国家重点基础研究发展计划(2001CB510106)
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 相关作者：曹鸿国邓宏魁李运生李玛琳洪岸更多>>
- 相关机构：北京大学安徽农业大学昆明医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 拟胚体对成体细胞参与胚胎嵌合的影响
- 2008年
- 试验尝试构建成体细胞同小鼠早期胚胎的嵌合共生胚胎。取成年人皮肤组织的成纤维细胞,慢病毒转染皮肤成纤维细胞标记EGFP荧光蛋白,同小鼠早期8-细胞胚胎进行嵌合。结果显示慢病毒高效标记人皮肤成纤维细胞表达EGFP荧光蛋白,通过皮肤成纤维细胞与小鼠胚胎干细胞形成的拟胚体环境作用后,皮肤成纤维细胞成功与小鼠胚胎形成嵌合胚,嵌合囊胚形成率为38.08%,表达EGFP荧光蛋白的皮肤成纤维细胞能够嵌合到小鼠胚胎的不同部位。嵌合胚在胚胎干细胞分离培养环境下进行培养,嵌合到小鼠内细胞团的皮肤成纤维细胞参与小鼠内细胞团的组成,参与小鼠内细胞团组成的胚胎占嵌合胚比率为1.74%。小鼠胚胎干细胞拟胚体环境作用可以成功介导人皮肤成纤维细胞同小鼠早期胚胎形成嵌合共生体系。
- 曹鸿国李运生曲秀霞邓宏魁
- 关键词：拟胚体成纤维细胞胚胎嵌合
- 间充质干细胞的特性与分化诱导研究进展被引量：9
- 2006年
- 间充质干细胞(MSCs)是成体干细胞的一种,广泛存在于人体的间充质组织中,具有自我复制能力和多项分化潜能.单独或联合使用某些细胞因子、生长因子、激素、维生素、抗氧化剂和抗肿瘤药物等,可诱导MSCs在体外培养条件下向某一谱系细胞分化.鉴于MSCs的上述特点,使其有着非常诱人的临床应用前景,可以用于许多种疾病的治疗.本文从MSCs的生物学特性、MSCs的分化诱导、分化调节机制及应用前景等方面进行了评述.
- 唐文洁李玛琳洪岸
- 关键词：间充质干细胞分化
- 小鼠皮肤成纤维细胞与早期胚胎共生体系的构建
- 2009年
- 【目的】构建小鼠早期胚胎与皮肤成纤维细胞共生的微环境体系。【方法】分离培养EGFP纯合阳性成年ICR小鼠皮肤成纤维细胞。取激素超排合笼后2.5d小鼠8-细胞胚胎，通过显微操作系统将4～6个EGFP阳性小鼠皮肤成纤维细胞注射到小鼠早期8-细胞胚胎中，转移发育到囊胚阶段的共生胚胎至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上，在小鼠胚胎干细胞分离培养条件下进行培养。【结果】EGFP阳性小鼠成纤维细胞注射到小鼠胚胎后，荧光显微镜下显示，EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚组成细胞中，参与小鼠囊胚组成。在发育到囊胚的共生胚胎中，EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚细胞中的比例为93．73％（269／287）。在小鼠胚胎干细胞的分离培养条件下，2．60％（7／269）共生胚胎中EGFP阳性小鼠成纤维细胞参与小鼠胚胎内细胞团的组成。【结论】小鼠皮肤成纤维细胞与小鼠早期胚胎能够形成共生的微环境体系。
- 曹鸿国李运生邓宏魁
- 关键词：小鼠早期胚胎
- 增强型青色荧光蛋白慢病毒表达载体的构建
- 2008年
- 目的:通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白(ECFP)慢病毒表达载体。方法与结果:根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白。结论:通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体。
- 曹鸿国卢智刚罗敏袁克湖邓宏魁
- 关键词：慢病毒载体绿色荧光蛋白点突变
- FGF-2对人骨髓间充质干细胞增殖和向成骨细胞分化的影响被引量：9
- 2005年
- 探讨体外培养条件下,成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和地塞米松(Dex)对第7代人骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和向成骨细胞分化的作用以及两者联合使用的效应。MSCs经含FGF-2或/和Dex的培养液作用后,于不同时间采用MTT法测定细胞增殖情况;对硝基苯磷酸(pNPP)法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;ELISA法测定骨钙蛋白(OC)含量;茜素红S染色法对沉积的钙盐进行染色。发现:⑴FGF-2组细胞的生长速度为对照组的1.31倍,Dex/FGF-2组细胞的生长速度为FGF-2组的1.12倍。⑵Dex组的ALP活性、OC含量和细胞外基质钙盐沉积分别为对照组的17.0倍、2.12倍和10.56倍,并能形成成熟的羟基磷灰石(HA)结晶和骨结节;FGF-2组的ALP活性比对照组降低了76.7%,虽然OC含量、钙盐沉积增加,但不能形成成熟的HA结晶和骨结节;FGF-2对Dex诱导的ALP活性增加和HA结晶形成有拮抗作用。由此证明:⑴FGF-2可促进MSCs的增殖,Dex对MSCs的增殖无明显作用;Dex能增强FGF-2对MSCs的促增殖效应。⑵Dex可使MSCs分化为成熟的成骨细胞,是一个有效的成骨细胞分化诱导剂;FGF-2可使MSCs分化为未成熟的成骨细胞;FGF-2拮抗Dex诱导MSCs分化为成熟的成骨细胞。
- 唐文洁李玛琳邱垂源陈琼玉李国辉李凌松洪岸
- 关键词：间充质干细胞成纤维细胞生长因子-2成骨细胞
- 慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白
- 2008年
- 试验尝试建立稳定表达外源基因的人成纤维细胞系。取成年男性包皮皮肤的皮下组织,分离培养人皮肤成纤维细胞,分别采用脂质体和慢病毒载体介导转染人皮肤成纤维细胞表达绿色荧光蛋白。结果显示,来自成年人包皮皮下组织的成纤维细胞呈梭形,具有快速的增殖和稳定的生长性能。脂质体介导转染的人皮肤成纤维细胞绿色荧光蛋白表达不稳定,阳性细胞表达率低,转染后的人成纤维细胞变得更为细长,细胞生长速度降低。慢病毒载体介导人皮肤成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白,转染后细胞生长性能和形态没有变化,经过多次传代和冻存复苏对人皮肤成纤维细胞绿色荧光蛋白的表达没有影响,通过流式细胞仪对慢病毒介导表达绿色荧光蛋白的人皮肤成纤维细胞检测显示,绿色荧光蛋白表达阳性率为99.85%,并且表达绿色荧光蛋白的人皮肤成纤维细胞细胞均一程度为76.05%。试验证实了慢病毒载体能够高效稳定介导人皮肤成纤维细胞表达绿色荧光蛋白。
- 曹鸿国李运生曲秀霞
- 关键词：慢病毒载体成纤维细胞绿色荧光蛋白
