吉林省科技发展计划基金(20010421)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王虹张辛艳段琼郭兆标王津更多>>
- 相关机构：吉林省人民医院吉林大学第一医院甘肃农业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- ELISA检测杜克雷嗜血杆菌方法的实验室评估被引量：1
- 2008年
- 软下疳（Chancroid）为一种经典性传播疾病，由杜克雷嗜血杆菌（H .ducreyi，简称杜克雷菌）引起。临床主要表现为生殖器疼痛性溃疡，合并附近淋巴结化脓性病变。杜克雷菌由于缺乏亚铁血红素生物合成途径，是一个营养要求苛刻、难于培养的细菌。初次分离培养常需2～3d。另外，由于杜克雷菌生化特性相对不活泼，在标准的生化培养基中不能生长，因此传统的生化鉴定就成为问题。
- 王虹张辛艳王津姚伟郭兆标段琼杨瑞馥
- 关键词：杜克雷嗜血杆菌ELISA检测生物合成途径生化特性性传播疾病
- 杜克雷嗜血杆菌血红蛋白受体和其部分蛋白片段的表达纯化及其多克隆抗体建立ELISA检测杜克雷嗜血杆菌的初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的:制备纯化杜克雷嗜血杆菌血红蛋白受体(HgbA)及其部分蛋白片段(HgbAF),免疫家兔获得rHgbA和rHgbAF特异性多克隆抗体,用于临床软下疳病原学诊断。方法:采用分子生物学技术克隆HgbA和HgbAF基因,诱导表达并纯化rHgbA和rHgbAF;用rHgbA和rHgbAF免疫家兔制备多克隆抗体,采用Western blot和ELISA方法测定抗体免疫活性;建立杜克雷嗜血杆菌HgbA双抗体夹心ELISA检测系统,对其敏感性、特异性进行初步评价。结果:成功克隆了目的基因,经诱导表达获得纯化杜克雷嗜血杆菌rHgbA及其部分重组蛋白片段;免疫家兔获得rHgbA和rHgbAF特异性抗血清,经饱和硫酸氨盐析后,Western blot实验结果显示其能与rHgbA和rHgbAF特异性结合;建立的杜克雷嗜血杆菌HgbA双抗体夹心ELISA,对杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌及其他7种生殖器溃疡相关的细菌进行检测,发现除杜克雷嗜血杆菌呈现强阳性反应外,其余8种菌均为阴性结果,无交叉反应发生;上述ELISA检测纯化rHgbA灵敏度为1.56 ng/ml,杜克雷嗜血杆菌检测灵敏度为2×105cfu/ml,脓汁模拟样本中杜克雷嗜血杆菌检测的灵敏度为1×106cfu/ml。结论:成功制备了杜克雷嗜血杆菌血红蛋白受体及其部分蛋白片段,免疫家兔所获得的多克隆抗体能与杜克雷嗜血杆菌特异性结合,而与流感嗜血杆菌及其他7种生殖器溃疡相关的细菌无交叉反应,表明建立的ELISA具有较好的特异性。上述ELISA检测方法的敏感性水平不能满足临床所有标本中杜克雷嗜血杆菌的检测,有待于进一步提高,但该方法的建立具有潜在临床应用价值。
- 王虹张辛艳费军伟王津姚伟郭兆标段琼杨瑞馥
- 关键词：杜克雷嗜血杆菌软下疳
- 应用胶体金免疫层析技术快速检测杜克雷嗜血杆菌方法的建立
- 2009年
- 目的建立快速检测杜克雷嗜血杆菌的胶体金免疫层析试验(GICA)系统。方法采用胶体金颗粒标记抗rHgbA-IgG抗体,制备出免疫胶体金;采用双抗体夹心模式建立适用于杜克雷嗜血杆菌检测的胶体金免疫层析技术;以ELISA试验作为平行对照,对其检测的灵敏度及特异性进行评价。结果以该方法检测杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌以及其他7种生殖器溃疡相关细菌,杜克雷嗜血杆菌显示强阳性,其余8种均为阴性,无交叉反应发生,GICA与ELISA实验结果相符合;GICA和ELISA检测灵敏度分别为:纯化抗原实验GICA为6.25ng/mL,ELISA为1.56ng/mL;细菌学实验GICA为2×106cfu/mL,ELISA为2×105cfu/mL;模拟样本检测实验GICA为1×107cfu/mL,ELISA为1×106cfu/mL。GICA能在15min内完成检测,稳定性良好。结论建立的检测杜克雷嗜血杆菌的GICA系统能够特异、快速检测杜克雷嗜血杆菌。该检测系统的灵敏度还不能满足所有临床标本的需要,有待于进一步研究。
- 王虹张辛艳段琼刘兵冯丹红
- 关键词：杜克雷嗜血杆菌软下疳
