国家高技术研究发展计划(101-05-03-01)
- 作品数：4 被引量：17H指数：2
- 相关作者：金宁一郭建顺沈晓峰冯立文张学东更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡痘病毒弱毒疫苗株在鸡组织内的分布、消长规律及毒性试验被引量：5
- 2006年
- 通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒(FPV)弱毒疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组:接种后6 h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA;接种后1 d,皮肤、肺、脑PCR检测阳性;7 d,在皮肤、肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;10、15 d,肝为阳性;21 d,脾、法氏囊PCR检测为阴性,肝为疑似;28 d,除刺种部位皮肤外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,但刺种部位皮肤一直到接种后35 d仍可检测到病毒DNA。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。滴鼻点眼组:基本规律与刺种组相同。接种后3 h,在肺部即可检测到病毒DNA;6 h,在肺和脑部PCR检测成阳性,法氏囊为疑似;1 d,在肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;21 d,肺、肾、法氏囊、脑均为阳性,其中脑一直持续到接种后28 d。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。毒性试验表明,FPV弱毒疫苗株虽使用安全但通过翅内侧皮肤无血管处大量刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险。
- 郭建顺金宁一夏志平金扩世徐敬龙贾雷立范喜章
- 关键词：鸡痘病毒毒性试验
- 鸡痘病毒基因探针检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2007年
- 利用PCR方法成功克隆了鸡痘病毒(Fowl poxvirus,FPV)4b核心蛋白基因549bp片段,序列分析表明,该序列与模板DNA(AF198100)碱基序列的同源性为99.45%,只有3个碱基差异,第215位由C→T,第386位由T→A,第388位由G→A。回收FPV 4b核心蛋白基因549bp片段,以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针。对新标记的探针进行标记效率检测,结果显示其标记效率为100mg/L;敏感性检测表明,该探针对同源DNA的检出限量为10pg;特异性检测结果表明,用本试验所标记的探针对提取的FPV 282E4和FPV JL株DNA、重组质粒pMD18-T-4b进行检测结果均呈阳性,而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均成阴性,说明该探针具有较强的特异性。初步应用表明,本试验所建立的FPV的基因探针检测法可用于FPV的检测。
- 郭建顺金宁一张国才张学东冯立文沈晓峰
- 关键词：鸡痘病毒基因探针
- 重组传染性法氏囊病病毒VP2/VP243基因表达及保护性和免疫原性被引量：11
- 2000年
- 目的在重组鸡痘病毒中表达传染性法氏囊病毒 VP2/VP243基因,并研究表达产物的保护性和免 疫原性。方法以 FPV 282E_4株 TK基因为侧翼,分别将鸡法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV) VP2 和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质 粒,命名为pUTALacVP和pUTA LacVPO。用这2个质粒转染CEF细胞,用X-gal染色法筛选出2株重组病毒vUTA lacVP2和 vUTALacVP0。用这 2株病毒免疫 1周龄 SPF鸡,以常规疫苗为对照。结果 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot表明表达产物可与IBDV特异性多克隆抗体反应,并诱导鸡保护性抗体。在使用vvIBDV攻击前,对照组抗体水 平显著高于实验组。但攻击5 d后,实验组抗体水平明显升高。结论vUTALacVP2和 VPO在 CEF细胞中实现了高 效表达,但重组疫苗的保护率低于常规疫苗。
- 金宁一刘毅郭志儒方厚华古长庆罗坤李萍殷震王虹
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP基因重组鸡痘病毒免疫
- FPV 4b核心蛋白基因的克隆及其探针制备
- 2006年
- 利用PCR方法成功克隆了FPV 4b核心蛋白基因1 361 bp片段。序列分析表明:该序列与模板DNA(AF198100)的碱基序列同源性为99.5%,只有7个碱基差异(第215位C→A,第386位T→A,第388位G→A,第1 014位T→G,第1 034位T→G,第1 137位C→T,第1 143位A→G)。回收FPV 4b核心蛋白基因1 361 bp片段与pMD18-T载体相连构建重组质粒pMD18-T-4b,用EcoRⅠ酶切pMD18-T-4b后得到1个约360 bp大小的DNA片段,以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针。对新标记的探针进行标记效率检测,结果显示其标记效率为100 mg/L。敏感性检测表明,该探针对同源DNA的检出限量为10 pg。特异性检测结果表明,用本试验所标记的探针对提取的FPV 282E4和FPV JL株DNA、重组质粒pMD 18-T-4b进行检测结果均呈阳性,而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均呈阴性,说明该探针具有较强的特异性。
- 郭建顺金宁一张学东冯立文沈晓峰李文红
- 关键词：鸡痘病毒克隆基因探针
