国家自然科学基金(30528012)
- 作品数：15 被引量：55H指数：4
- 相关作者：马丁王世宣卢运萍翁丹卉王薇更多>>
- 相关机构：华中科技大学苏州大学南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划海南省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶体抑制剂联合紫杉醇对卵巢上皮性癌细胞药物敏感性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇单独作用及联合作用于卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞株SKOV3的效果，并对其诱导细胞凋亡的分子机制进行探讨。方法波替单抗与紫杉醇单独或联合（50nmol／L波替单抗、90nmol／L紫衫醇或50nmol／L波替单抗＋90nmol／L紫衫醇）作用于SKOV3细胞后，四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞增殖活性并计算细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，蛋白印迹法检测磷酸化蛋白激酶B（AKT）和磷酸化糖原合成酶激酶3B（GSK-3p）蛋白的表达水平。结果波替单抗与紫衫醇联合作用于SKOV3细胞，12、24、36、48及72h各时间点的细胞存活率分别为（65．2±5．8）％、（58．3±14．4）％、（35．3±5．0）％、（19．2±1．5）％和（11．4±2．5）％，与单用紫杉醇比较，细胞增殖抑制效果增强，各时间点分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。单用紫杉醇、单用波替单抗和两者联用的细胞凋亡率分别为（14．7±0．5）％、（15．1±0．8）％和（20．5±0．7）％，波替单抗与紫杉醇联用的细胞凋亡率明显增高，分别与单用紫杉醇或单用波替单抗比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。不同药物处理细胞后，磷酸化AKT和磷酸化GSK-3B蛋白的表达水平均有不同程度降低，以波替单抗与紫杉醇联用者降低最为明显[分别为（3．2±0．8）％、（19．3±0．4）％]，分别与单用紫杉醇、单用波替单抗、正常未处理细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇联用能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性；AKT／GSK-313信号通路可能在波替单抗与紫杉醇联用诱导细胞凋亡中发挥了重要作用。
- 翁丹卉栗妍孔繁飞范良生胡轶宋晓红邢辉王世宣马丁
- 关键词：肿瘤硼酸化物紫杉酚抗肿瘤联合化疗方案
- 人乳头瘤病毒16型E2蛋白在人肝癌细胞HpG2中诱导凋亡的研究
- 2011年
- 目的 通过真核表达载体介导人乳头瘤病毒（HPV）16型E2基因在HpG2细胞中的表达,探讨E2蛋白的促凋亡作用是否为非HPV病毒依赖性.方法 利用pcDNA3.1V5 His构建HPV16型E2基因的真核表达载体并转染HpG2细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western b1ot检测转染后E2基因mRNA和蛋白的变化,AnnexinV-FTTC/PI双染后利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡.结果 转染携带HPV16型E2质粒后,HpG2细胞可表达E2蛋白.流式细胞仪检测结果显示,转染后细胞凋亡率（21.25±5.05）%与转染空载体细胞（10.91±2.70）%和未转染细胞（7.35±0.79）%比较差异有统计学意义（P＜0.05）.激光共聚焦显微镜结果显示,转染后细胞凋亡明显增多.结论 E2蛋白可以明显诱导HPV感染无关的HepG2细胞凋亡,其凋亡作用不依赖HPV病毒.
- 栗妍王薇翁丹卉汪雯雯陶涛王世宣
- 关键词：乳头瘤病毒E2蛋白脱噬作用
- 真核表达survivin基因对曲古菌素A诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响
- 2008年
- 目的探讨survivin基因对曲古菌素A(TSA)诱导卵巢癌细胞凋亡作用的影响。方法(1)将本实验室已构建成功的survivin正义全长真核表达质粒(pcDNA3.1-survivin),经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞A2780,以转染pcDNA3.1空载体的A2780细胞为对照。(2)RT-PCR和Western blot方法分别检测survivin mRNA和蛋白质的表达。(3)MTT比色法和流式细胞仪(FACS)分别检测TSA对两组细胞存活率和凋亡率的影响。(4)Western blot检测TSA作用下A2780细胞中survivin蛋白的表达变化。结果(1)RT-PCR和Western blot检测提示转染pcDNA3.1-survivin组中survivin mRNA和蛋白质表达明显高于空载体组。(2)MTT比色法和FACS检测提示转染pcDNA3.1-survivin组细胞存活率明显高于空载体组,细胞凋亡率明显低于空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1-survivin转染后的A2780细胞对TSA的敏感性明显降低。(3)Western blot检测提示survivin的表达水平随着TSA作用时间的延长而下降。结论曲古菌素A诱导卵巢癌细胞的凋亡作用可能与survivin基因表达有关。
- 马晓黎邢辉吴鹏翁丹卉卢运萍马丁
- 关键词：SURVIVIN基因卵巢肿瘤曲古菌素A
- 三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用被引量：6
- 2008年
- 背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想。本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用。方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞。针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA。转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed。应用实时定量PCR(Real-timePCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应。结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P<0.05)。结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率。
- 翁艳洁翁丹卉夏曦宋晓红卢运萍王世宣马丁王常玉
- 关键词：RNA干扰外源基因DSRED短发卡状RNA
- 宫颈癌组织端粒酶表达与人乳头瘤病毒感染的相关性被引量：5
- 2007年
- 目的探讨宫颈癌组织中端粒酶活性表达与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法采用端粒重复序列扩增(telomere repeat amplification protocal,TRAP)-银染法对45例宫颈癌、30例慢性宫颈炎及20例正常宫颈组织的端粒酶活性进行检测。同时,采用多聚酶链反应(PCR)技术测定上述组织HPV、HPV-16型及HPV-18型的感染情况。结果宫颈癌组织端粒酶阳性率、HPV和HPV-16检出率高于慢性宫颈炎和正常宫颈组织(P<0.05);宫颈癌组端粒酶表达与HPV感染(φ=0.44,P<0.01)、HPV-16型感染(φ=0.36,P<0.05)有关联性,与HPV-18型感染未发现关联性(P>0.05)。结论端粒酶的表达、HPV感染包括HPV-16型感染与宫颈癌发生密切相关。
- 司马妮蔡丽萍朱元方王薇王世宣马丁
- 关键词：宫颈癌端粒酶人乳头瘤病毒
- 肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82和雌孕激素受体在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义被引量：1
- 2007年
- 目的探讨转移抑制基因KAI1/CD82和雌孕激素受体(ER、PR)在子宫内膜癌组织中的表达及与淋巴结转移的关系,并分析其临床意义。方法应用SP法对76例子宫内膜癌组织中KAI1、PR、ER的蛋白表达情况进行观察。结果子宫内膜癌组织中KAI1和PR的阳性表达与手术病理分期、组织学分级、肌层浸润深度呈负相关(PKAIl=0.0089、0.0103、0.0356,PPR=0.0026、0.000、0.0053);伴有盆腔淋巴结转移、宫旁或附件受累及的组织KAI1、PR、ER的阳性表达均明显低于无转移的组织(PKAIl=0.0091、0.0073,PPR=0.0006、0.0074,PER=0.0129、0.0073);ER的阳性表达与FIGO分期呈负相关(P=0.0226);不同的病理类型中,只有PR表达差异有统计学意义(P=0.0446);而三者的表达与患者年龄及宫颈是否受累均无关。KAI1、PR、ER表达阴性和阳性的生存率差异均有统计学意义(PKAIl=0.0043,PPR=0.0010,PER=0.0124)。Logistic回归模型分析结果提示:KAI1、PR、ER三个变量中只有KAI1与淋巴结转移有关(P=0.0400,OR=0.245)。COX比例风险回归模型分析结果显示:KAI1、PR、ER表达均不是子宫内膜癌的独立预后因素。结论KAI1表达与子宫内膜癌的淋巴结转移具有相关性,其可作为临床预测子宫内膜癌患者发生淋巴结转移和评估预后的综合指标之一。KAI1在子宫内膜癌发展中所起的作用可能与PR有关,KAI1、PR、ER的缺失表达与子宫内膜癌的发展、治疗及预后密切相关。
- 胡春霞翁丹卉蒋学锋朱涛李红雨金松何超蔓卢运萍王世宣马丁
- 关键词：KAIL孕酮受体
- 肿瘤转移抑制基因KAI1对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨肿瘤转移抑制基因KAI1基因对子宫内膜癌细胞(AN3CA和HEC-1-B)增殖及侵袭能力的影响。方法:脂质体介导pcDNA3-KAI1质粒转染人子宫内膜癌细胞AN3CA和HEC-1-B,采用免疫印迹法和流式细胞术检测转染前后肿瘤细胞KAI1蛋白的表达,MTT比色法、软琼脂克隆形成实验观察KAI1基因对肿瘤细胞增殖能力的影响,Transwell侵袭实验检测转染前后肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:转染pcDNA3-KAI1质粒后AN3CA和HEC-1-B细胞内和细胞表面均可检测到KAI1蛋白的稳定表达。转染空白质粒组细胞形成克隆数量多体积较大,细胞克隆形成率为(54.2±3.1)%和(52.7±4.3)%,细胞的倍增时间为21.3h和20.1h;基因转染pcDNA3-KAI1质粒组细胞形成克隆数少体积较小,细胞克隆形成率为(37.4±5.1)%和(32.1±3.7)%,细胞的倍增时间为43.7h和45.2h;两组间细胞增殖能力和克隆形成能力比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。基因转染组细胞的穿膜细胞数为(91±10.7)/HT、(68±10.8)/HT,而空质粒转染组细胞的穿膜细胞数为(292±11.5)/HT、(219+12.7)/HT,两组细胞比较,侵袭能力亦显著下降(P<0.05)。结论:外源性肿瘤转移抑制基因KAI1有效转染可使子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力均下降,KAI1可能成为子宫内膜癌转移的新治疗靶点。
- 胡春霞翁丹卉蒋学锋朱涛李红雨何超蔓卢运萍王世宣马丁
- 关键词：肿瘤转移抑制基因KAI1子宫内膜癌肿瘤侵袭增殖
- PIN1反义核酸转染抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖
- 2007年
- 目的研究利用Pin1反义核酸阻断乳腺癌MCF-7细胞中Pin1的表达,并观察其对增殖的影响。方法构建Pin1反义核酸真核表达质粒pPIN1as,用脂质体转染法将重组质粒转染MCF-7细胞,G418筛选稳定表达重组质粒的克隆,RT-PCR检测Pin1基因表达水平,Westernblot检测Pin1蛋白的表达,MTT检测细胞增殖状况。结果稳定表达Pin1反义核酸的MCF-7细胞内Pin1基因表达在mRNA水平和蛋白水平都显著降低;MTT实验显示MCF-7PINAS细胞的增殖速度较MCF-7细胞明显减慢(P<0.05)。结论阻断Pin1可以显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖活性,这为乳腺癌的基因研究及治疗提供了新思路。
- 胡春霞周金华朱涛卢运萍王世宣马丁
- 关键词：PIN1反义核酸乳腺癌
- 硼替佐米联合顺铂对卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞化疗敏感性的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 研究蛋白酶体抑制剂--硼替佐米联合顺铂作用于卵巢上皮性癌（卵巢癌）顺铂耐药细胞的效果,并探讨其诱导细胞凋亡的分子学机制.方法 实验分组：硼替佐米（50 nmol/L）＋顺铂（40μmol/L）、硼替佐米（50 nmol/L）、顺铂（40 μmol/L）、对照组（未加药物）,以未加药物和细胞,仅加培养基为空白对照（空白组）.采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定各组卵巢癌顺铂耐药细胞株C13细胞培养不同时间（12、24、36、48、60及72 h）后的增殖活性（以细胞存活率表示）,膜联蛋白-碘化丙啶双染色法流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;并采用蛋白印迹法检测各组细胞内凋亡抑制蛋白短亚型（cFLIPs）蛋白的表达水平,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8（caspase-8）活性检测试剂盒检测各组细胞内caspase-8的活性.结果 硼替佐米＋顺铂组细胞显示较好的抑制效果,作用12、24、36、48、60及72 h时其细胞存活率分别为（56.0±8.4）%、（44.7±7.3）%、（33.7±11.2）%、（27.6±8.0）%、（27.6±7.6）%和（28.1±2.4）%,均明显低于顺铂组各时间点（P〈0.05）.作用24 h时,顺铂、硼替佐米、硼替佐米＋顺铂组细胞凋亡率分别为（16.7±l.7）%、（23.4±2.1）%和（26.9±1.6）%,硼替佐米＋顺铂组明显高于顺铂或硼替佐米组（P〈0.05）.各药物处理组细胞内cFLIPs蛋白表达水平均不同程度下降,以硼替佐米＋顺铂组[（43.2±2.3）%]降低最为明显,分别与顺铂、硼替佐米组[分别为（75.7±3.0）%、（67.9±2.1）%]比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.顺铂、硼替佐米和硼替佐米＋顺铂组细胞内caspase-8活性分别为2.3±1.0、4.2±0.9和5.6±1.6,两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论 蛋白酶体抑制剂--硼替佐米联合顺铂能增强卵巢癌顺铂耐药细胞的化疗敏感性;由药物作用后cFLIPs表达的降低和caspase-8活性的增强推测。
- 粟妍翁丹卉孔繁飞范良生胡轶宋晓红邢辉王薇马丁王世宣
- 关键词：蛋白酶抑制药硼酸化物顺铂抗肿瘤联合化疗方案
- 曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡反义cDNA文库的构建和效应基因的初步筛选被引量：2
- 2009年
- 目的构建曲占霉素A诱导人乳腺癌细胞凋亡反义cDNA文库，以筛选曲古霉素A抗肿瘤的效应基因。方法收集经曲古霉素A处理不同时间点的人乳腺癌细胞MCF-7，提取poly（A）^＋RNA，将逆转录合成的cDNA反向插入载体PCEP4中以构建反义cDNA文库。文库DNA随机转入人宫颈癌细胞HeLa中，以转染PCEP4空载体细胞为对照组，用200nmol／L曲古霉素A和200μg／ml潮霉素同时筛选，至对照组细胞全部死亡，文库组仍有存活细胞时停止曲古霉素A筛选。存活克隆扩增后提取Hirt DNA并转化感受态细胞，获得的转化克隆扩增后进行酶切鉴定并测序，得到多个EST片段，经生物信息学分析后选择感兴趣的EST片段进行初步功能验证。结果构建的反义cDNA文库含有2×10^6重组子，重组效率〉90％；经DNA测序和生物信息学分析提示第27号存活克隆是锌转运蛋白LIV1，该克隆在功能验证时表现出对曲古霉素A非常显著的抵抗效应。结论构建的反cDNA文库容量较大，质量较高；基因LIV1可能是曲古霉素A抗肿瘤的效应基因之一。
- 马晓黎王蓓蓓吴鹏卢运萍周剑锋马丁
- 关键词：乳腺肿瘤反义核酸技术CDNA文库曲古霉素A
