中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(11ykpy43)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：中山大学附属第三医院中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人EGFL7基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人喉癌细胞中的表达
- 2013年
- 目的:构建人表皮生长因子样结构域7(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,并建立稳定干扰EGFL7基因表达的喉癌细胞亚系,为研究EGFL7蛋白在喉癌发生发展中的功能奠定基础。方法:针对人EGFL7基因序列,设计特异性RNAi靶序列,与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR线性载体定向连接,得到的阳性重组子再与pLenti6.3-MCS/V5-DEST慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体。在POLOdelivererTM3000介导下将慢病毒包装质粒和EGFL7基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人喉癌细胞HEp-2,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰EGFL7基因的细胞亚系。结果:成功构建EGFL7 pLenti6.3-EGFL7-miR真核表达慢病毒干扰载体并获得相应慢病毒,经测定病毒滴度为5×1011TU/L,实时荧光定量PCR证实pLenti6.3-EGFL7-miR慢病毒载体对喉癌细胞HEp-2 EGFL7基因的沉默效率为97%。结论:成功构建人EGFL7基因特异性的慢病毒干扰载体,并获得EGFL7基因稳定干扰的喉癌细胞亚系。
- 张革化常利红叶进庄士民王凯黎景佳
- 关键词：RNA干扰喉肿瘤慢病毒
- 上皮钙黏蛋白表达与喉癌淋巴结转移和预后的关系被引量：6
- 2014年
- 目的检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理特征、预后的关系,探讨其在喉癌发生、发展中的作用及临床应用价值。方法采用免疫组化方法检测64例喉癌组织和30例癌旁非肿瘤组织中E-cadherin蛋白表达水平,分析E-cadherin表达与喉癌临床病理特征之间的关系,结合临床随访资料,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log-rank法比较E-cadherin高表达组和E-cadherin低表达组5年生存率,Cox多因素回归法分析喉癌预后的独立预测因素。结果喉癌组织中E-cadherin平均染色分数明显低于癌旁非肿瘤组织(F=10.587,P<0.001);喉癌组织中E-cadherin表达水平与淋巴结转移(χ2=2.469,P<0.001)有明显相关性,而与患者年龄、肿瘤临床分型、T分级和病理分级无关;E-cadherin高表达组5年生存率为74.1%,E-cadherin低表达组5年生存率为42.9%,二者差异有统计学意义;多变量Cox风险比例模型分析表明,仅淋巴结转移是喉癌预后的独立预测因子,E-cadherin表达水平不能单独预测疾病的预后。结论E-cadherin在喉癌组织中表达减低,其表达水平可能作为预测喉癌颈淋巴结隐匿性转移的潜在肿瘤标志物。
- 常利红黎景佳杨新明唐青来叶进庄士民
- 关键词：预后上皮钙粘蛋白
- 颈深部筋膜间隙感染诊治体会被引量：6
- 2015年
- 目的探讨颈深部筋膜间隙感染的临床表现和诊断治疗方法。方法回顾性分析2012年1月~2014年8月我院耳鼻咽喉头颈外科收治的105例颈深部间隙感染患者的临床资料,总结其发病特征和诊治策略。结果 105例颈深部间隙感染患者中,70例行脓肿切开引流,4例行脓肿穿刺抽液,31例行静脉抗生素消炎治疗,仅2例颈深部多筋膜间隙感染患者分别并发呼吸困难、纵隔感染,所有患者均治愈出院。结论颈深部筋膜间隙感染一经确诊脓肿形成,应及时切开引流,根据药敏试验结果选用合适抗生素,控制基础疾病及严重并发症。
- 黎景佳叶进庄士民常利红王涛陈愈彬
- 关键词：软组织感染扁桃体周脓肿引流术
- 慢病毒介导的类表皮生长因子域7基因沉默抑制喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨小干扰RNA（siRNA）重组慢病毒介导的类表皮生长因子域7（epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7）基因沉默对体外培养喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭潜能的影响.方法 采用RNA干扰技术,构建靶向EGFL7的shRNA重组慢病毒并转染Hep-2细胞,通过Real-timePCR和Western blot在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果;实验分为空白对照组（NC）、空白慢病毒感染组（Lenti-NC）和EGFL7基因沉默慢病毒感染组（Lenti-EGFL7）,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力.结果 Real-time PCR检测说明Lenti-EGFL7组mRNA相对表达量较NC组下降达94％（P＜0.001）,Western blot检测证实Lenti-EGFL7组EGFL7蛋白相对表达量为（0.07 ±0.04）较NC组的（0.39 ±0.12）明显减低（P ＜0.001）,表明成功构建稳定沉默EGFL7基因的喉癌Hep-2细胞株.CCK-8细胞增殖实验说明靶向沉默EGFL7表达导致喉癌细胞增殖明显抑制（P＜0.01）,流式细胞术检测证实,与NC组和Lenti-NC组相比,Lenti-EGFL7组S期细胞百分比明显升高（P＜0.01）,G1期细胞百分比下降（P＜0.05）,细胞凋亡检测证实Lenti-EGFL7组细胞凋亡率为（66.2±1.28）％较NC组的（6.09±3.28）％和Lenti-NC组的（9.86±2.13）％明显增加（P ＜0.001）.Transwell侵袭实验发现Lenti-EGFL7组穿过Matrigel到达下室的平均细胞数较NC组和Lenti-NC组均明显减少（P＜0.01）.结论 靶向沉默EGFL7基因能抑制体外培养喉癌Hep-2细胞的增殖并降低细胞侵袭能力.
- 黎景佳叶进庄士民王涛王志远常利红张革化
- 关键词：表皮生长因子肿瘤侵润慢病毒属
- 表皮生长因子受体信号通路调控E-cadherin表达影响喉癌细胞增殖和侵袭的机制被引量：11
- 2015年
- 目的探讨表皮生长因子受体(epidermal grow th factor receptor,EGFR)信号通路调控喉癌细胞E-cadherin表达并影响细胞增殖、侵袭等生物学行为的机制。方法采用外源性的EGFR激动剂表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和EGFR酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼干预体外培养喉癌Hep-2细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移力和侵袭力及相关蛋白表达改变。结果 EGF呈时间和浓度依赖性促进喉癌细胞增殖,并使喉癌细胞G1期比例减少而S期比例增加,细胞迁移距离及侵袭能力明显增加;厄洛替尼呈时间和浓度依赖性抑制喉癌细胞增殖,并导致喉癌细胞G1期比例增加而S期比例减少,同时增加细胞凋亡率,细胞迁移距离及侵袭能力均明显低于对照组。Western blot检测发现EGF干预使喉癌细胞E-cadherin表达下调而Vimentin表达上调,而厄洛替尼干预后喉癌细胞E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调。结论小分子酪氨酸激酶抑制剂阻断EGFR信号通路导致喉癌Hep-2细胞E-cadherin表达上调,并抑制细胞增殖和侵袭转移能力。
- 黎景佳叶进庄士民杨新明李仕晟
- 关键词：细胞增殖肿瘤浸润上皮钙黏蛋白
