国家自然科学基金(81270523)
- 作品数：11 被引量：24H指数：3
- 相关作者：陈平刘孟刚李光耀付航玮赵晓彪更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院中国人民解放军中国科学技术大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝细胞性肝癌相关miRNA的筛选和鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的检测正常肝细胞与肝癌细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达差异,探讨其参与肝癌发病的可能机制。方法首先利用miRNA微阵列试剂盒,以正常肝细胞株L02为对照,筛选出肝癌细胞株HepG2中差异表达的miRNA,然后采用定量RT-PCR以及另外1株肝癌细胞株Huh7对筛选结果进行验证,最后选取肝癌细胞特异性的miRNA,运用生物信息学技术对其靶基因进行预测,并对其靶基因功能进行分类。结果发现9种表达下调的miRNA,分别为let-7a、miR-10a、miR-107、miR-124a、miR-132、miR-133a、miR-154、miR-302c、miR-373。靶基因预测结果显示其主要参与了19种生物学事件,且大部分生物学事件与肿瘤的发病机制有关。结论发现肝癌细胞中9种表达下调的miRNA,且其潜在靶基因参与的生物学事件中的大部分与肿瘤的发病机制有关。
- 沈雁兵马德宾邹丽云谢谆怡万瑛陈平
- 关键词：肝细胞性肝癌MICRORNA表达谱
- 大鼠Tmub1基因过表达慢病毒载体的构建被引量：3
- 2016年
- 目的构建Tmubl基因的过表达慢病毒载体（LV—Tmubl），为研究Tmubl蛋白在肝细胞增殖过程中的作用提供实验材料。方法化学合成Tmubl基因序列，用BamHI／AgeI酶切化学合成含有目的基因的质粒及GV287载体，PCR产物连接入线性化表达的载体。PCR鉴定引物，再对PCR鉴定阳性的克隆进行DNA测序和比对分析。使用构建的LV—Tmnbl，转染293T细胞，荧光法检测构建的慢病毒滴度。结果成功构建了LV-Tmubl，并获得相应的病毒，病毒滴度为2×10^8TU／mL。结论LV-Tmubl为进一步研究Tmubl蛋白在肝细胞增殖中的作用提供了实验基础。
- 赵晓彪李光耀刘孟刚范霞陈平
- 关键词：基因
- Tmub1对再生肝细胞有丝分裂的影响及其机制被引量：1
- 2017年
- 目的探讨Tmub1对再生肝细胞有丝分裂的影响及与securin的相互作用机制。方法使用40只雌性SD大鼠建立肝大部分切除术后肝再生模型,于术后0、6、12、24、48、72、96、168 h分别取再生肝组织,RT-qPCR和Western blot检测Tmub1和securin在肝再生过程中的mRNA与蛋白表达变化趋势。在大鼠正常肝细胞系BRL-3A中分别建立慢病毒稳定过表达Tmub1、干扰Tmub1和阴性对照组细胞株,用诺考达唑处理获取同步于有丝分裂期的细胞,免疫荧光观察Tmub1过表达组和阴性对照组细胞有丝分裂情况,并用免疫沉淀和Western blot检测Tmub1过表达、Tmub1干扰和阴性对照组BRL-3A细胞中securin的泛素化水平。结果 Tmub1的mRNA和蛋白水平在肝切除术后24、48 h最高,securin的mRNA水平也在48 h最高,而蛋白水平在48 h最低。Tmub1过表达可影响大鼠肝细胞有丝分裂,且securin泛素化水平显著低于阴性对照组(P<0.01);Tmub1干扰组securin泛素化水平显著高于阴性对照组(P<0.01)。结论 Tmub1可通过抑制securin的泛素化影响大鼠再生肝细胞的有丝分裂。
- 付航玮陈健许建华李光耀陈平
- 关键词：肝再生细胞增殖细胞周期泛素化
- 泛素连接酶APC/C参与的泛素化与细胞周期调节被引量：4
- 2017年
- 后期促进复合物/细胞周期体(anaphase-promoting complex/cyclosome,APC/C)是一个多功能的泛素连接酶,参与细胞周期、代谢、DNA损伤修复、细胞自噬、凋亡、衰老及肿瘤发生等多种生物学过程。泛素化作为一种重要的翻译后修饰,可通过泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)调控蛋白质的降解。APC/C的分子量巨大,由多个亚基组成,在细胞周期调控中具有重要地位,可以通过介导细胞周期相关蛋白质的泛素化降解从而精确调控细胞周期的转换,并受共激活分子CDC20或CDH1的调控。了解APC/C的结构和功能,对于研究细胞周期及蛋白质翻译后修饰等生物学事件至关重要。近年,对APC/C分子结构和组成的解析工作取得了极大的进展,其在肿瘤中的作用及潜在的治疗应用也受到了关注。本文将着重对APC/C的组成和结构、参与泛素化的具体过程、在细胞周期中的调控和被调控机制以及参与肿瘤生成的最新研究进展进行综述。
- 付航玮钟浩陈平
- 关键词：泛素化细胞周期翻译后修饰
- STAT3在肝细胞增殖过程中对C/ebpβ表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨STAT3在IL-6刺激肝细胞增殖过程中对C/ebpβ表达变化的影响。方法用含15 ng/ml的IL-6培养基培养大鼠正常肝细胞BRL-3A,运用CCK试剂盒检测该细胞在IL-6刺激后不同时间里的增殖情况,Western blot技术检测STAT3、P-STAT3、C/ebpβ的蛋白表达变化情况;利用siRNA瞬时转染技术抑制STAT3在BRL-3A细胞中的表达并观察IL-6刺激肝细胞增殖过程中C/ebpβ的表达变化。结果 IL-6能有效的刺激肝细胞增殖,在增殖早期STAT3、P-STAT3、C/ebpβ表达均明显上调;在肝细胞增殖过程中沉默STAT3后C/ebpβ表达下调。结论在IL-6肝细胞增殖过程中STAT3对C/ebpβ起正向调控作用。
- 匡怡刘孟刚魏东陈红旭李光耀陈平
- 关键词：肝再生STAT3P-STAT3IL-6
- Tmub1过表达及沉默慢病毒载体转染对大鼠BRL-3A肝细胞增殖的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨Tmub1蛋白在肝细胞增殖中的作用。方法分别使用Tmub1沉默慢病毒载体、Tmub1过表达慢病毒载体及对应的空载体转染大鼠BRL-3A肝细胞,得到稳定转染的细胞。转染后采用Western blotting检测Tmub1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期。结果转染LV-Tmub1慢病毒的肝细胞Tmub1蛋白表达明显增加,转染LV-Tmub1-RNAi慢病毒的肝细胞Tmub1蛋白表达明显降低,与正常肝细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。转染LV-Tmub1慢病毒的肝细胞增殖最快,转染LV-Tmub1-RNAi慢病毒的肝细胞增殖最慢,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。过表达Tmub1慢病毒载体转染的肝细胞的G2+S期明显长于沉默Tmub1慢病毒载体转染的肝细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Tmub1蛋白可促进BRL-3A肝细胞的增殖。
- 赵晓彪李光耀刘孟刚范霞陈平
- 关键词：肝细胞细胞增殖慢病毒感染
- Tim-3在人肝癌细胞中的表达及其对细胞增殖与迁移能力的影响被引量：7
- 2014年
- 目的研究T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子-3(Tim-3)在人肝癌细胞系中的表达及其对肝癌细胞肿瘤生物学行为的影响。方法采用荧光实时定量PCR(FQ-PCR)和蛋白免疫印迹方法检测人正常肝细胞株L02和肝细胞肝癌(HCC)细胞株HepG2、SMMC7721中Tim-3在mRNA和蛋白质水平的表达。运用siRNA转染技术沉默Tim-3基因在HepG2细胞株中的表达,免疫印迹筛选干扰效率最高的基因片段。MTT和细胞划痕实验检测沉默Tim-3基因后对细胞增殖、迁移能力的影响。结果 FQ-PCR及免疫印迹方法检测显示,人HCC细胞株HepG2、SMMC7721中Tim-3mRNA和蛋白的表达均较正常肝细胞株L02明显增高(P<0.05)。转染Tim-3siRNA后,肝癌细胞株HepG2中Tim-3蛋白水平表达明显降低。与对照组比较,细胞的增殖、迁移能力显著下降。结论 Tim-3mRNA及蛋白水平在肝癌细胞株中表达明显升高,促进细胞的增殖、迁移。
- 魏东匡怡刘孟刚周波陈平
- 关键词：细胞增殖
- 长链非编码RNA LOC100288637在原发性肝癌中差异性表达的生物学意义及相关机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究长链非编码RNA(LncRNA)LOC100288637在肝癌中的表达差异,对肝癌细胞增殖的影响及相关机制。方法分析GEO数据集GSE58043和GSE10694,得出LOC100288637及hsa-miR-101-3p在肝癌组织中差异表达,RNA-hybrid分析LOC100288637与hsa-miR-101-3p的结合具有可能性。逆转录-聚合酶链式反应在组织和细胞水平检测LOC100288637表达量。荧光原位杂交观察LOC100288637在细胞中的定位。敲低LOC100288637后CCK-8检测细胞增殖情况。过表达hsamiR-101-3p后,检测LOC100288637的变化。结果LOC100288637在肝癌组织中的表达量高于癌旁组织(P<0.05);LOC100288637在肝癌细胞系中的表达量高于肝细胞系(P<0.05)。LOC100288637在HepG2细胞核质均有表达,以细胞质居多。敲低LOC100288637后HepG2细胞增殖活性降低(P<0.01)。过表达hsa-miR-101-3p后,LOC100288637表达量下降(P<0.05)。结论 LncRNA LOC100288637可能在肝癌发生,发展过程中起重要作用并接受hsa-miR-101-3p靶向调控影响肝癌细胞的增殖。
- 王宇洲许建华常伟华付航玮皮儒先陈健陈平
- 关键词：肝肿瘤增殖
- Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖
- 2017年
- 目的探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响。方法应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期。结果与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P<0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P<0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P<0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P<0.05)。通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P<0.05),且处于S+G2/M期的细胞比例下降(P<0.05)。结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长。
- 陈健付航玮刘孟刚陈景祥许建华王宇洲陈平
- 关键词：肝细胞增殖肝再生AKT蛋白
- Tmub1沉默对大鼠肝部分切除术后肝细胞增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨Tmub1蛋白在肝再生过程中的作用及其在肝再生过程中对Securin蛋白的影响。方法 54只大鼠随机分为3组即Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组及正常对照组,其中Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组注射相应病毒颗粒(3×107TU),对照组未行注射,2 d后行肝部分切除术(partial hepatectomy,PH),每组分为6个亚组:PH术后0、2、6、12、24、48 h,每亚组3只大鼠,术后提取原代肝细胞、留取肝脏组织标本,利用Real-time PCR和Western blot检测慢病毒干扰效果及Tmub1沉默后对Securin蛋白的影响。MTT实验、流式细胞仪检测原代肝细胞的增殖情况。结果Real-time PCR和Western blot表明实验组Tmub1 mRNA和蛋白被有效抑制;Tmub1沉默后securin mRNA表达无明显变化,而G2/M期securin蛋白量明显减少。MTT实验表明Tmub1沉默可明显上调PH术后6～24 h肝细胞的增殖速率;流式细胞分析结果显示实验组处于G2/M期的肝细胞比例明显增高。结论 Tmub1蛋白在肝再生过程中对肝细胞增殖进程发挥负向调控作用,而该作用可能与其在蛋白质水平影响了Securin的表达密切相关。
- 马德宾沈雁兵王保林陈平
- 关键词：肝再生SECURIN慢病毒体内转染
