宁夏回族自治区自然科学基金(NZ1196)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：宁夏医科大学银川市第一人民医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌三种基因重组质粒的构建及原核表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌ESAT-6、CFP10、phoS2/pET28a表达重组质粒,并原核表达重组蛋白。方法将目的基因亚克隆到pET-28a表达载体,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)plysS,诱导表达重组蛋白ESAT-6、CFP10、phoS2。结果成功构建基因工程菌株ESAT-6、CFP10、phoS2/pET-28a/BL21(DE3)plysS,表达重组蛋白ESAT-6、phoS2,因以包涵体形式存在,无法纯化。结论成功构建结核分枝杆菌ESAT-6、CFP10、phoS2/pET28a重组质粒,分别表达分子量约10×103、31×103的ESAT-6、phoS2重组蛋白,但无法纯化,CFP10不表达。
- 丁淑琴师志云董辉杨风琴朱佳佳
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6CFP10重组质粒原核表达
- 应用ROC曲线评价结核分支杆菌重组抗原的诊断价值
- 2016年
- 目的探讨ROC曲线分析结核分支杆菌4种重组抗原CFP10、ESAT-6、MPT64和pho S2在结核病诊断中的实用价值。方法采用间接ELISA法检测病例组和健康对照组人群的血清。构建ROC曲线,对4种重组结核抗原的诊断价值进行分析,根据ROC曲线下面积评价各种抗原的诊断效能。综合敏感度、特异度及约登指数确定有诊断价值的单个抗原和不同抗原的组合方式。结果结果显示,单个抗原CFP10、pho S2、MPT64和ESAT-6曲线下面积分别为88.2%、85.3%、89.2%和93.2%,其中ESAT-6的诊断准确性最高。4种抗原并联后AUC面积均在90%以上,且灵敏度提高,在80.5%~89%之间。其中CFP10+ESAT-6+pho S2组合的灵敏度为89%,特异度为93.3%,约登指数为0.823。结论应用ROC曲线对结核分支杆菌重组抗原的筛选及效能的评价有一定的理论和应用价值。
- 丁淑琴杨风琴张怡清
- 关键词：ROC曲线结核分支杆菌重组抗原
- 结核分支杆菌重组蛋白rps12的结构与功能预测被引量：1
- 2012年
- 目的应用生物信息学分析软件预测结核分支杆菌重组抗原rps12的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及DNAstar、Rasmol等软件包分析预测结核分支杆菌重组蛋白rps12的二级结构、三级结构;预测主要抗原表位等。结果经预测,该蛋白分子质量约为13849.2KDa,理论等电点为11.37,有6个抗原表位,其结构域位于1-34,35-124。结论生物信息学技术在结核分支杆菌rps12重组蛋白研究中有一定的理论和参考价值。
- 丁淑琴杨园园杨凤琴朱佳佳
- 关键词：结核分支杆菌生物信息学
- 结核分支杆菌phoS2重组质粒的构建、表达、纯化及生物信息学预测被引量：2
- 2014年
- 目的构建结核分支杆菌phoS2表达重组质粒、原核表达及纯化重组蛋白，并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法将目的基因亚克隆到pET32a表达载体，成功构建的重组质粒双酶切鉴定并测序。加IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE鉴定后用含Ni^2＋的His-bind树脂柱亲和层析纯化phoS2，并用Westernblot对其进行鉴定。应用DNAstar等生物分析软件对该蛋白的理化特性、跨膜区域、二级结构、三维结构进行预测。结果双酶切鉴定及测序分析表明，成功构建了基因工程菌株高效表达质粒phos2／pET32a。IPTG诱导表达的SDS-PAGE鉴定结果显示，上清液中只见极少量的特异蛋白表达带，沉淀部分可见明显的特异表达带，说明phoS2主要是包涵体表达。经免疫印迹分析获得的phoS2分子质量为37953ku。生物信息学预测该蛋白分子质量为37953．1ku，理论等电点为5．75，具有1个跨膜区，位于1-19位，结构域位于1-370位。结论成功构建了结核分支杆菌phoS2／pET32a重组质粒，phoS2能够高效表达。蛋白结构功能的预测对本实验的实施及进一步的研究提供了理论依据。
- 丁淑琴徐文锦杨园园杨风琴
- 关键词：结核分支杆菌重组质粒纯化生物信息学
