江苏省自然科学基金(BK2010537)
- 作品数：4 被引量：9H指数：1
- 相关作者：朱函坪姚苹苹张云谢荣辉徐芳更多>>
- 相关机构：浙江省疾病预防控制中心中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒浙江分离株的基因分型被引量：1
- 2012年
- 目的对浙江省汉坦病毒（HV）分离株进行基因分型，为制定肾综合征出血热防制对策提供科学依据。方法应用RT—PCR的方法，使用汉坦病毒型特异性引物，对汉坦病毒浙江分离株型特异性M和S片段进行扩增和测序，并与其他已知病毒序列进行比较，以明确浙江株的基因型和亚型。结果本研究中18株HV浙江株11株为汉滩型（HTN），分为5个亚型，另7株为汉城型（SEO），分为3个亚型。HTNV ZNB-1、ZNB-2毒株和A3毒株以及SEOV Gou3、ZJ5毒株在种系发生上与其他HTNV和SEOV明显不同，Gou3和ZJ5株在SEOV发生群中构成一独立分支，比较核苷酸序列发现，ZNB-1和ZNB-2病毒M片段除与HTNV Nc167株有较高的同源性外（88．7％），与其他HTNV的同源性在69．7％-74．0％之间，A3株M片段除与HTNV B78株有较高的同源性外（99．7％），与其他HTNV的同源性在73．6％～76．3％之间。结论浙江省是汉坦病毒中汉滩型和汉城型的混合型疫区，HTNV至少有5个亚型，SEOV至少有3个亚型，而且浙江省存在着特殊亚型的HTN毒株以及SEO毒株。
- 徐芳姚苹苹朱函坪王洁钱磊胡群童淑梅邓小昭谢荣辉杨章女张云朱智勇
- 关键词：汉坦病毒基因型
- 汉坦病毒感染的量子点标记免疫检测研究
- 2011年
- 目的 应用量子点荧光标记技术和间接免疫法,建立一种新的汉坦病毒（HV）感染的免疫检测技术.方法 采用碳二亚胺交联法,在水溶性量子点表面修饰protein G和羊抗人IgG.以HV抗原片为固相载体,QDs-PG-IgG复合物为标记二抗,检测待检血清中的HV特异性抗体,并对检测条件进行优化.结果 量子点与羊抗人IgG的最佳偶联条件：反应时间2h、pH 6.0、羊抗人IgG浓度20 μg/ml.检测体系的最佳反应条件：量子点标记二抗的最适工作浓度为1：200,HV感染阳性血清检测的最大稀释度为1：1280.结论 成功建立了简便、快速的HV感染的量子点标记免疫检测方法,该方法具有良好的灵敏度和特异性,抗荧光猝灭性强,为进一步实现HV抗体的单分子定量检测奠定基础.
- 沈雅王洁巴龙姚苹苹邓小昭王长军朱函坪张云杨占秋
- 关键词：汉坦病毒属荧光抗体技术
- 浙江省2008-2011年啮齿动物中汉坦病毒的分离及鉴定被引量：8
- 2013年
- 目的分析浙江省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠形动物携带汉坦病毒状况及其型别。方法应用直接免疫荧光试验和RTPCR方法检测汉坦病毒抗原和核酸,阳性者用长爪沙鼠和VeroE6细胞进行病毒分离,对分离株的M片段基因进行序列测定和分析。结果 2008-2011年在浙江省HFRS疫区捕获的鼠形动物中以黑线姬鼠为优势鼠种;从该鼠鼠肺中共分离到6株汉坦病毒,序列分析表明分离株均为汉滩型汉坦病毒,其中Z521、524、534为H7亚型,TT-27、T-43、R88可能为新亚型;6株分离株之间的基因同源性较高,并与以往浙江省分离株具有较高同源性。结论 2008-2011年浙江省HFRS疫区鼠间存在汉滩型汉坦病毒流行。
- 徐芳朱函坪姚苹苹胡丹张云谢荣辉杨章女钱磊朱进
- 关键词：汉坦病毒病毒分离M基因啮齿动物
- 杆状病毒为载体的重组汉坦病毒S基因在Vero—E6细胞中的表达及其生物活性
- 2011年
- 目的 将汉坦病毒HV Z10株S基因（HV5）插入已含CMV基因的杆状病毒转移载体pDual-CMV，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS，转化Vero-E6细胞，用于血清汉坦病毒抗体的检测。方法 以pEGFP-N1质粒为模板，通过PCR扩增CMV基因序列，酶切插入杆状病毒转移载体pFastTBacDUAL,构建含CMV的转移载体pDual-CMV。酶切含HV S基因的pMD19-Z10S质粒，插入pDual-CMV，构建pDual-CMV-HVS，转化感受态DH10BAC，筛选并取重组杆状病毒基因，转染TN细胞，筛选重组杆状病毒BAC-pDual-CMV-HVS。BAC-pDual-CMV-HVS转化Vero-E6细胞，制备抗原片，用于血清中抗汉坦病毒抗体的检测并与传统方法进行比较。结果 经测序成功构建重组杆状病毒转移载体pDual-CMV-HVS，按杆状病毒表达系统操作方法，成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS，转化VeroE6细胞，经汉坦病毒抗体阳性血清检测，HV S基因在细胞中得到表达，与传统方法一致。结论 成功筛选BAC-pDual-CMV-HVS重组杆状病毒，可用于汉坦病毒抗原片的制备，该抗原片制备方法简便、无需特殊设备，可用汉坦病毒抗体的检测。
- 朱函坪姚苹苹王洁杨章女徐芳谢荣辉张云朱智勇
- 关键词：汉坦病毒属病毒蛋白质类荧光抗体技术
