国家教育部博士点基金(20093515110004) 作品数:7 被引量:10 H指数:2 相关作者: 何水林 赖燕 官德义 蔡汉阳 牟少亮 更多>> 相关机构: 福建农林大学 井冈山大学 福建农业职业技术学院 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 福建省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
辣椒非特异性脂质转移蛋白基因CaLTP1的克隆及表达分析 2012年 非特异性脂质转移蛋白(nsLTPs)是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白,具有多种生物学功能。从辣椒cDNA文库中筛选得到1个nsLTPs基因,命名为CaLTP1;序列分析结果表明:该基因全长cDNA序列为1 211 bp,推测编码1个包含129个氨基酸残基的前体蛋白。CaLTP1蛋白含有典型的脂质转移蛋白N-端信号肽,保守的AAI结构域和半胱氨酸位点。预测CaLTP1蛋白含有多种功能位点,包括3个CK2磷酸化位点,3个N-豆蔻酰化位点和1个PKC磷酸化位点。实时荧光定量分析组织特异性表达模式表明,CaLTP1在辣椒茎、叶、花中表达量升高。 冯冬林 赖燕 何水林关键词:辣椒 辣椒应答疫霉差异表达基因cDNA分离技术平台建立与应用 被引量:1 2010年 植物在逆境胁迫下大量基因的表达往往会发生改变,最终导致对逆境的诱导抗性。剖析逆境作用下差异表达基因的功能是阐明植物抗逆分子机制的重要途径,而获得逆境作用下差异表达基因的全长cDNA是上述研究的基础。建立获得辣椒应答疫霉侵染差异表达基因全长cDNA的技术平台:利用抑制性差减杂交技术构建辣椒叶片在疫霉侵染下的SSH文库,随机挑取150个克隆测序,获得24个功能已知的序列,BLASTN分析发现这些差异表达基因从功能上可分为能量代谢过程、信号传递、光合作用、抗逆反应等几种类型;利用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMARTTM(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)建库技术相结合的方法,构建了辣椒全长均一化cDNA文库,该文库含有1.8×106个独立克隆,插入片段平均长度为1.75kb,重组率为97%;基于SSH获得的差异表达基因序列设计特异性引物,从均一化文库中分离获得其相应的cDNA,结果表明:所获得的差异表达基因cDNA片段相对应的cDNA阳性克隆均为全长cDNA,所构建的SSH和均一化cDNA文库可较好地应用于辣椒应答疫霉等逆境差异表达基因全长cDNA的分离,为进一步开展差异表达基因的功能鉴定奠定基础。 赖燕 林明 陈桂信 徐波 贺俐 姜翠翠 肖翔 官德义 何水林关键词:辣椒 抑制差减杂交 差异表达基因 辣椒小G蛋白CaRab11基因全长cDNA的分离及序列分析 被引量:1 2012年 通过分析克隆获得的辣椒Rab11全长cDNA及其编码的氨基酸序列结构特征,为进一步研究辣椒Rab11功能奠定基础。通过对辣椒均一化cDNA文库的筛选分离获得了一个与葡萄Rab11小G蛋白VvRabA1f高度同源的全长cDNA,命名为CaRab11。序列分析结果表明:该cDNA包含有1 164 bp的完整开放阅读框,编码217个氨基酸。该蛋白含有Rab GTP酶超家族保守的RabSF模体;Rab亚家族蛋白所特有的五个氨基酸序列RabF模体(RabF1-RabF5);参与GTP/Mg++结合及GTP水解的G结构域(G1-G5:GDSGVGKS,T,DTAGQE,GNKADL及ETSAL);两个构象变构域(SwitchⅠ和SwitchⅡ)及与异戊二烯化相关的CCX序列。氨基酸同源性及进化分析同样表明CaRab11为辣椒小G蛋白Rab11家族新成员。 赖燕 林金辉 陈成聪 官德义 牟少亮 邱爱连 何水林关键词:辣椒 小G蛋白 基因克隆 辣椒小G蛋白CaRab8基因全长cDNA的分离及表达特征的初步分析 被引量:1 2011年 通过对辣椒均一化cDNA文库的筛选,分离获得了一个与烟草RAB8-2基因编码的蛋白有着高度同源性的cDNA阳性克隆,命名为CaRab8。测序结果表明,该cDNA长度为961 bp,包含有651 bp的完整的开放阅读框,推测编码一个217个氨基酸的蛋白,该蛋白具有GTP/GDP结合活性必需的保守域和包括YYRGA在内的Rab家族成员特有的5个结构域。实时定量RT-PCR结果表明,CaRab8基因的表达水平在茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导下在短时间内呈上调表达,在相应时间点受水杨酸(SA)诱导下调表达。 赖燕 肖翔 林菁 虞露 陈桂信 官德义 何水林关键词:辣椒 小G蛋白 辣椒Arf GAP基因的克隆与表达分析 被引量:3 2012年 ADP核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白(GAPs)能够促使束缚于Arfs的GTP水解为GDP,通过转化具有活性的GTP束缚型为非活性的GDP束缚型从而达到调节Arfs的作用。本研究从辣椒幼苗叶片cDNA文库中筛选获得1个阳性克隆。核苷酸序列分析表明,该基因编码含有1个408个氨基酸残基,分子量约为43.98kD,含有1个保守的Arf GAP结构域,与葡萄、大豆中的AGD8-Like基因的同源性分别为73%和71%,与拟南芥AtAGD8同源性为65%,命名为CaAGD8。实时荧光定量PCR检测表明,与对照相比,CaAGD8基因的相对表达量在辣椒茎、叶、花及果实中表达量升高。 冯冬林 赖燕 何水林关键词:辣椒 ARF GAP 辣椒CaERF4的全长cDNA克隆及其表达分析 被引量:3 2014年 通过筛选辣椒均一化cDNA文库,获得一个具有AP2结构域的辣椒CaERF4全长cDNA序列,含有一个编码250个氨基酸序列的开放阅读框,与拟南芥等其它植物ERF蛋白之间有35%~38%的氨基酸序列相似性。该基因在辣椒不同器官中均有不同程度的组成型表达,在根系中表达量略低。此外,还发现CaERF4的转录受到茉莉酸甲酯(MeJA)和乙烯利(ETH)等外源激素处理以及青枯菌接种的诱导,但水杨酸(SA)处理作用不明显,高温处理也可诱导其转录表达增强。说明CaERF4可能在辣椒应答病原菌和高温等逆境胁迫中起调节作用。 蔡汉阳 肖卓丽 严雁 官德义 何水林 吴杨关键词:辣椒 转录活性 组织特异性