上海市自然科学基金(09ZR1438600)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所安徽农业大学宿州职业技术学院更多>>
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- 鸭疫里氏杆菌转座子随机突变库的构建被引量：2
- 2014年
- 通过接合转导的方法构建鸭疫里氏杆菌Yb2和CH3株的Tn4351转座子突变库,以便筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的功能基因。先将携带质粒pEP4351(含Tn4351转座子序列)的大肠杆菌BW19851(pEP4351)作为供体,与受体菌鸭疫里氏杆菌强毒株Yb2或CH3株进行接合转导,使质粒pEP4351导入Yb2或CH3株细菌内,进而转座子Tn4351随机插入鸭疫里氏杆菌的基因组中,然后用含红霉素和卡那霉素的胰酶大豆琼脂平板进行阳性接合子的筛选。用PCR扩增鸭疫里氏杆菌16S rRNA基因和红霉素抗性基因EmF进行转座子插入突变株的鉴定,最终成功地构建了鸭疫里氏杆菌Yb2株和CH3株各包含3 100株和2 520株突变株的Tn4351转座子随机突变库,接合转导效率分别为1.7×10-6和3.9×10-6。转座子随机突变库的构建为下一步根据突变株表型的变异来筛选和鉴定鸭疫里氏杆菌的毒力相关等基因奠定了基础。
- 倪欣涛卢凤英苗双朱寅玉邢林林俞慧祁晶晶王桂军胡青海
- 关键词：鸭疫里氏杆菌
- 血清10型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制被引量：5
- 2012年
- 鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）感染是主要危害2~8周龄雏鸭的高致病性细菌性传染病。为研制血清10型RA灭活油乳剂疫苗,选取10株血清10型RA分离株进行动物体复壮、分离和鉴定后,分别对部分毒株进行了毒力测定和灭活油乳剂疫苗的研制。结果表明,所有试验用分离株对7日龄雏鸭均具有较强的致病力。分离株YXL1和HXb2的半数致死量分别为2.8×108 cfu和82 cfu,不同菌株之间的毒力差异很大。用研制的灭活油乳剂疫苗对雏鸭进行2次免疫后,免疫鸭可获得高水平的特异性抗体,并可抵抗强毒RA的攻击,以HXb2免疫后的攻毒保护性最好。抗体水平检测和攻毒保护试验结果表明,用血清10型RA分离株HXb2制备的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护作用。
- 王小兰刘蕾刘海文苗双胡青海韩先干丁铲于圣青
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗酶联免疫吸附试验攻毒保护
- 鸭疫里默氏杆菌血凝素基因的克隆、表达及其蛋白的定位分析
- 2012年
- 为研究鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer)血凝素蛋白的功能,本实验克隆表达了鸭疫里默氏杆菌血凝素基因,并对其蛋白定位进行了分析。根据鸭疫里默氏杆菌CH3株血凝素基因序列设计一对特异性引物,采用PCR扩增不同血清型鸭疫里默氏杆菌的血凝素基因,进行序列测定与分析。结果表明其血凝素基因全长1 059 bp,编码352个氨基酸。不同血清型鸭疫里默氏杆菌血凝素间的氨基酸同源性为94.1%～100%,与黄杆菌3519-10株血凝素的氨基酸同源性为68.0%～68.9%。采用表达的血凝素蛋白免疫鼠血清和鸭抗鸭疫里默氏杆菌阳性血清对血凝素在细菌中的定位分析表明,鸭疫里默氏杆菌血凝素可能不是一种膜蛋白,而是存在于胞浆中的一种蛋白。
- 屠晶胡青海于圣青丁铲韩先干朱寅玉王小兰苗双卢凤英
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌血凝素原核表达
- 一株鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的鉴定被引量：5
- 2013年
- 从病死鸭肝中分离到1株革兰氏阴性细菌WX1株,经形态学特征观察和16SrRNA基因、DnaB基因检测,鉴定为鸭疫里默氏杆菌;经玻片凝集试验鉴定为血清1型。WX1株对10日龄樱桃谷鸭的半数致死量大于1010 CFU,接种樱桃谷鸭后,只在接种后第12小时能从血液中分离到少量接种菌,表明WX1株为一株自然弱毒株。WX1株的OmpA序列测定及分析结果显示,其氨基酸同源性及其蛋白质分子质量大小与不同血清型的鸭疫里默氏杆菌强毒株存在一定的差异。
- 苗双卢凤英屠晶倪欣涛胡青海
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株
- 不同鸭疫里默氏杆菌菌株携带生物被膜形成相关基因的分析被引量：3
- 2014年
- 为筛选鸭疫里默氏杆菌(RA)生物被膜形成过程中的关键基因,本研究先采用PCR检测了10个生物被膜形成相关基因在生物被膜形成强、弱和无的菌株中的分布,根据试验结果,比较了CH3株在置玻璃试管和12孔聚乙烯板中培养时5个生物被膜形成相关基因在转录水平上的差异。结果表明,21株RA中强、弱和无生物被膜形成的菌株分别占28.57%(6/21)、23.81%(5/21)和47.61%(10/21);这些RA菌株均携带asrpdp(Riean_0487)、dhdps(Riean_0023)、ftsQ(Riean_1039)和hthdp(Riean_0339)4个基因;而大部分生物被膜形成能力弱的菌株和不形成生物被膜的菌株不携带aminopeptidase N(Riean_0186)和hp1(JN986833)基因。Real-time PCR结果表明,CH3株在24孔板中培养至生物被膜形成初期(10 h)比同时在玻璃试管中静置培养时,细菌的aminopeptidase N、hthdp和dhdps基因mRNA转录水平分别升高62.1%、102.3%和62.5%。本研究为进一步解析RA生物被膜形成的分子机制等奠定基础。
- 来景辉卢凤英苗双倪欣涛愈慧邢林林姜盼于圣青祁晶晶胡青海
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌生物被膜实时定量PCR
- 鸭疫里默氏杆菌TonB依赖性受体TbdR2基因缺失株的构建被引量：2
- 2013年
- 用PCR方法扩增tbdR2基因的左右臂和壮观霉素抗性基因表达盒,然后将以上3个片段组成的同源重组同源臂LSR连接到自杀性质粒pDS132上,构建得到重组自杀质粒pDS-TbdR2-LSR。再将此质粒通过接合转导的方法导入到鸭疫里默氏杆菌CH3株。用含卡那霉素和壮观霉素的TSA筛选可能的基因缺失株,并对其进行PCR鉴定,获得基因缺失株CH3△tbdR2。CH3△tbdR2稳定性检测结果表明该缺失株能够稳定存在。另外,CH3△tbdR2突变株在电镜下的细菌形态以及在TSA培养基上的菌落形态与野生株CH3相似。表明通过自杀质粒同源重组的方法获得了鸭疫里默氏杆菌CH3株TonB依赖受体TbdR2的基因缺失株CH3△tbdR2,为下一步研究TbdR2的功能奠定了基础。
- 卢凤英苗双倪欣涛屠晶俞慧姜盼潘玲胡青海
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌缺失突变株
