国家教育部博士点基金(20070487007)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 人XAF1基因启动子的克隆及其在人肝癌细胞株中活性的测定被引量：1
- 2009年
- 目的分析XAF1基因启动子在肝癌细胞株中的活性,为研究XAF1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法从肝癌细胞株中扩增XAF1基因的1 395 bp启动区域片段并分别克隆到报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,分别将含有XAF1基因启动子的报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,检测萤火虫荧光素酶的活性并观察绿色荧光蛋白的表达。通过转染细胞、荧光素酶活性测定及观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果重组的质粒经双酶切和测序结果证实克隆的XAF1启动子片段序列正确;转染后的HepG2、SMMC7721荧光素酶相对发光强度分别是6.97±0.74、6.12±0.59。其绿色荧光蛋白强度明显低于对照组。结论本实验构建的含XAF1启动子的报告基因质粒为研究XAF1基因的转录调控提供实验依据。
- 陈琼余琴汪志军里进胡晓文王晶常莹林菊生
- 关键词：基因XAF1启动区转录调控
- 5-Aza-CdR对人肝癌细胞株SMMC7721生长及XAF1基因启动子异常甲基化的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响以及对具有促凋亡作用的X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子1(XAF1)的基因表达和甲基化的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞后,RT-PCR法检测XAF1 mRNA的变化,MSP检测XAF1基因甲基化的变化,用MTT法检测5-Aza-CdR对SMMC7721细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测其对SMMC7721细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率的影响。结果经过5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理后,RT-PCR检测显示,SMMC7721中XAF1mRNA表达比对照组增加,差异有统计学意义(分别是P=0.034,P=0.002)。MSP检测结果XAF1的甲基化得到了逆转。用1、5、10μmol/L的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞24、48、72 h后,MTT检测到细胞的生长受到抑制,且呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率均明显增加,5、10μmol/L组细胞凋亡率分别为(7.23±0.92)%、(12.62±1.30)%,与对照组(3.53±0.40)%相比差异有统计学意义(分别是P=0.013,P=0.001)。其细胞周期阻滞于S期。结论5-Aza-CdR抑制SMMC7721细胞的生长,使XAF1基因异常甲基化状态得到逆转,XAF1基因转录水平上调,为其应用于肝癌治疗提供了实验依据。
- 陈琼林菊生常莹余琴里进胡晓文王晶
- 关键词：甲基化
- I-Sce I系统的建立及其在诱导肝癌细胞DNA双链断裂中的应用
- 2008年
- 目的建立I—Sce I系统并应用该系统制备DNA双链断裂（DSB）的HepG2细胞模型，为进一步研究DSB与HBVDNA整合奠定基础。方法通过分子克隆技术构建携带I—Sce I内切酶识别序列的pEGFP。真核表达载体，并将其转染入肝癌细胞株HepG2，经G418筛选出稳定转染株，随后瞬时转染表达归位内切酶I—Sce I的质粒pCMV-3NSL-I-Sce I。24h后采用免疫荧光法和Western blot检测DNA双链损伤效应分子Y—H2AX的表达，了解DSB情况。结果酶切鉴定和测序证实pEGFP。构建成功；I-Sce I系统引入后HepG2细胞中的γ-H2AX表达明显上调，提示DSB细胞模型构建成功。结论I-Sce I系统能够成功地诱导HepG2细胞株基因组发生DSB，该系统有望为进一步探讨DSB是否为HBV整合的潜在靶位提供有效的研究工具。
- 任精华何文山林菊生张强何星星陈琼刘瑶徐冬
