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三疣梭子蟹精子保存研究被引量：5: 2007年; 于2004年5月到2004年7月对三疣梭子蟹精子进行了常温、低温和超低温保存研究。利用离子载体A23187人工诱导顶体反应以判断精子活力。常温和低温保存实验的结果显示,4℃下无钙人工海水(calcium-free artificial sea water,Ca2+FASW)保存236h的精子有25%以上的成活率。在4℃,25℃两种温度与Ca2+FASW、天然海水(natural sea water,NSW)两种基础液构成的4种组合中,最优组为4℃、Ca2+FASW,最差组为25℃、NSW。将精子浓度与Ca2+FASW对照组及诱导组比较,结果显示,25℃和4℃下,精子浓度与对照组顶体反应率相关性不显著(P=0.068>0.05,P=0.265>0.05),与诱导组顶体反应率极显著相关(P<0.01)。以二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)和甘油(Glvcerol,G)作为抗冻剂进行超低温冷冻实验,72h后解冻,包括对照组在内的所有组均有98%以上的精子不经诱导就发生顶体反应。; 周帅朱冬发王春琳薛良义; 关键词：精子

三疣梭子蟹精子顶体反应前后胞内Ca^(2+)的变化: 2008年; 应用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和Fluo-3/AM荧染技术对三疣梭子蟹精子顶体反应前后的胞内Ca2+变化进行了观察和检测。结果显示,在精子顶体反应过程中,胞内Ca2+主要分布在细胞核、穿孔器和胞质膜残存处,胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)总体上呈现先上升后下降的趋势。顶体反应前精子的平均荧光强度为35.95±5.71;穿孔器前伸、顶体囊膜翻转阶段精子的平均荧光强度为66.80±7.35;顶体囊膜脱落、顶体丝形成阶段精子的平均荧光强度为3.87±2.82;上述各阶段间精子荧光强度有极显著差异(P<0.01)。顶体反应穿孔器前伸、顶体囊膜翻转阶段的精子相比顶体反应前精子,[Ca2+]i显著提高;而在顶体囊膜脱落、顶体丝形成阶段,[Ca2+]i则急剧下降,只在顶体丝基部胞质膜残存处有微量Ca2+存在。初步探讨了三疣梭子蟹精子顶体反应前后胞内Ca2+变化的功能。; 朱冬发沈丽萍沈建明吴琼; 关键词：三疣梭子蟹精子顶体反应激光扫描共聚焦显微镜胞内CA^2+

三疣梭子蟹Sox基因HMG盒的克隆分析被引量：4: 2008年; 利用能扩增人类SRY基因HMG盒的一对简并引物,分别对三疣梭子蟹雌雄个体基因组DNA进行扩增,均得到216 bp和约400 bp的两条带,不存在性别差异,通过PCR-SSCP分析,未发现雌蟹或雄蟹所特有的Sox基因。对216 bp的带进行克隆测序得到6个Sox基因,分别命名为PTSox21、PTSox12、PTSox11a、PTSox11b、PTSox11c和PTSox4。其中,PTSox21、PTSox12和PTSox4氨基酸序列与人类Sox21、Sox12和Sox4基因的同源性分别为90%、66%和63%,PTSox11a、PTSox11b和PTSox11c氨基酸序列均与人类Sox11基因有63%的同源性。此外,PTSox11a和PTSox11b的氨基酸序列之间的同源性达到了98.6%,只在第44位氨基酸残基不同。与其他物种Sox基因氨基酸序列的同源性比较发现,PTSox21与饰纹姬蛙Sox2a有92%的同源性,而PTSox12、PTSox11a、PTSox11b和PTSox11c均与意大利蜜蜂的Sox1有73%的同源性,PTSox4与意大利蜜蜂的Sox1有72%的同源性。; 沈建明朱冬发吴琼; 关键词：三疣梭子蟹 SOX基因 HMG盒克隆分析

三疣梭子蟹精子活力的评价方法被引量：7: 2008年; 采用染色法和钙离子载体A23187诱导精子顶体反应法,对三疣梭子蟹精子的活力进行评价研究。结果表明,采用台盼蓝染色无法清晰辨别死、活精子。采用曙红B染色,精子分别呈现不同的染色特征:活精子无色,细胞边界清晰可辨,在光学显微镜下观察可见顶体中央突起的圆锥状结构和辐射臂;死精子细胞边界有稍许模糊,核杯和顶体均着色。最适的曙红B浓度和染色时间分别为2%和2min。钙离子载体A23187诱导精子顶体反应的结果显示:在诱导时间和A23187浓度分别为50min和30μg.mL-1时,校正顶体反应率达到(92.73±2.43)%。对这两种活力检测方法的比较分析显示,曙红B染色法和钙离子载体A23187诱导精子顶体反应法的活力检测值与样品理论值呈显著正相关(P<0.01),他们二者之间亦呈显著正相关(P<0.01),说明这两种方法均可用于精子活力检测,其结果具有可比性。; 朱冬发周帅; 关键词：三疣梭子蟹精子

激光扫描共聚焦显微镜在海洋动物发育生物学上的应用被引量：1: 2007年; 激光扫描共聚焦显微镜具有成像清晰、获得三维图像、进行多标记观察等优势。本文扼要介绍了激光扫描共聚焦显微镜的原理和特点,着重阐述了激光扫描共聚焦显微镜在海洋动物配子发生;受精过程中细胞内Ca^(2+)变化、肌动蛋白转移和蛋白激酶变化;胚胎和幼体发育的三维成像等研究领域中的应用。并对LSCM在DNA含量、RNA含量等领域的定量、定性前景进行展望。; 沈丽萍朱冬发; 关键词：激光扫描共聚焦显微镜海洋动物发育生物学

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浙江省自然科学基金(Y305339)