重庆市卫生局科研项目(2011-2-188)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：黄锐张雪梅郑玉琪钱英子尹一兵更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 变形链球菌组氨酸蛋白激酶VicK原核表达、纯化及其蛋白活性检测被引量：2
- 2013年
- 目的原核表达及纯化变形链球菌组氨酸蛋白激酶VicK,并进行蛋白活性的检测。方法以变形链球菌UA159菌株基因组DNA为模板,PCR扩增VicK基因,插入表达载体pET-28a中,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,IPTG(终浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2及0.3 mmol/L)于18及37℃诱导10、15、20 h,表达产物经Ni离子亲和层析柱纯化,采用Kinase-Glo誖激酶发光检测试剂盒检测纯化后目的蛋白的活性。结果重组表达质粒pET-28a-VicK经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组VicK蛋白相对分子质量约51 000;IPTG终浓度0.3 mmol/L,18℃诱导15 h,可溶性目的蛋白的表达量最高;纯化的目的蛋白纯度>90%,浓度为2 mg/ml;随着VicK蛋白浓度的增加,发光值逐渐降低,表明该蛋白具有体外水解ATP的激酶活性。结论已成功原核表达并纯化了变形链球菌具有激酶活性的VicK蛋白,为后续以此为靶点的抑制物的筛选奠定了实验基础。
- 钱英子黄锐李月恒周红郑玉琪张雪梅尹一兵周智
- 关键词：链球菌组氨酸原核细胞纯化激酶活性
