重庆市科委地方病重大专项基金(2008AB5008)
- 作品数：12 被引量：37H指数：5
- 相关作者：李文桂张宁谭建蓉覃婷蔡世飞更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆三峡中心医院更多>>
- 发文基金：重庆市科委地方病重大专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组两歧双歧杆菌疫苗的构建、鉴定、表达及其免疫保护力研究被引量：3
- 2019年
- 目的 构建铜绿假单胞菌重组(r)两歧双歧杆菌(Bb)疫苗,研究疫苗免疫后铜绿假单胞菌攻击小鼠的免疫保护力。 方法 将PCR扩增的铜绿假单胞菌重组外膜蛋白H(OprH)基因克隆至载体pGEX-1λT,电穿孔转化两歧双歧杆菌,得到rBb-pGEX-OprH疫苗。将疫苗进行PCR鉴定,再以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,并行蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定。将21只BALB/c小鼠按照随机数字表法分为rBb-pGEX-OprH疫苗组(简称疫苗组)、空载体组和Bb对照组(每组7只),分别用rBb-pGEX-OprH、rBb-pGEX-1λT或Bb行灌胃免疫,每天1次,连续3 d,持续3周,于首次免疫后4周以5 ×10^7菌簇形成单位(CFU)铜绿假单胞菌滴鼻攻击,每天1次,连续3 d。攻击2周后处死小鼠,计数肺细菌负荷。另于免疫前、首次免疫后4周、攻击感染后2周取静脉血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠血清IgG水平。 结果 PCR扩增出660 bp的OprH基因;PCR鉴定显示,rBb-pGEX-OprH疫苗构建成功;SDS-PAGE证实,重组疫苗可表达相对分子质量为47 ×10^3的融合蛋白,与预期结果一致;Western blot结果显示,表达蛋白可被铜绿假单胞菌感染的小鼠血清识别。3组小鼠肺细菌菌落数比较差异有统计学意义(F = 1 506.793,P < 0.05),疫苗组肺细菌菌落数[(7.691 ± 0.069)lgCFU/g]低于空载体组[(8.855 ± 0.027)lgCFU/g]和Bb对照组[(8.958 ± 0.037)lgCFU/g,P均< 0.05]。疫苗免疫后4周,3组小鼠血清IgG水平比较差异有统计学意义(F = 77.216,P < 0.05),其中疫苗组血清IgG水平(0.078 ± 0.005)明显高于空载体组(0.054 ± 0.004)和Bb对照组(0.052 ± 0.004,P均< 0.05)。 结论 铜绿假单胞菌rBb-pGEX-OprH疫苗构建成功,且可诱导小鼠产生一定的保护力。
- 江帆李文桂刘潇
- 关键词：铜绿假单胞菌二裂菌属双歧杆菌属疫苗
- 铜绿假单胞菌重组Ef(pGEX-PopB)疫苗构建及其免疫机制的研究
- 目的 构建屎肠球菌介导的铜绿假单胞菌脯氨酰寡肽酶B（PopB）疫苗，初步探讨其对小鼠的保护性免疫机制。 方法 以铜绿假单胞菌PA01株DNA为模板，PCR扩增获得PopB基因，插入pGEX-1λT得pGEX-Pop...
- 何爱琳
- 关键词：铜绿假单胞菌免疫机制屎肠球菌保护性免疫应答
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌重组Bb-OprH疫苗诱导的保护力及体液免疫应答被引量：2
- 2019年
- 目的用重组Bb-OprH疫苗免疫小鼠,观察其对小鼠的保护力及诱导的体液免疫应答情况。 方法将重组疫苗经口灌胃接种BALB/c小鼠,1次/d,每周3d,连续3周。于首次免疫后第4周以5×10^7 CFU的铜绿假单胞菌PAO1株对小鼠滴鼻攻击,1次/d,连续3d,攻击后2周处死小鼠,计数小鼠肺细胞负荷。于免疫前、首次免疫后4周尾静脉采血,于攻击后2周眼球取血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE。 结果疫苗免疫及PAO1株攻击后,小鼠肺细菌负荷减少(F=1 506.793,P<0.05);初免后4周,小鼠血清抗体IgG、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE明显升高(0.078±0.005、0.010±0.002、0.038±0.004、0.029±0.002和0.027±0.003,P<0.05),较空载体组和Bb对照组差异有显著性(P<0.05);攻击后2周,小鼠血清抗体IgG、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE再次升高(0.118±0.010、0.018±0.001、0.068±0.013、0.032±0.003和0.041±0.004,P<0.05),较空载体组和Bb对照组差异有显著性(P<0.05)。 结论铜绿假单胞菌重组Bb-OprH疫苗可诱导铜绿假单胞菌感染小鼠产生保护性体液免疫应答。
- 江帆李文桂
- 关键词：铜绿假单胞菌疫苗体液免疫应答
- 日本血吸虫重组两歧双歧杆菌疫苗的构建及其表达被引量：5
- 2017年
- 目的构建及鉴定日本血吸虫（Sj）重组两歧双歧杆菌（Bb）疫苗[Bb（pGEX—Sj26GST—Sj14-3-3）]，并研究融合基因Sj26GST—Sj14—3—3在Bb中的表达情况。方法将重组质粒pGEX—Sj26GST—Sj14-3-3电转化至Bb中，构建重组Bb（pGEX—SjZ6GST-Sj14-3—3）疫苗，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达。采用双酶切和聚合酶链式反应（PCR）鉴定重组Bb（pGEX—Sj26GST-Sj14—3—3）疫苗，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和蛋白免疫印迹法对表达产物进行鉴定。结果双酶切及PCR证实重组质粒pGEX—SjZ6GST—Si14—3—3成功转入Bb中。SDS—PAGE鉴定结果显示，诱导表达产物是相对分子质量约为67×10^3的重组蛋白，与预期结果相符。蛋13免疫印迹法鉴定结果显示，重组蛋白能被Sj感染的兔血清所识别。结论成功构建Sj重组Bb（pGEX—Sj26GST-Sj14-3—3）疫苗，Rb可表达具有特异抗原性的Sj26GST—Sj14—3．3重组蛋白。
- 罗广旭李文桂覃婷
- 关键词：融合基因两歧双歧杆菌疫苗
- 铜绿假单胞菌重组Bb--OprH疫苗的构建及其免疫机制的初步研究
- 目的 构建铜绿假单胞菌重组Bb-OprH疫苗，研究疫苗免疫BALB/c鼠及PAO1株攻击后诱导的保护力及其免疫机制。 方法 将PCR扩增的OprH基因克隆到pGEX-1λT中，得到重组质粒pGEX-OprH;pGE...
- 江帆
- 关键词：铜绿假单胞菌免疫机制
- 日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj14-3-3-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的构建日本血吸虫重组质粒pGEX—Sjl4—3—3-Sj32，探讨重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达。方法以重庆医科大学附属第-医院传染病寄生虫病研究所保存的质粒pGEX—sj14—3-3和pET28ct。Si32为模板，通过PCR扩增Sil4—3-3和Si32抗原编码基因，然后采用基因拼接法（geneSOEing）剪接Sil4-3-3和Sj32基因，得到Sjl4-3-3-Sj32融合基因。定向克隆人穿梭载体pGEX-1kT，构建重组质粒pGEX-Sjl4-33Sj32，并采用双酶切法进行验证。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基硫代-B-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达后，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质免疫印迹（Westernblot）法对表达产物进行分析鉴定。结果基因拼接法得到约1750bp的Sjl4—3—3-Sj32融合基因；双酶切证实sj14-3-3-Sj32融合基因成功插入pGEX-1kT载体中；SDS—PAGE分析显示，表达产物为相对分子质量约为73×100的重组蛋白；Westernblot显示，重组蛋白可被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建日本血吸虫重组质粒pGEX—sj14-33Sj32，该重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中得到了高效融合表达，且表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
- 覃婷李文桂谭建蓉
- 关键词：血吸虫质粒大肠埃希菌
- 日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（pGEX-Sj32）疫苗构建及鉴定被引量：6
- 2015年
- 目的 构建和鉴定日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum,Bb）pGEX-Sj32疫苗.方法 从重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所构建的重组大肠埃希菌BL21 （pET28α-Sj32）中抽提质粒pET28α-Sj32,通过PCR扩增Sj32抗原编码基因;将Sj32基因定向克隆至大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-Sj32,将该重组质粒转化至大肠埃希菌BL21感受态细胞（DE3）,抽提质粒后进行双酶切鉴定;采用电穿孔法,将重组质粒pGEX-Sj32转化至Bb,构建Bb（pGEX-Sj32）疫苗,再从该疫苗中抽提重组质粒pGEX-Sj32,以其为模板进行PCR鉴定.结果 从抽提质粒pET28α-Sj32中PCR扩增出长度约为1 270 bp的Sj32基因片段;重组质粒pGEX-Sj32经双酶切鉴定,获得长度为4 947 bp的载体片段和长度为1 270 bp的Sj32基因片段;以抽提的疫苗质粒pGEX-Sj32为模板进行PCR扩增,得到了长度约为1 270 bp的Sj32基因片段,与预期结果相符.结论 成功构建了日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗.
- 谭建蓉李文桂张丽
- 关键词：两歧双歧杆菌疫苗
- 铜绿假单胞菌重组Ef-LasR疫苗的构建、鉴定及表达被引量：5
- 2021年
- 目的构建以粪肠球菌为载体的铜绿假单胞菌重组Ef-LasR疫苗,并研究其表达效率。方法采用PCR扩增铜绿假单胞菌标准株PA01的LasR基因,然后克隆至pGEX-1λT载体,构建重组质粒pGEX-LasR。将重组质粒电穿孔转化感受态粪肠球菌构建重组Ef-LasR疫苗,抽提质粒进行PCR和双酶切鉴定。重组疫苗用IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果PCR扩增出717 bp的LasR基因;双酶切和PCR证实重组疫苗(rEf-LasR)构建正确;SDS-PAGE显示rEf-LasR能够高效表达分子质量单位为53 ku的目的蛋白,Western blot显示该蛋白能被铜绿假单胞菌感染的鼠血清识别。结论成功构建了重组Ef-LasR疫苗,其表达产物具有反应原性,为铜绿假单胞菌疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 欧兴坤李文桂
- 关键词：铜绿假单胞菌疫苗
- 铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX--OprF--I)疫苗构建及其免疫机制的研究
- 目的: 构建两歧双歧杆菌介导的铜绿假单胞菌外膜蛋白F-I疫苗，研究其对小鼠的保护力及免疫机制。 方法: 以铜绿假单胞菌PA01标准株提取的基因组DNA为模板，PCR分别扩增OprF和OprI抗原基因，通过基因拼接法...
- 梁诚诚
- 关键词：铜绿假单胞菌保护力
- 文献传递
- 日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗诱导BALB/c小鼠免疫应答的动态研究
- 血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,研制疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一,本研究将日本血吸虫重组Bb(p GEX-Sj26GST)疫苗经口服和鼻腔黏膜两种途径免疫小鼠,观察免疫后不同时间点脾细胞增殖、亚...
- 李文桂覃婷
- 关键词：日本血吸虫免疫应答
- 文献传递
