国家自然科学基金(81090414) 作品数:6 被引量:8 H指数:2 相关作者: 方向东 程涛 胡甜园 张倩 贾海波 更多>> 相关机构: 中国医学科学院 华中科技大学 中国科学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 科技部基础性研究重大项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
AKT的功能及其对造血系统和白血病的调节 被引量:2 2014年 磷脂酰肌醇.3激酶一丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(P13K-AKT)信号通路在细胞的多种生理过程中发挥调节作用。 胡甜园 程涛 袁卫平关键词:造血系统 苏氨酸蛋白激酶 白血病 AKT 磷脂酰肌醇 生理过程 先天性纯红细胞再生障碍性贫血斑马鱼模型相关microRNA的组学研究 被引量:2 2014年 目的探讨先天性纯红细胞再生障碍性贫血(DBA)相关microRNA的表达特征及其调控机制。方法利用morpholino技术建立核糖体蛋白基因Rps19表达不足的DBA斑马鱼模型和Rps19与p53同时表达不足的斑马鱼模型,利用新一代高通量测序(RNA-seq)技术,研究DBA斑马鱼模型的microRNA表达谱的特征及p53在其中的调控作用。结果 Rps19 MO的斑马鱼胚胎的循环血细胞明显减少,且尾部呈现出向腹侧弯曲的异常形态。而在p53敲低之后,斑马鱼的形态异常得到了一定程度的恢复。通过对microRNA表达谱的比较分析发现,在Rps19不足的斑马鱼胚胎中约1/4的microRNA表达量显著偏低,这些异常表达的microRNA可能影响到斑马鱼的正常发育过程。而在p53敲低之后,部分microRNA的表达恢复到正常水平。最终确定了47个在DBA发病过程中可能受p53调控的microRNA。结论 DBA斑马鱼模型的microRNA普遍低表达,其中部分microRNA受到p53的表达水平的调控。 张倩 宋斌峰 万扬 张昭军 鲍丙浩 谢尚论 刘汉芝 竺晓凡 袁卫平 贾海波 方向东关键词:纯红细胞再生障碍性贫血 MICRORNA P53 RNA-SEQ 斑马鱼 DAPT对小鼠造血干细胞生物活性的影响 2012年 本研究探讨DAPT(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl-L:-alanyl)]-S-phenylglycinet-butyl ester)对小鼠骨髓造血干细胞(HSC)细胞周期、凋亡、分化及扩增的影响及其可能的相关机制。运用实时定量PCR检测DAPT1μmol/L作用前后细胞周期相关基因p18、p21、p27、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6 mRNA表达水平及凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、mcl-1、Bax、Bim、p53、Puma mRNA表达量的水平;用流式细胞术检测DAPT作用前后小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+及CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞周期及凋亡的变化;用单细胞培养检测DAPT作用前后单个HSC分化的变化;用长周期培养实验检测DAPT作用前后HSC扩增能力的变化。结果显示,Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞经DAPT处理5 d后,小鼠骨髓细胞中细胞周期相关基因CDK1、CDK2、CDK4、CDK6及p27的mRNA表达量较对照组明显升高(P<0.01-P<0.001),p18和p21表达量明显降低(P<0.01-P<0.001);凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xl、Bax、p53、Puma表达量较对照组明显升高(P<0.01-P<0.001),Bim表达量明显降低(P<0.001),Mcl-1的表达量无差异。加DAPT处理5 d后,小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞周期的变化无统计学意义(P>0.05),小鼠骨髓细胞CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的G0期的细胞减少,G1期的细胞明显增多(P<0.05),处于S、G2、M期的细胞数量的变化无统计学意义(P>0.05);小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞和CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞凋亡增多(P<0.05)。单细胞培养10 d实验显示,每板形成的克隆数、每孔平均细胞数的变化及DAPT对单个造血干细胞分化影响的差异均无统计学意义(P>0.05)。DAPT处理3 d后,小鼠骨髓细胞中HSC的扩增能力下降。结论:DAPT可加速小鼠骨髓细胞CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的耗竭,促进小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+及CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的凋亡,降低小鼠骨髓细胞中HSC的扩增能力,但对单个CD34-Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的增殖及分化无明 张娜 张丽艳 张燕 纪庆 王金宏 祁瑞哲 许静 袁卫平 程涛 高瀛岱关键词:NOTCH信号通路 造血干细胞 DAPT Rheb过表达在白血病细胞株HL-60和K562中的作用 被引量:1 2013年 mTOR信号通路是细胞内重要的生命活动枢纽,它通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖来调控细胞生命活动。Rheb可以激活mTOR信号通路,进而参与多种肿瘤的发生发展。本研究以髓系白血病细胞株为研究对象,探讨Rheb在HL-60和K562中的作用及相关机制。本研究利用逆转录病毒技术使髓系白血病细胞株HL-60和K562过表达Rheb;利用Western blot和Real-Time PCR分别检测HL-60和K562细胞中Rheb的蛋白表达水平及mRNA表达水平;利用CCK-8法检测细胞活力;利用Annexin V-PE和7-AAD双染检测细胞凋亡。结果表明:成功构建了Rheb过表达的HL-60和K562细胞株,并发现Rheb过表达可以促进细胞生长;进一步研究发现,Rheb过表达加快细胞进入G2/M期(P<0.01),但不影响细胞凋亡。结论:Rheb通过加快细胞周期进程促进HL-60和K562细胞增殖。 徐乔竹 汪晓敏 王放放 高亚男 张英驰 鞠振宇 程涛 袁卫平 刘汉芝关键词:RHEB AML HL-60 K562 抑制Larp4b表达不影响小鼠Lin^-造血细胞集落形成能力 2013年 Larp4b是人类LARP家族中的一员,为广谱翻译因子,可结合RNA并促进mRNA的翻译。前期本实验室的研究工作提示白血病患者存在Larp4b基因表达变化。本研究检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达量,敲降Larp4b表达对Lin-造血细胞生物行为的影响。利用RT-PCR检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达,用病毒上清感染Lin-细胞,分选EGFP+细胞,PI染色法检测细胞周期,AnnexinV-PE/7-AAD双染法检测细胞凋亡,并进行集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)。结果表明:Larp4b基因在造血各系细胞中表达不同,Larp4b基因在粒系和巨噬祖细胞(GMP)以及髓细胞(M)的表达较高,在T淋巴细胞中表达明显低,抑制Larp4b表达不影响Lin-造血细胞体外集落形成能力,不影响Lin-造血细胞的细胞周期和凋亡。结论:Larp4b基因在髓系细胞中表达较高。抑制Larp4b表达不影响Lin-造血细胞集落形成能力,不影响Lin-造血细胞的增殖,这为后续Larp4b体内实验研究奠定了基础。 王晓娟 庞雅坤 程辉 董芳 梁昊岳 张英驰 汪晓敏 许静 程涛 袁卫平关键词:造血干 祖细胞 造血细胞 慢病毒载体 Establishment of Reproducible Xenotransplantation Model of T Cell Acute Lymphoblastic Leukemia in NOD/SCID Mice 被引量:3 2012年 T cell acute lymphoblastic leukemia(T-ALL) is an aggressive leukemia.However the poor prognosis and low morbidity restrict further analysis of the disease.Therefore there is an increasing demand to develop animal models for identifying novel therapeutic approaches.In this study,we inoculated the anti-mouse CD122 monoclonal antibody conditioned NOD/SCID mice with the leukemia cells from 9 T-ALL patients and 1 cell line via the tail vein.Four of the 9 patients and the cell line were successfully engrafted.Flow cytometry detected high percentage of human CD45 + cells in recipient mice.Immunohistochemistry showed infiltration of human CD45 + cells in different organs.Serial transplantation was also achieved.In vivo drug treatment showed that dexamethasone could extend survival,which was consistent with clinical observation.These results demonstrated that we successfully established 5 xenotransplantation models of T-ALL in anti-mCD122 mAb conditioned NOD/SCID mice,which recapitulated the characteristics of original disease. 王迪 王娜 张艳 马淑燕 耿哲 周鹏飞 周剑峰 黄亮关键词:XENOTRANSPLANTATION