重庆市自然科学基金(2008BB5071)
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
- 相关作者：田杰杨晓菲吴晓云李勇刚李谧更多>>
- 相关机构：重庆医科大学教育部更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578del6)及野生型真核表达质粒并检测两种重组质粒CITED2蛋白的表达情况。方法分别以健康儿童和CITED2基因突变的先天性心脏病患儿血细胞DNA为模板,PCR定向克隆扩增野生型和突变型CITED2编码链,分别T/A克隆至pMD19-T simple质粒上,筛选出野生型和突变型CITED2的T载体重组质粒。应用DNA重组技术将T载体重组质粒上的CITED2基因片段亚克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建pEGFP-C1-wtCITED2和pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒,并分别转染至HEK293细胞,24h后在荧光显微镜下观察质粒转染情况,48h后应用流式细胞仪检测转染效率,Western blotting检测CITED2蛋白的表达。结果成功构建了人野生型pEGFP-C1-wtCITED2和突变型pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒。转染至HEK293细胞后24h,在荧光显微镜下可观察到各转染组EGFP的表达,转染后48h流式细胞仪检测转染效率为50%～60%,Western blotting检测可见CITED2蛋白与EGFP的融合表达。结论成功构建了人转录辅助因子CITED2突变型及野生型真核表达质粒,并检测到CITED2蛋白的表达。
- 胡计华吴晓云杨晓菲郑敏邓兵田杰
- 关键词：突变真核表达质粒
- 先天性心脏病患儿Citecl2基因突变分析被引量：10
- 2010年
- 目的探讨先天性心脏病（CHD）患儿Cited2基因编码链的突变情况。方法收集120例非同源多种种类的特发性CHD患儿和100例健康儿童血液样本进行DNA抽取、目的基因聚合酶链反应及测序，并与GeneBank进行比较以识别基因突变，对伴有突变者行家系调查，并用ClustalW软件分析突变氨基酸的保守性。结果在4例CHD患儿发现3个新的Cited2编码链突变，首次在1例镜面右位心伴法洛四联症、1例主动脉瓣狭窄患儿各自发现1个新的点突变（c．550G〉A；c．574A〉G），首次在1例室间隔缺损伴房间隔缺损及1例主动脉瓣狭窄伴肺动脉瓣狭窄患儿发现相同的缺失突变（c．573-578del6），这3种突变均导致了相应蛋白质的结构改变（P．Gly184Ser；P．Ser192Gly；P．Ser192s），这些突变均未在对照组发现。结论在不同类型的CHD患儿中发现了新的Cited2基因突变，丝氨酸一甘氨酸富含区（SGJ）是突变的热点区域，这些突变可能是导致人类CHD发生的原因之一。
- 杨晓菲吴晓云李谧李勇刚代江涛白永虹田杰
- 关键词：突变
