关键催化残基,预测该两个蛋白的第147位的谷氨酸(E)及199位的色氨酸(W)为该蛋白的关键催化残基。重组zeg1发酵至20 h时达到最高酶活为0.422 IU/mL;重组zeg2发酵至24 h达到最高酶活为0.509 IU/mL。酶学性质研究表明重组zeg1和zeg2的最适温度均为50℃,最适pH值均为5.0。通过CMC-SDSPAGE电泳,复性后染色,测得重组zeg1和zeg2的分子量分别约为55 kD和58 kD。
- 董玉稳汤斌李松张莹莹李祥林
- 关键词：匍枝根霉组成型异源表达
