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国家级大学生创新创业训练计划(1210559005)
作品数:
1
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相关作者:
王宏
贾彦琼
骆敏儿
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国家级大学生创新创业训练计划
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基于独特型-抗独特型玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA检测方法的建立
被引量:2
2014年
目的建立基于独特型.抗独特型玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)间接竞争ELISA检测方法,并进行验证。方法采用ProteinG亲和层析法纯化ZEN的p型抗独特型单抗1D5(Ab213-1D5)腹水;以ZEN单抗Fab片段包被酶标板,Ab2β-1D5为一抗,建立ZEN的竞争ELISA检测方法,绘制标准抑制曲线,根据回归方程计算半数抑制浓度(IC50),并确定检出限(IC10)及线性范围。以ZEN类似物呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A代替ZEN作为竞争抗原,用建立的方法进行检测,验证方法的特异性;配制6个浓度的ZEN溶液(20、30、40、50、60和75ng/m1),用建立的方法进行检测,计算试验内及试验间回收率和变异系数(CV),验证方法的准确性和精密性。结果Ab2β-1D5单抗的纯化效果较好,浓度为4mg/ml,效价为1:6×104;ZEN单抗Fab片段的最佳包被浓度为1μg/ml。建立的ZEN竞争EHSA检测方法的线性回归方程为:y=-34.099x+81.857,R2=0.9944,IC50为8.60ng/ml,IC10为0.58ng/ml,线性范围为0.58-128.03ng/ml;该方法检测ZEN类似物伏马毒素、赭曲霉素A和呕吐毒素的交叉反应率均小于0.01%;检测不同浓度ZEN的试验内平均回收率在98.65%-113.45%之间,试验间平均回收率在82.96%-98.00%之间;试验内cy值在0.48%。6.40%之间,试验间cy值在0.94%-8.27%之间。结论应用ZEN单抗的Fab片段和ZEN的B型抗独特型单抗建立了ZEN的间接竞争ELISA检测方法,该方法特异性较强,准确性和精密性良好,且成本较低,快速简便,易于标准化,适用于样品的大量筛选。
黄婉君
骆敏儿
钟娜
贾彦琼
向军俭
王宏
关键词:
玉米赤霉烯酮
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