广东省中医药管理局基金(2007380)
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- 微环境诱导骨髓间充质干细胞分化为内皮样细胞
- 2010年
- 目的通过观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)与成熟内皮细胞非接触共培养表达特异性内皮细胞标志物的情况,探讨微环境依赖性的、体外非接触共培养方法对MSCs向内皮样细胞分化的影响。方法密度梯度离心法分离纯化培养的hMSCs与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在Transwell内共培养,通过流式细胞术检测hMSCs表型,RT-PCR鉴定诱导后hMSCs的CD31、VWF、VE-Cadherin mRNA的表达,免疫组化鉴定诱导后hMSCs特异性内皮细胞标志物VCAM1和CD31的表达,透射电镜观察诱导后hMSCs的超微结构。结果细胞培养第2周,开始出现形态学改变,胞体回缩,呈多角形改变。细胞培养第3周,细胞增生速度明显加快,形态学上呈卵圆形或"铺路石"样改变;在基因水平上,RT-PCR显示经典内皮细胞标志物CD31、VWF、VE-cadherin mRNA的高表达;在蛋白水平上,免疫荧光染色CD31、和VCAM1表达阳性;透射电镜下诱导后细胞显示内皮细胞特有的Weibel-Palade小体。结论 hMSCs在共培养的微环境中,可以分化成内皮细胞表型,其机制是通过内皮细胞的旁分泌作用,而不需要hMSCs与内皮细胞的直接接触。转化的内皮细胞在形态上、基因、蛋白表达、超微结构等方面均显示了内皮细胞的特征。
- 何威杨旭辉林秋雄余伟华吴伟康
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化内皮细胞TRANSWELL
